麻醉學(xué)研究生開題報(bào)告.doc

大連大學(xué)研究生學(xué)位論文開題報(bào)告學(xué) 號(hào)： 姓 名： 導(dǎo)師姓名： 研究方向：羥考酮的藥效學(xué)與藥代動(dòng)力學(xué)論文題目：羥考酮對小鼠全腦缺血再灌注損傷干預(yù)效果的影響院（系）：麻醉學(xué)系入學(xué)時(shí)間： 2007年 9 月 5日開題時(shí)間： 2008年 11月 5日二八年十一月五日學(xué)位論文開題報(bào)告評(píng)審表姓 名 導(dǎo)師姓名 第一次開題專 業(yè)麻醉學(xué)所屬院（系）麻醉學(xué)系類 別博士 碩士 碩博連讀論文選題題目名稱不同時(shí)間甘露醇脫水對小鼠腦缺血再灌注損傷干預(yù)效果的影響性質(zhì)（）基礎(chǔ)理論研究（） 應(yīng)用性研究（） 開發(fā)性研究（）類別（）國家項(xiàng)目（ ） 合作項(xiàng)目（ ） 省（部）項(xiàng)目（ ）自選項(xiàng)目（ ） 其它項(xiàng)目：姓 名職 稱工作單位及職務(wù)簽字組長評(píng)審組成員總成績 票同意 票不同意綜合分均分：評(píng)審意見（含：選題意義；實(shí)驗(yàn)條件；技術(shù)方案可行性；研究計(jì)劃合理性等）評(píng)審組長簽字： 年 月 日注：一半以上不同意或評(píng)價(jià)綜合分低于C+（70分）者，必須重新開題一、立論依據(jù)（包括研究意義、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析，并附主要參考文獻(xiàn)及出處）（一） 研究意義臨床麻醉中各種原因引起圍術(shù)期的心肺功能受損，如心跳驟停、急性呼吸道梗阻等，都會(huì)不同程度的存在腦缺血再灌注損傷。麻醉期間意外發(fā)生率為5.244.3/萬，猝死率為2.87.0/萬1。急救過程中，腦復(fù)蘇環(huán)節(jié)是保證遠(yuǎn)期復(fù)蘇效果的關(guān)鍵?，F(xiàn)階段大多數(shù)對腦缺血再灌注損傷干預(yù)措施的研究集中于缺血再灌注損傷發(fā)生前的預(yù)處理，報(bào)道對腦缺血再灌注損傷有預(yù)防作用的涉及地氟烷2、異氟烷3、異丙酚4、氯胺酮5等等眾多臨床常用藥物。由于臨床意外難以預(yù)見，及在腦缺血再灌注后死亡細(xì)胞和凋亡細(xì)胞的不可逆性，預(yù)處理的思路常常無助于臨床意外中對腦損傷的治療。我們認(rèn)為改善缺血再灌注后腦的功能，應(yīng)該積極關(guān)注腦缺血再灌注后的變性神經(jīng)元，建立穩(wěn)定，可靠，適用于對腦缺血再灌注損傷后變性神經(jīng)元救治實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物模型具有探索價(jià)值。 羥考酮主要作用部位是中樞神經(jīng)系統(tǒng), 其次是平滑肌, 其藥理作用主要是鎮(zhèn)痛, 其他還包括鎮(zhèn)咳、縮瞳、惡心、嘔吐、瘙癢、呼吸抑制、胃腸蠕動(dòng)降低等。研究認(rèn)為羥考酮的鎮(zhèn)痛作用可能與、受體有關(guān) , 盡管其精確作用機(jī)制現(xiàn)在還不明確, 但現(xiàn)已確定羥考酮產(chǎn)生呼吸抑制是通過直接作于腦干呼吸中心, 其鎮(zhèn)咳是通過直接作用于髓鞘咳嗽中心而起作用 。羥考酮精神依賴性的形成與紋狀體多巴胺釋放量增加有關(guān) 。（二）國內(nèi)外研究現(xiàn)狀1 腦缺血再灌注損傷的機(jī)制 一般認(rèn)為在生理情況下，神經(jīng)元以氧化磷酸化的方式提供足夠的ATP維持細(xì)胞的正常代謝活動(dòng)。缺血時(shí)，氧和葡萄糖供應(yīng)停止，能量代謝先受累，此時(shí)神經(jīng)元以無氧酵解的方式可提供少量ATP以維持細(xì)胞完整性。但由于無氧酵解過程中產(chǎn)生過量乳酸，使細(xì)胞酸中毒，而神經(jīng)遞質(zhì)的合成、釋放和攝取均受PH的影響，因而神經(jīng)元的功能遭到破壞。例如能量障礙引起Na+丟失，使突觸前膜去極化，導(dǎo)致興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸釋放增加，又由于酸中毒使谷氨酸攝取受阻，突觸隙內(nèi)有谷氨酸堆積，通過大量激活其NMDA受體，致Ca2+內(nèi)流增加，胞內(nèi)鈣超載，但此時(shí)依賴能量的離子泵Ca2+受損，無法將Ca2+排出胞外，細(xì)胞內(nèi)過量的Ca2+引發(fā)一系列生化反應(yīng)，如自由基及過氧化物生成，細(xì)胞因子釋放及炎癥反應(yīng)等，最終造成對神經(jīng)元的損害，但其中許多環(huán)節(jié)尚未闡明，有待更多學(xué)者的進(jìn)一步研究。62目前關(guān)注的腦保護(hù)的方法有：（1） 低溫7；（2） 麻醉藥物的應(yīng)用（包括吸入麻醉藥、靜脈麻醉藥及某些局麻藥）8；（3） 血液稀釋；（4） 離子通道阻滯藥、自由基和脂質(zhì)過氧化酶抑制劑9；（5） 預(yù)處理，包過藥物預(yù)處理和缺血預(yù)處理10；（6） 中藥參附注射液、川穹嗪等113羥考酮與腦缺血再灌注損傷正常時(shí)海馬結(jié)構(gòu)包括：連合前海馬、灰被、束狀回、海馬、齒狀回以及下托。海馬可分為四個(gè)區(qū)：CA1:海馬水平部的背內(nèi)側(cè)部分和垂直部的后內(nèi)側(cè)部分；CA2：海馬水平部的背外側(cè)部分和垂直部的前外側(cè)部分；CA3：海馬水平部的腹外側(cè)部分和垂直部的前內(nèi)側(cè)部分；CA4：冠以齒狀回的部分，即齒狀回的多形細(xì)胞層。從海馬的腦室面向海馬溝觀察，可見下列層次：室管膜層、槽層、多行細(xì)胞層、椎體細(xì)胞層、輻狀層、腔隙層和分子層；再向外則是齒狀回的分子層、顆粒層和多行細(xì)胞層。正常海馬CA1區(qū)2-3層錐體細(xì)胞，胞體短徑10-20m，長徑20-30m，細(xì)胞排列緊密，層次分明，核大而圓，核膜完整，核仁清晰，核染色質(zhì)均勻12。國內(nèi)有報(bào)道沙土鼠缺血再灌注后CA1區(qū)多數(shù)神經(jīng)元變形壞死，表現(xiàn)細(xì)胞腫脹，胞漿內(nèi)形成空泡，核呈不規(guī)則固縮，深染等，甘露醇治療組僅有個(gè)別神經(jīng)元變性壞死?？梢姀男螒B(tài)學(xué)角度說明甘露醇有神經(jīng)元保護(hù)作用。但這方面小鼠的實(shí)驗(yàn)報(bào)道不多。4目前常見的全腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ停?（1）雙動(dòng)脈阻斷法（同時(shí)阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈和基底動(dòng)脈）13 （2）三動(dòng)脈阻斷法（同時(shí)阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈和基底動(dòng)脈）14 （3）四動(dòng)脈阻斷法（同時(shí)阻斷雙側(cè)的頸總動(dòng)脈和椎動(dòng)脈）15 三動(dòng)脈阻斷法和四動(dòng)脈阻斷法的缺血程度較雙動(dòng)脈阻斷法為重，再灌注后的腦組織也會(huì)不同程度的產(chǎn)生梗死灶，梗死灶周邊的變性細(xì)胞或散在分布，或和梗死灶重疊，不能形成較好的觀察區(qū)域。 雙動(dòng)脈阻斷法建立小鼠全腦缺血再灌注損傷模型，用激光多譜勒灌注監(jiān)測儀測定，在缺血后10 min腦皮質(zhì)血流為缺血前腦皮質(zhì)血流的22.3%16, 接近大多數(shù)臨床意外時(shí)腦缺血的情況，且對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成的應(yīng)激性生理及病理反射較小17。實(shí)驗(yàn)觀察了昆明小鼠雙頸總動(dòng)脈阻斷30120 min再灌注24 h后的腦缺血再灌注損傷效果，通過分析海馬CA1區(qū)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，認(rèn)為昆明小鼠缺血60 min再灌注24 h造成的損傷程度適中，不同程度的受損細(xì)胞比例均衡，可作為以變性神經(jīng)元為觀察對象，在腦缺血后實(shí)施干預(yù)的腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型，相對于其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及模型制作方法，具有成本低廉、操作簡便、重復(fù)性好的特點(diǎn)。在此實(shí)驗(yàn)動(dòng)物平臺(tái)上分別成功的進(jìn)行了腦缺血再灌注損傷后納洛酮和皮質(zhì)激素干預(yù)效果的觀察和評(píng)價(jià)。 本課題就是在上述同學(xué)的工作基礎(chǔ)上，進(jìn)一步完成腦缺血再灌注損傷后不同時(shí)間甘露醇脫水治療的效果評(píng)價(jià)和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察。 【主要參考文獻(xiàn)】1 王玉明，李小平，李江明.麻醉與猝死.北京軍區(qū)醫(yī)藥J.1999,11(5):365-3682 羅芳，候麗賢，王恩真,等.地氟烷對全腦缺血再灌注損傷大鼠腦神經(jīng)元及細(xì)胞骨架的可能性保護(hù)作用.中國臨床康復(fù)J.2005,9(14):2153 孫永海，岳云，王云.異氟烷預(yù)處理對大鼠全腦缺血損傷的保護(hù)作用及遞質(zhì)機(jī)制.軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào)J.2005,26(5):392-3944 郭建榮，崔健君，黃長順,等.異丙酚對腦缺血再灌注損傷大鼠海馬組織細(xì)胞間黏附分子-1及核轉(zhuǎn)錄因子-B表達(dá)的影響.中華麻醉學(xué)雜志J.2005,25(2):122-1255 范圣登，謝紅，王明才,等.氯胺酮對大鼠全腦缺血再灌注損傷的預(yù)防與治療作用.江蘇醫(yī)藥雜志J.2003,29(10):741-7426 彭靜，鄢建勤.烏司他丁與腦保護(hù)，2007麻醉學(xué)新進(jìn)展，2007：46477 包正夫, 徐蔚. 低溫腦保護(hù)技術(shù)的現(xiàn)狀與進(jìn)展 J . 昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,24 (1) : 1071098 陳伯蠻李德馨. 麻醉藥對腦功能和腦代謝的影響和腦保護(hù) J . 國外醫(yī)學(xué)麻醉學(xué)與復(fù)蘇分冊，2003，24(1)：129 曲友直，高國棟，趙振偉等. 甘露醇、尼莫地平及其兩藥聯(lián)合應(yīng)用對腦缺血大鼠神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制研究 J . 中國臨床康復(fù)，2004，8（4）：65865910 甘國勝, 王焱林. 藥物預(yù)處理在顱腦手術(shù)圍術(shù)期的腦保護(hù)作用的研究進(jìn)展 J . 中國誤診學(xué)雜志,2006 ,6 (8):1443144511 王瑜. 中藥治療腦缺血及對腦保護(hù)作用的研究 J . 中醫(yī)藥學(xué)刊，2 0 0 2 ，2 012 王平宇，朱治遠(yuǎn)，等大白鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)解剖學(xué)基礎(chǔ)2003：343913 EklofB, Siesjo BK. The effect of bilateral carotid artery ligation upon the blood flow and the energy state ofthe rat brain J . Acta Physiol Scand, 1972, 86:155165.14 Kameyama M, Suzuki J , Shirane R, et al. A new model of bilateral hemispheric ischemia in the rat three vessel occlusion model J . Stroke, 1985,16: 489493.15 PulsinelliWA, Brierley JB. A new model of bilateral hemispheric ischemia in the unanesthetized rat J .Stroke, 1979, 10: 267272.16 盧曉梅,金玉梅. 燈盞花素對小鼠腦缺血再灌注損傷的影響J. 錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,27(1):44-4617 賈棟，高國棟.大鼠全腦缺血/再灌注模型之比較研究.卒中與神經(jīng)疾病J.1999,6(3):145-148二、研究方案（一）研究目標(biāo)、研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題1. 研究目標(biāo)探索不同時(shí)間羥考酮處理對小鼠全腦缺血再灌注損傷干預(yù)效果的影響。 2. 研究內(nèi)容（1）光鏡下觀察正常小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)表現(xiàn) （2）光鏡下觀察不同處理組小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的病理形態(tài)學(xué)變化 （3）光鏡下觀察不同時(shí)間甘露醇干預(yù)后的小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的病理形態(tài)學(xué)變化 3. 擬解決的關(guān)鍵問題（1）按照郗東峰同學(xué)的方法建立小鼠腦缺血再灌注損傷模型。 （2）準(zhǔn)確完成不同時(shí)間的甘露醇干預(yù)（3）完整取腦，正確選取觀察部位的腦組織。（4）客觀描述病理形態(tài)學(xué)標(biāo)本所見（5）準(zhǔn)確統(tǒng)計(jì)病理形態(tài)學(xué)指標(biāo)（6）適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)處理，導(dǎo)出實(shí)驗(yàn)結(jié)論（二）擬采取的研究方法、技術(shù)路線、實(shí)驗(yàn)方案及可行性分析 1. 研究方法健康昆明小鼠42只，隨機(jī)分為對照組、假手術(shù)組、缺血再灌注損傷組和羥考酮干預(yù)組。按照結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈法制備小鼠腦缺血再灌注損傷模型。進(jìn)行腦組織海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞計(jì)數(shù)，光鏡觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元病理形態(tài)學(xué)的改變，并計(jì)算變性細(xì)胞率。2. 技術(shù)路線取腦組織固定、石蠟包埋切片對照組(n=6)健康昆明小鼠42只再灌注1.5h羥考酮干預(yù)組(n=6)再灌注1h羥考酮干預(yù)組(n=6)再灌注30min羥考酮干預(yù)組(n=6)假手術(shù)組(n=6)缺血再灌注損傷組(n=6)再灌注即刻羥考酮干預(yù)組(n=6)再灌注24h后取腦組織固定、石蠟包埋切片數(shù)據(jù)處理、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析、得出結(jié)論HE染色光鏡細(xì)胞計(jì)數(shù)、形態(tài)學(xué)觀察3 實(shí)驗(yàn)方案（1） 實(shí)驗(yàn)分組：健康昆明小鼠42只（山西省腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），雌雄不分，體重202克左右，隨機(jī)分為對照組（A組，n=6）、假手術(shù)組（B組，n=6）、缺血再灌注損傷組（C組，n=6）和再灌注即刻羥考酮干預(yù)組（D1組，n=6） 、再灌注30min羥考酮干預(yù)組（D2組，n=6） 、再灌注1h羥考酮干預(yù)組（D3組，n=6）和再灌注1.5h羥考酮干預(yù)組 （D4組，n=6）。D組給予羥考酮1g/kg腹腔注射。 （2） 動(dòng)物模型制備：手術(shù)在室溫25、濕度50%的條件下進(jìn)行。用0.6%的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉（60mg/kg），絡(luò)合碘消毒，鋪單，行頸部正中切口，分離兩側(cè)頸總動(dòng)脈，用3-0絲線打活結(jié)阻斷頸總動(dòng)脈，1h后實(shí)現(xiàn)再灌注?？p合切口，置清潔飼養(yǎng)籠中觀察。 A組既不手術(shù)也不給藥。 B組只分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，穿線，但不結(jié)扎。 C組分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，結(jié)扎 1h后再灌注，但不給藥。 D1 、 D2 、 D3 、 D4組分別在再灌注即刻、30min、1h和1.5h腹腔注射甘露醇1g/kg。各組再灌注24h后0.6%戊巴比妥鈉（90mg/kg）腹腔注射麻醉，迅速取腦。（3） 檢查指標(biāo)和方法標(biāo)本置于4%多聚甲醛液中固定24h后，取視交叉后的組織，常規(guī)石蠟包埋，冠狀切片，片厚5m,蘇木精-伊紅染色（HE染色），光鏡下在有測微尺顯微鏡下（10）計(jì)數(shù)海馬CA1區(qū)2mm范圍內(nèi)核完整的存活細(xì)胞數(shù)（自CA1區(qū)始點(diǎn)起），并觀察海馬CA1區(qū)細(xì)胞形態(tài)變化，并計(jì)算變性細(xì)胞率。（4） 統(tǒng)計(jì)分析：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用單因素方差分析，組間進(jìn)行多重比較，各組變性細(xì)胞率用X2檢驗(yàn)比較，SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件分析，P0.05認(rèn)為有顯著性差異。4. 可行性分析：（1）2005級(jí)研究生吳曉陽已經(jīng)建立了穩(wěn)定的小鼠全腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ汀?006級(jí)研究生田彥鵬在此實(shí)驗(yàn)動(dòng)物平臺(tái)上分別成功的進(jìn)行了腦缺血再灌注損傷后納洛酮和皮質(zhì)激素干預(yù)效果的觀察和評(píng)價(jià)。（2）本實(shí)驗(yàn)參考大量相關(guān)文獻(xiàn)。（3）實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)已落實(shí)。（三）本課題的創(chuàng)新之處（1）國內(nèi)多數(shù)報(bào)道的是腦缺血再灌注損傷前的藥物干預(yù)，以梗死和凋亡為觀察指標(biāo)。本課題利用小鼠腦缺血再灌注損傷模型，再灌注后采用甘露醇干預(yù)，以變性細(xì)胞為觀察指標(biāo)。（2）本課題通過觀察不同時(shí)相應(yīng)用甘露醇后的效果，為臨床應(yīng)用尋找合適的時(shí)間，從而為臨床心肺腦復(fù)蘇提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。（四）研究計(jì)劃及預(yù)測進(jìn)展2015年7月2015年11月 文獻(xiàn)檢索及撰寫綜述2015年12月2016年2月 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、預(yù)實(shí)驗(yàn)2016年3月2017年6月 實(shí)驗(yàn)階段2017年7月2017年9月 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理、論文撰寫（五）.預(yù)期研究成果（1）以形態(tài)學(xué)為依據(jù)，證明羥考酮再灌注后干預(yù)可改善小鼠腦缺血再灌注損傷，起到腦保護(hù)的作用，而且羥考酮干預(yù)的時(shí)間應(yīng)該是越早越好，為臨床救治過程中的心肺腦復(fù)蘇的藥物治療提供了理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。（2）預(yù)期提交學(xué)術(shù)論文1-2篇。 三、研究基礎(chǔ)1. 與本課題有關(guān)的，前期研究工作積累和已取得的研究工作成績已閱讀大量國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，并撰寫了有關(guān)綜述。基本掌握實(shí)驗(yàn)所需的各項(xiàng)操作技能及各項(xiàng)指標(biāo)的測量方法。前期的研究工作是成功建立了兩動(dòng)脈阻斷法小鼠前腦缺血再灌注損傷模型，該方法簡單易行，成功率高，并用羥考酮、納洛酮和皮質(zhì)激素干預(yù)的效果證實(shí)了此實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的有效性。2. 已具備的實(shí)驗(yàn)條件，尚缺少的實(shí)驗(yàn)條件和擬解決的途徑（包括利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和部門開放實(shí)驗(yàn)室的計(jì)劃與落實(shí)情況）（1）學(xué)術(shù)條件導(dǎo)師和實(shí)驗(yàn)室的老師具有豐富的學(xué)識(shí)、寶貴的經(jīng)驗(yàn)，可以提供技術(shù)指導(dǎo)。圖書館可獲得大量文獻(xiàn)資料。統(tǒng)計(jì)學(xué)、及其他教研室的老師可以給予指導(dǎo)。（2）設(shè)備和實(shí)驗(yàn)條件大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心可提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備。研究生開題報(bào)告評(píng)分表姓 名郭文義學(xué) 號(hào)Sc2007122導(dǎo)師姓名趙嘉訓(xùn)院（系）麻醉學(xué)系教 研 室麻醉第一次開題論文題目不同時(shí)間甘露醇脫水對小鼠腦缺血再灌注損傷干預(yù)效果的影響評(píng)價(jià)內(nèi)容評(píng)價(jià)參考打分標(biāo)準(zhǔn)參考分?jǐn)?shù)立論依據(jù)研究意義l 有重要科學(xué)意義或國民經(jīng)濟(jì)建設(shè)中的重要科技問題l 對學(xué)科發(fā)展有促進(jìn)或有應(yīng)用前景l(fā) 屬一般問題l 科學(xué)意義或應(yīng)用前景不大10842學(xué)術(shù)思想l 有明顯的創(chuàng)新l 有一定的創(chuàng)新和特色l 創(chuàng)新性不強(qiáng)l 無創(chuàng)新151262立項(xiàng)依據(jù)（博士生可附查新報(bào)告）l 充分，科學(xué)性強(qiáng)l 較充分，科