酵母菌細(xì)胞大小的測(cè)定.doc

實(shí)驗(yàn)七 酵母菌細(xì)胞大小的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 了解測(cè)量微生物大小的原理；2. 學(xué)習(xí)并掌握接目測(cè)微尺的校正方法及微生物大小的測(cè)定方法，增強(qiáng)微生物細(xì)胞大小的感性認(rèn)識(shí)。二、實(shí)驗(yàn)材料1. 菌種：啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌懸液2. 儀器或其他用具：顯微鏡，接目測(cè)微尺，鏡臺(tái)測(cè)微尺，載玻片，蓋玻片三、實(shí)驗(yàn)原理微生物細(xì)胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類(lèi)鑒定的依據(jù)之一。微生物細(xì)胞個(gè)體較小，需要在顯微鏡下借助于特殊的測(cè)量工具測(cè)微尺來(lái)測(cè)定其大小。測(cè)微尺包括鏡臺(tái)測(cè)微尺和接目測(cè)微尺。鏡臺(tái)測(cè)微尺是一張中央部分刻有精確等分線的載玻片，專(zhuān)門(mén)用于校定接目鏡測(cè)微尺每小格的相對(duì)長(zhǎng)度。通常，刻度的總長(zhǎng)是1mm，被等分為100格，每格0.01mm（即10m）。鏡臺(tái)測(cè)微尺不直接用來(lái)測(cè)量細(xì)胞的大小。接目測(cè)微尺是一塊可以放入接目鏡的圓形小玻片，其中央有精確的等分刻度，有等分為50小格和100小格的兩種。在測(cè)量時(shí)將接目測(cè)微尺放在目鏡的隔板上，即可來(lái)測(cè)量經(jīng)顯微鏡放大后的細(xì)胞物象。也有專(zhuān)用的目鏡，里面已經(jīng)安放好了接目測(cè)微尺。由于接目測(cè)微尺所測(cè)量的是經(jīng)顯微鏡放大后的細(xì)胞物象，因此，在不同的顯微鏡或不同的目鏡和物鏡組合放大倍數(shù)不同，接目鏡測(cè)微尺每一小格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度也不一樣。所以，在用接目測(cè)微尺測(cè)量微生物大小之前，必須先用鏡臺(tái)測(cè)微尺校定接目鏡測(cè)微尺，以確定該顯微鏡在特定放大倍數(shù)的目鏡和物鏡下，接目鏡測(cè)微尺每一小格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度，然后根據(jù)微生物細(xì)胞相當(dāng)于的接目鏡測(cè)微尺格數(shù)，計(jì)算出微生物細(xì)胞的實(shí)際大小。圖7-1測(cè)微尺的安裝 圖7-2目鏡測(cè)微尺 圖7-3用鏡臺(tái)測(cè)微尺校正接目測(cè)微尺四、操作步驟1. 裝接目測(cè)微尺：取下顯微鏡的目鏡，換上專(zhuān)用目鏡。如果沒(méi)有專(zhuān)用的目鏡，則取下顯微鏡的目鏡，旋下透鏡，將接目鏡測(cè)微尺刻度朝下放在接目鏡的隔板上，再旋上目鏡透鏡，將裝有測(cè)微尺的目鏡裝回鏡筒。2. 接目測(cè)微尺的標(biāo)定：1) 放鏡臺(tái)測(cè)微尺：將鏡臺(tái)測(cè)微尺刻度面朝上固定在顯微鏡的載物臺(tái)上，注意不可放反。2) 標(biāo)定：將低倍鏡轉(zhuǎn)入光路，鏡臺(tái)測(cè)微尺有刻度的部分移至視野中央，調(diào)節(jié)焦距，當(dāng)清晰地看到鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡使接目測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度相平行。利用移動(dòng)鈕移動(dòng)鏡臺(tái)測(cè)微尺，使兩尺在某一區(qū)域內(nèi)兩線完全重合，然后分別數(shù)出兩重合線之間鏡臺(tái)測(cè)微尺和接目測(cè)微尺所占的格數(shù)。（使接目測(cè)微尺的一條刻度線與鏡臺(tái)測(cè)微尺的一條刻度線相重合，再尋另一重合線，分別數(shù)出其間鏡臺(tái)測(cè)微尺和接目測(cè)微尺所占的格數(shù)）3) 用同樣的方法，在高倍鏡下對(duì)接目測(cè)微尺進(jìn)行標(biāo)定。（觀察時(shí)光線不宜過(guò)強(qiáng)，否則難以找到鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度，換高倍鏡標(biāo)定時(shí)，務(wù)必十分細(xì)心，防止接物鏡壓壞鏡臺(tái)測(cè)微尺和損壞鏡頭）4) 計(jì)算：已知鏡臺(tái)測(cè)微尺每格長(zhǎng)10m，根據(jù)下列公式即可分別計(jì)算出在不同放大倍數(shù)下，接目測(cè)微尺每格所代表的長(zhǎng)度。接目測(cè)微尺每格長(zhǎng)度（m）=10n/mn：兩重合線間鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)m：兩重合線間接目測(cè)微尺格數(shù)3. 微生物細(xì)胞大小的測(cè)量接目測(cè)微尺標(biāo)定完畢后，取下鏡臺(tái)測(cè)微尺，換上微生物標(biāo)本片，將其固定在載物臺(tái)上，先用低倍鏡找到標(biāo)本片圖象，然后根據(jù)不同的微生物對(duì)象分別轉(zhuǎn)換到高倍鏡下，用接目測(cè)微尺測(cè)量微生物細(xì)胞的直徑或?qū)捄烷L(zhǎng)所占的格數(shù)，再依據(jù)所標(biāo)定的高倍鏡每一格的實(shí)際長(zhǎng)度計(jì)算細(xì)胞的實(shí)際大小。通常測(cè)定對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌體來(lái)代表該菌的大小，為了盡量減小實(shí)驗(yàn)誤差，應(yīng)在同一標(biāo)本片上測(cè)量1020個(gè)細(xì)胞，取其平均值作為該菌的大小。維護(hù)：測(cè)量完畢，換上原有顯微鏡目鏡（或取出接目測(cè)微尺，目鏡放回鏡筒），用擦鏡紙將測(cè)微尺擦拭干凈后放回盒內(nèi)保存，并按照顯微鏡的使用和維護(hù)方法擦拭物鏡。五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1. 分別在低倍鏡、高倍鏡下對(duì)接目測(cè)微尺進(jìn)行標(biāo)定。2. 高倍鏡下測(cè)定釀酒酵母細(xì)胞的大小。六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1. 目鏡測(cè)微尺標(biāo)定結(jié)果：低倍鏡下倍目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度是m。高倍鏡下倍目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度為m。2. 菌體大小測(cè)