鹽酸氨溴索口腔崩解片在健康志愿者及生物等效性.doc

此文檔收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除鹽酸氨溴索口腔崩解片在健康志愿者的生物等效性許艷華1，薛洪源1，楊漢煜2，賀文濤1，王宇奇1，賈麗霞1（1.白求恩國(guó)際和平醫(yī)院 臨床藥理室，河北 石家莊 050082；2. 石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)有限公司，河北 石家莊 050011）摘要 目的: 研究鹽酸氨溴索口腔崩解片的人體生物利用度和生物等效性。方法:采用隨機(jī)交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，20名健康男性志愿者單劑量口服試驗(yàn)制劑鹽酸氨溴索口腔崩解片與參比制劑鹽酸氨溴索片60 mg，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定血漿中氨溴索的濃度，計(jì)算兩藥的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果:單劑量口服試驗(yàn)與參比制劑后氨溴索的Cmax分別為（84.729.3）和（81.228.2）ngmL-1，tmax分別為（1.70.5）h和（1.80.4）h，t1/2分別為（7.90.9）h和（8.31.0）h，AUC0-24h分別為（638.7180.8）nghmL-1和（591.4148.3）nghmL-1，試驗(yàn)制劑的相對(duì)生物利用度為（108.216.5）%。結(jié)論:試驗(yàn)制劑與參比制劑具有生物等效性。關(guān)鍵詞 鹽酸氨溴索；口腔崩解片；相對(duì)生物利用度；生物等效性；藥動(dòng)學(xué)；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法中圖分類號(hào) 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 10015217Bioequivalence of ambroxol hydrochloride orally disintegrating tablets in healthy volunteersXUE Hong-yuan1, YANG Han-yu2, HOU Yan-ning1, HE Wen-tao1, WANG Yu-qi1, JIA Li-xia1(1. Dep. of Pharmacology, Bethune International Peace Hospital, Shijiazhuang 050082, China; 2. Shijiazhuang Pharmaceutical Group Co. Ltd. Zhongqi Corporation, Shijiazhuang 050011, China)Abstract: OBJECTIVE To study the bioequivalence and relative bioavailability of ambroxol hydrochloride orally disintegrating tablets. METHODS A single oral adminstration of 60 mg test and reference tablets were given to 20 healthy male volunteers according to a randomized crossover design. The concentrations of ambroxol in plasma were determined by a HPLC/MS/MS method. The pharmacokinetic parameters and bioavailability of test tablets were compared with those of reference tablets. RESULTS After a single oral adminstration of 60 mg test and reference tablets, the pharmacokinetic parameters were as follows: Cmax were (84.729.3) and (81.228.2) ngmL-1, tmax were (1.70.5) and (1.80.4) h, t1/2 were (7.90.9) and (8.31.0) h, AUC0-24h were (638.7180.8) and (591.4148.3) nghmL-1, The relative bioavailability of tested tablets was (108.216.5) %. CONCLUSION The two preparations were bioequivalent.KEY WORDS: ambroxol hydrochloride; orally disintegrating tablet; relative bioavailability; bioequivalence; pharmacokinetics; HPLC/MS/MS鹽酸氨溴索（ambroxol hydrochloride）為溴己新的活性代謝產(chǎn)物，能促進(jìn)肺表面活性物質(zhì)的分泌及氣道液體分泌，促進(jìn)黏痰溶解，顯著降低痰黏度，增強(qiáng)支氣管黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)痰液排出，改善通氣功能和呼吸困難狀況，主要用于急、慢性呼吸道疾病引起的痰液黏稠、咳痰困難等，為目前臨床上常用的祛痰藥?？谇槐澜馄墙鼛啄瓿霈F(xiàn)的一種新劑型，它可利用普通片劑生產(chǎn)設(shè)備就可制作；其置入口腔內(nèi)，不用水或用極少量水就可在口腔內(nèi)吸收水分，迅速崩解成無沙礫感的細(xì)粉，隨吞咽動(dòng)作進(jìn)入消化道，吸收后產(chǎn)生藥理作用，因而具有廣闊的研究發(fā)展前景。本試驗(yàn)采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）的方法測(cè)定血漿中氨溴索的濃度，研究了國(guó)產(chǎn)鹽酸氨溴索口腔崩解片與普通片在人體的相對(duì)生物利用度，觀察并評(píng)價(jià)兩種制劑的生物等效性，為鹽酸氨溴索口腔崩解片的藥代動(dòng)力學(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)和臨床合理用藥提供依據(jù)。1 儀器與試藥質(zhì)譜儀：API 4000型液相色譜三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有電噴霧離子化源（ESI源），數(shù)據(jù)系統(tǒng)Analyst 1.4 軟件，美國(guó)ABI公司；液相色譜輸液泵：Agilent 1100系統(tǒng)：四元梯度泵、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱，美國(guó)Agilent公司。AG-135分析天平，瑞士Mettler Toledo公司；SB3200型超聲波清洗儀，上海音波聲電科技公司。試驗(yàn)制劑：鹽酸氨溴索口腔崩解片（T藥），規(guī)格：30mg/片，石家莊四藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：041201；參比制劑：鹽酸氨溴索片（R藥，商品名沐舒坦），規(guī)格：30mg/片，上海勃林格殷格翰藥業(yè)有限公司，批號(hào)：484060；鹽酸氨溴索對(duì)照品，含量99.4%，批號(hào)：040801，河北省藥品檢驗(yàn)所提供；鹽酸維拉帕米（verapamil hydrochloride）對(duì)照品，批號(hào)：02239601，中國(guó)藥品生物制品檢定所；甲醇（色譜純），F(xiàn)isher化學(xué)公司；乙酸銨（色譜純），Tedia化學(xué)公司；甲酸（分析純），天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；水為娃哈哈飲用純凈水；其余試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果 2.1 研究對(duì)象 20名健康男性志愿者，年齡（23.31.9）歲，體重（67.05.4）kg，身高（1.740.05）m，體重指數(shù)（22.11.1）kg/m2；試驗(yàn)前經(jīng)病史詢問和體格檢查，心電圖、胸透、肝功、腎功、血尿常規(guī)等均為正常，且試驗(yàn)前2周及試驗(yàn)期間未服用任何藥物并禁用煙酒及其它含咖啡因、柯柯堿、茶堿的飲料，避免劇烈運(yùn)動(dòng)。試驗(yàn)經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查、批準(zhǔn)備案，所有志愿者均明確本試驗(yàn)的目的與要求，并在試驗(yàn)前自愿簽署知情同意書。2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用兩制劑雙周期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將志愿者隨機(jī)分為兩組，分別服用試驗(yàn)或參比制劑60 mg。志愿者于試驗(yàn)前12 h吃清淡晚餐后禁食，試驗(yàn)當(dāng)日晨空腹口服藥，試驗(yàn)制劑是將藥片直接放于舌面，無須咀嚼，待藥片迅速崩解后吞咽，參比制劑用溫開水200 mL送服，服藥后2 h允許飲水，4、10 h后進(jìn)食統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)餐。服藥前及服藥后0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24 h，分別從肘靜脈取血3 mL，置肝素抗凝管中放置1 h后離心（3 000 rmin-1）10 min，分離血漿，-20 凍存、備用。7天后交叉服藥，重復(fù)試驗(yàn)。2.3 血漿樣品測(cè)定2.3.1 色譜條件 Restek Allure C18分析柱（5 mm，4.650mm），Restek公司； C18保護(hù)柱（4 3.0 mm）Phenomenex，Torrance，USA；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.5%甲酸水溶液=55：5：40；流量：0.5 mLmin-1 ；柱溫：20；進(jìn)樣量：5 L。質(zhì)譜條件 離子源為電噴霧離子化（ESI）源；噴霧電壓IS 為5 000 V；霧化溫度為500 ；霧化氣NEB（GAS 1）為40 Lmin-1；簾氣CUR 為25 Lmin-1；碰撞氣CAD為4 Lmin-1；輔助氣AUX（GAS 2）為40 Lmin-1；檢測(cè)方式為負(fù)離子；掃描方式為多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），用于定量分析的離子反應(yīng)分別為m/z 379.1 m/z 264.0（氨溴索），m/z 455.5 m/z 165.2 （內(nèi)標(biāo)，維拉帕米），碰撞誘導(dǎo)解離（CID）電壓分別為25 V（氨溴索）和45 V（內(nèi)標(biāo)）；駐留時(shí)間（dwell time）均為200 ms。2.3.2 血樣處理 取血漿樣品100 mL，依次加入甲醇100 mL、5 ngmL-1內(nèi)標(biāo)溶液200 mL，渦旋振蕩混勻20 s，10 000 rmin-1離心5 min后，取上清液，5 mL進(jìn)樣測(cè)定。氨溴索和內(nèi)標(biāo)的tR分別為1.48、1.74 min。在此條件下，空白血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾氨溴索及內(nèi)標(biāo)的測(cè)定，結(jié)果見圖1。2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 精取鹽酸氨溴索對(duì)照品27.4 mg（相當(dāng)于氨溴索25.0 mg），用甲醇稀釋，得含氨溴索分別為500、400、150、50、15、5、2 ngmL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。精取鹽酸維拉帕米27.0 mg（相當(dāng)于維拉帕米25.0 mg）用甲醇稀釋成濃度為5 ngmL-1的內(nèi)標(biāo)工作液。取空白血漿100 mL，加入100 mL上述系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，其余按“2.3.2”項(xiàng)下“加入甲醇100 mL”后操作，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別以氨溴索的濃度為橫坐標(biāo)，氨溴索與內(nèi)標(biāo)的峰面積比為縱坐標(biāo)，用加權(quán)最小二乘法（W=1/X2）進(jìn)行回歸計(jì)算，求得直線回歸方程，即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。血漿中氨溴索濃度的線性范圍為2.0500 ngmL-1，其直線回歸方程為：Y = 0.906 3 C-0.003 1（r =0.999 8），定量下限為標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低濃度點(diǎn)2.0 ngmL-1。圖1 氨溴索與內(nèi)標(biāo)的HPLC-MS/MS色譜圖A.空白血漿；B. .空白血漿中加入氨溴索和內(nèi)標(biāo)；C. 受試者服藥1.0 h后血漿樣品。1-氨溴索(m/z) 264.0；2-內(nèi)標(biāo)(m/z) 165.2Figure 1 Chromatograms of ambroxol and internal standard by multiple reaction monitoring ( MRM ) scan mode A. Blank plasma; B. Blank plasma spiked with ambroxol and verapamil; C .Plasma sample1.0 h after an oral dose of 60 mg ambroxol hydrochloride orally disintegrating tablets to a healthy volunteer; Peak1. Selected mass (m/z) 264.0 (ambroxol); Peak 2. Selected mass (m/z) 165.2 (verapamil)2.3.4 精密度與回收率 取空白血漿100 m L，按“2.3.3”項(xiàng)下制備低、中、高三個(gè)濃度點(diǎn)（5.0，50，400 ngmL-1）的質(zhì)控樣品（QC），每個(gè)濃度6份，每天制備并測(cè)定，隨行兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線，連續(xù)測(cè)定4天，以當(dāng)日的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算QC樣品的濃度，將測(cè)定結(jié)果進(jìn)行方差分析，求算方法的精密度和方法回收率。上述3個(gè)濃度點(diǎn)的血漿樣品的峰面積與其標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)同倍數(shù)稀釋后直接進(jìn)樣峰面積的比計(jì)算提取回收率。本法測(cè)定3個(gè)濃度血漿樣品中氨溴索的平均提取回收率為101.1 %，內(nèi)標(biāo)的提取回收率為101.4 %，3個(gè)濃度日內(nèi)RSD2.61 %（n=24）、日間的RSD7.68 %（n=4）及方法平均回收率為98.103.88 %（n=24）。2.3.5 樣本穩(wěn)定性考察 考察氨溴索在血漿中（5.0，400 ngmL-1）室溫放置4 h和血漿樣品處理后室溫放置4、24 h以及3次冷凍解凍循環(huán)的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，氨溴索在上述條件下均穩(wěn)定，RE均15%。2.3.6 數(shù)據(jù)的質(zhì)量保證 測(cè)定受試者血樣時(shí)，每個(gè)分析批隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線，并制備低、中、高三個(gè)濃度的多份質(zhì)控（QCs）樣品，質(zhì)控樣品數(shù)大于未知樣品總數(shù)的5%；以該批標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算質(zhì)控樣品的濃度，RE均15%。如果分析過程中由于操作錯(cuò)誤或儀器問題使數(shù)據(jù)產(chǎn)生偏差，則對(duì)當(dāng)日所有樣品進(jìn)行復(fù)檢，并棄去原值；對(duì)于某一批的質(zhì)控樣品不符合規(guī)定的，則此批重做；對(duì)于測(cè)試過程中的異常點(diǎn)進(jìn)行復(fù)檢；對(duì)于測(cè)得值與根據(jù)藥時(shí)曲線所估計(jì)的值相差較大的樣品進(jìn)行復(fù)檢。如果復(fù)檢值與原值的偏差在15 %以內(nèi)，取原值；如果復(fù)檢值與原值的偏差大于15 %以上，進(jìn)行第二次復(fù)檢。本試驗(yàn)沒有進(jìn)行復(fù)檢的樣品。2.3.7 數(shù)據(jù)處理 使用DAS 1.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。將20名受試者的經(jīng)時(shí)血藥濃度錄入該程序，分別得到兩制劑氨溴索的AUC0-24h、AUC0-、t1/2、tmax、Cmax等藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。tmax進(jìn)行非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，Cmax、AUC0-24h、AUC0-經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后做方差分析，并進(jìn)行雙向單側(cè)t檢驗(yàn)。結(jié)果表明，兩制劑的tmax、Cmax、AUC0-24h、AUC0-均無顯著性差異；試驗(yàn)制劑的Cmax的 90%可信限落在參比制劑的70%-143%之間，AUC0-24h、AUC0-的90%可信限落在參比制劑的80%125%范圍內(nèi)，以AUC0-24h計(jì)算受試制劑的相對(duì)生物利用度為（108.216.5）%，故認(rèn)為兩制劑生物等效。20名受試者口服單劑量?jī)芍苿┖蟮钠骄帩舛?時(shí)間曲線及主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見圖2、表1、表2。表1 20名健康受試者單劑量口服60mg鹽酸氨溴索口腔崩解片后的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（S）Table 1. Main pharmacokinetic parameters and relative bioavailability of ambroxol after a single oral at the dose of 60 mg in 20 volunteersParameterTestReferenceCmax（ngmL-1）84.729.381.228.2tmax （h）1.70.51.80.4t1/2（h）7.90.98.31.0AUC0-24h （nghmL-1）638.7180.8591.4148.3AUC0- （nghmL-1）717.5211.1671.1173.2Fr（%）108.216.5圖2 20名健康志愿者口服單劑量60mg鹽酸氨溴索口腔崩解片后的平均藥時(shí)曲線Figure 2 Mean plasma concentration-time curves of ambroxol after a single oral dose of 60 mg in 20 healthy volunteers (n=20, meanSD)表2 雙向單側(cè)t檢驗(yàn)結(jié)果 (=0.05)Table 2 The result of the two one-side t-testst1t2t1-0.05(18)90% confidential interal (%)Ln (AUC0-24h)9.324.911.73101.47113.13Ln (AUC0-)9.185.401.73100.47111.73Ln (Cmax)7.816.381.7395.00113.153 討 論氨溴索血藥濃度的測(cè)定方法有HPLC法1, 2、GC-ECD法3、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法等4，在使用HPLC法時(shí)，樣品預(yù)處理步驟繁瑣1, 2；再者，血漿中的藥物濃度較低，受試者服藥劑量多超過常用量。本試驗(yàn)受試者的服藥劑量為60mg，不僅符合處方及新編藥物學(xué)的要求，而且為臨床用藥提供可行的參考，在試驗(yàn)過程中未見有臨床意義的不良反應(yīng)發(fā)生。本試驗(yàn)采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定血漿中氨溴索的濃度，儀器靈敏度高，最低檢測(cè)濃度可達(dá)2.0 ngmL-1，測(cè)定時(shí)間僅為2.2 min，兩日既可完成全部血樣的測(cè)定；血漿樣品采用直接沉淀蛋白法，操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確度、精密度均好。本文所測(cè)每種制劑的個(gè)體間Cmax、AUC0-24 h均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而個(gè)體間的tmax無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，例如參比制劑Cmax變化范圍為49.1145.0 ngmL-1、AUC0-24 h為350.3919.0 nghmL-1。本文所測(cè)參比制劑Cmax值（60mg，81.228.2 ngmL-1）與文獻(xiàn)1（90mg，127.236.2 ngmL-1）接近，低于文獻(xiàn) 2（90mg，201.623.8 ngmL-1）；比較2篇文獻(xiàn)1, 2（受試者數(shù)量分別為10、8名），二者出自同一實(shí)驗(yàn)室，儀器、藥品、試驗(yàn)方法均相同，但同種參比制劑Cmax、AUC0-24 h值存在明顯差異，tmax無顯著差異。由上述結(jié)果可見，鹽酸氨溴索在人體內(nèi)代謝的速度無明顯差異，但其代謝程度存在顯著差異，這可能與其主要在肝臟代謝，受肝藥酶的影響有關(guān)，國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)未見相關(guān)報(bào)道。故在人體生物等效性評(píng)價(jià)時(shí)需增加受試者數(shù)量，在臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)注意個(gè)體化給藥。本試驗(yàn)兩制劑的t1/2約為8