樣品的采集和處理

第一章 樣品的采集和處理 1 1 范圍范圍 本章規(guī)定了用于人免疫缺陷病毒 HIV 檢測的全血 血清 血漿 細(xì)胞 唾液 尿液以及濾紙干血 斑 DBS 樣品的采集和處理方法 適用于 HIV 抗體檢測 抗原檢測 核酸檢測 耐藥檢測 CD4 和 CD8 T 淋巴細(xì)胞測定和 HIV 分離培養(yǎng) 2 2 規(guī)范性引用文件規(guī)范性引用文件 艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn) 中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) WS 293 2008 艾滋病病毒感染者及艾滋病患者 CD4 T 淋巴細(xì)胞檢測質(zhì)量保證指南 試行 中國疾病預(yù)防控 制中心 2006 年 2 月 HIV 1 病毒載量測定及質(zhì)量保證指南 試行 中國疾病預(yù)防控制中心 2008 年 2 月 Guidelines for Using HIV Testing Technologies in Surveillance WHO CDS CSR EDC 2008 可感染人類的高致病性病原微生物菌 毒 種或樣本運輸管理規(guī)定 衛(wèi)生部第 45 號令 2006 年 2 月 1 日 3 3 樣品種類及相應(yīng)的用途樣品種類及相應(yīng)的用途 3 1 全血 血清 血漿 唾液 尿液以及 DBS 樣品可用于 HIV 抗體檢測 3 2 抗凝全血可用于 CD4 和 CD8 T 淋巴細(xì)胞測定 3 3 血漿可用于 HIV 1 病毒載量 基因型及耐藥檢測 DBS 樣品可用于 HIV 1 基因型及耐藥檢測 3 4 全血 血漿 淋巴細(xì)胞富集液 外周血淋巴細(xì)胞 PBMC 及 DBS 樣品可用于 HIV 核酸的定性檢 測 3 5 PBMC 全血 淋巴細(xì)胞富集液等可用于 HIV 1 分離培養(yǎng) 4 4 操作步驟操作步驟 4 1 采樣前準(zhǔn)備 根據(jù)檢測項目的具體要求 確定采集樣品的種類 處理 保存及運輸?shù)臅r限和方法 按照臨床采血 技術(shù)規(guī)范的要求操作 遵守生物安全要求 參見本規(guī)范第八章實驗室生物安全 要檢查所需物品是否已備齊 是否在有效期內(nèi) 有無破損 是否足量 特別應(yīng)檢查受檢者信息與樣 品容器表面的標(biāo)記是否一致 并注明樣品采集時間 選擇合適的室內(nèi) 外 采血空間 受檢者坐 臥 于合適的位置 準(zhǔn)備采血用具 皮膚消毒用品 采血管及試管架 硬質(zhì)廢棄物容器等 4 1 1 樣品的編碼和記錄 4 1 2 應(yīng)制定樣品編碼的標(biāo)準(zhǔn)操作程序 SOP 規(guī)定樣品編碼的原則和方法 為樣品制定唯一性編 碼 編號 保證其唯一性 4 1 3 采血前 先對裝有樣品的離心管或濾紙進(jìn)行標(biāo)記 核對后編碼 要將標(biāo)簽貼在試管的側(cè)面 最好使用預(yù)先印制好的 專門用于冷凍儲存的耐低溫標(biāo)簽 4 1 4 應(yīng)使用專門的樣品記錄本或登記表記錄樣品 同時錄入電腦保存 4 2 采集和處理樣品 4 2 1 血液 4 2 1 1 抗凝全血 消毒局部皮膚 用加有抗凝劑 EDTA 鈉鹽或鉀鹽 枸櫞酸鈉 肝素鈉 的真空 采血管抽取適量靜脈血 或用一次性注射器抽取靜脈血 轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管中 輕輕顛倒混 勻 6 8 次 備用 4 2 1 2 末梢全血 消毒局部皮膚 成人和 1 歲以上兒童可選擇耳垂 中指 無名指或食指 1 歲 以下兒童采用足跟部 用采血針刺破皮膚 用無菌紗布擦掉第一滴血 收集滴出的血液 備用 4 2 1 3 血漿 將采集的抗凝全血 1500 3000r min 離心 15min 上層即為血漿 吸出置于合適的 容器中 備用 4 2 1 4 血清 根據(jù)需要 用一次性注射器 或真空采血管 抽取 5 10ml 靜脈血 室溫下自然放 置 1 2h 待血液凝固 血塊收縮后再用 1500 3000r min 離心 15min 吸出血清 置于合適的容器 中 備用 4 2 1 5 淋巴細(xì)胞富集液 將采集的抗凝全血 1500 3000r min 離心 15min 吸取血漿層下的淋巴 細(xì)胞富集液 置于合適的容器中 備用 4 2 1 6 PBMC 使用淋巴細(xì)胞分離液 進(jìn)行密度梯度離心 吸出 PBMC 層 備用 4 2 1 7 根據(jù)檢測要求選用適當(dāng)?shù)目鼓齽?如 CD4 和 CD8 T 淋巴細(xì)胞測定可選用 EDTA 鈉鹽或鉀鹽 枸櫞酸鈉 肝素鈉 HIV 病毒分離 核酸定性 定量檢測可選用 EDTA 鈉鹽或鉀鹽或枸櫞酸鈉 4 2 1 8 樣品采集后處理 保存 運輸?shù)臅r限和條件 因不同的檢測項目而異 應(yīng)參見不同檢測項 目要求 4 2 1 9 采血完成后的穿刺針頭必須丟棄于尖銳危險品容器里 妥善處理 防止發(fā)生職業(yè)暴露 4 2 2 濾紙干血斑 4 2 2 1 根據(jù)需要 可將采集的各種血液樣品制備成濾紙干血斑 保存 運輸及檢測 最常用的是 用抗凝全血 末梢全血和血漿制備濾紙干血斑 4 2 2 2 用移液器從樣品管中吸取 100 L 抗凝全血 或血漿 樣品 對準(zhǔn)濾紙印圈的中心處 將樣 品滴在濾紙上 或?qū)⒋┐毯笞云つw傷口流出的末梢全血直接滴加在濾紙印圈的中心處 4 2 2 3 根據(jù)需要 連續(xù)在數(shù)個印圈上滴加樣品 4 2 2 4 于室溫下自然干燥至少 4 小時 潮濕氣候下至少干燥 24 小時 不要加熱或堆疊血斑 勿 與其它界面接觸 4 2 2 5 血斑充分干燥后 將其放入密封袋中 避免血斑之間的相互污染 同時放入干燥劑及濕度 指示卡 密封包裝 保存?zhèn)溆?4 2 3 尿液和唾液 4 2 3 1 尿液 使用清潔的容器收集尿液 女性應(yīng)避開月經(jīng)期 尿液樣品可以在 2 8 下存放 存 放時間 是否凍存以及是否添加防腐劑以試劑盒說明書為準(zhǔn) 4 2 3 2 唾液 使用試劑盒提供的容器收集唾液樣品 存放時間和是否凍存以試劑盒說明書為準(zhǔn) 4 3 樣品的保存 4 3 1 用于抗體和抗原檢測的血清或血漿樣品 短期 1 周 內(nèi)進(jìn)行檢測的可存放于 2 8 一周 以上應(yīng)存放于 20 以下 4 3 2 用于核酸檢測的血漿和血細(xì)胞樣品 4 天內(nèi)進(jìn)行檢測的可存放于 4 3 個月以內(nèi)應(yīng)存放于 20 以下 3 個月以上應(yīng)置于 70 以下 4 3 3 艾滋病檢測篩查實驗室檢測的篩查陽性樣品應(yīng)及時送確證實驗室 篩查陰性樣品 可根據(jù)具 體需要決定保存時間 建議至少保存 1 2 個月 特殊用途或?qū)ｍ楉椖康臉悠犯鶕?jù)具體要求確定保存 時間 4 3 4 艾滋病檢測確證實驗室收到的篩查陽性樣品 無論確證結(jié)果如何 均應(yīng)將剩余的樣品保存至 少 10 年 特殊用途或?qū)ｍ楉椖康臉悠犯鶕?jù)具體要求確定保存時間 4 4 樣品的運送 4 4 1 應(yīng)符合生物安全要求 要獲得相應(yīng)部門批準(zhǔn)并由具有資質(zhì)的人員專程護送 4 4 2 應(yīng)采用三層容器對樣品進(jìn)行包裝 隨樣品應(yīng)附有與樣品唯一性編碼相對應(yīng)的送檢單 送檢單 應(yīng)標(biāo)明受檢者姓名 樣品種類等信息 并應(yīng)放置在第二層和第三層容器之間 4 4 2 1 第一層容器 直接裝樣品 應(yīng)防滲漏 樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi) 試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記 標(biāo)明樣品的唯一性編碼或受檢者姓名 種類和采集時間 在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料 以免 碰碎 4 4 2 2 第二層容器 容納并保護第一層容器 可以裝若干個第一層容器 要求不易破碎 帶蓋 防滲漏 容器的材料要易于消毒處理 4 4 2 3 第三層容器 容納并保護第二層容器的運輸用外層包裝箱 外面要貼上醒目的標(biāo)簽 注明 數(shù)量 收樣和發(fā)件人及聯(lián)系方式 同時要注明 小心輕放 防止日曬 小心水浸 防止重壓 等字 樣 還應(yīng)易于消毒 4 4 2 4 用于抗體檢測的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運送 用于 CD4 和 CD8 T 淋巴細(xì)胞測定的 樣品應(yīng)在室溫下 18 25 或 4 特殊要求時 運送 用于病毒載量檢測的樣品應(yīng)在 20 以下 運輸 DBS 樣品應(yīng)在室溫下 18 25 運送 每一件包裝的體積以不超過 50mL 為宜 4 4 2 5 運送樣品必須有記錄 4 4 2 6 特殊情況下經(jīng)有關(guān)部門批準(zhǔn)可以用特快專遞郵寄樣品 但必須按三層包裝 將樣品管包扎 好 嚴(yán)禁使用玻璃容器 4 5 樣品的接收 4 5 1 樣品包裹必須在具有處理感染性材料能力的實驗室內(nèi) 由經(jīng)過培訓(xùn)的 穿戴防護衣 戴口罩 防護眼鏡的工作人員在生物安全柜中打開 用后的包裹應(yīng)及時進(jìn)行消毒 4 5 2 核對樣品與送檢單 檢查樣品管有無破損和溢漏 如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出 對樣品管和盛器消毒 同時報告實驗室負(fù)責(zé)人和上一級實驗室技術(shù)人員 4 5 3 檢查樣品的狀況 記錄有無嚴(yán)重溶血 微生物污染 血脂過多以及黃疸等情況 如果污染過 重或者認(rèn)為樣品不能被接受 應(yīng)將樣品安全廢棄 并將樣品情況立即通知送樣人 4 5 4 接收樣品時應(yīng)填寫樣品接收單 1 樣品采集 1 1 血清樣品采集 用注射器抽出 3 毫升靜脈血 室溫下自然放置 1 2 小時 待血液凝固和血塊收縮 后離心 15 分鐘 吸出血清備用 1 2 抗凝血樣品采集 用加有抗凝劑的真空采血管抽取靜脈血 轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管 反復(fù)輕 搖 分離血漿和血細(xì)胞備用 應(yīng)根據(jù)實驗要求選用適當(dāng)?shù)目鼓齽?EDTA 肝素 枸橡酸鈉等 如需 進(jìn)行病毒 RNA 測定 應(yīng)在 48 小時以內(nèi)分離血漿 1 3 采樣注意事項 1 3 1 臨床采血技術(shù)規(guī)范及試劑說明書要求進(jìn)行 1 3 2 注意安全 直接接觸 HIV 感染者或艾滋病病人血液和體液的操作應(yīng)戴雙層手套 建議采用真空 采血管及蝶形針具 以免直接接觸血液 2 樣品的保存 2 1 用于抗體檢測的血清或血漿樣品應(yīng)存放于 20 以下 短期 1 周 內(nèi)進(jìn)行檢測的樣品可存放于 2 8 2 2 用于抗原和核酸檢測的血漿和血細(xì)胞樣品應(yīng)凍存于 20 以下 進(jìn)行病毒 RNA 檢測的樣品如長期 3 個月以上 保存應(yīng)置于 80 3 樣品的運送 3 1 傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿 除特殊情況外一般不運送全血 樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi) 試管 上應(yīng)有明顯的標(biāo)記 標(biāo)明樣品的編號或受檢者姓名 種類和采集時間 隨樣品應(yīng)附有送檢樣 送檢 樣應(yīng)與標(biāo)本分開 不能混放 3 2 裝入專用帶蓋的容器內(nèi) 容器的材料要易于消毒處理 在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料 以 免碰碎 如果路程較遠(yuǎn)或氣候炎熱 應(yīng)在 2 8 條件下運送 用于抗體檢測的樣品可在短期內(nèi) 48 小時 室溫遞送 每一包裝的體積不得超過 50ml 運送感染性材料必須有記錄 3 3 如需對個別樣品進(jìn)行復(fù)測