LoadingBuffer蛋白印記教程文件

1、L o a d i ng Buf f er 蛋白印記精品文檔5SDS-PAGE Loading Buffer 的配制（ 10 ml） （本方案摘自蛋白質(zhì)技術(shù)手冊(cè)汪家政、范明） 組分： Tris-HCl pH6.8 （60 mM ）； SDS （2%）；溴酚蘭（ 0.1%）；甘油 （25%）；-巰基乙醇（ 14.4 mM）配制過(guò)程：1. 量取 1M Tris-HCl （pH6.8） 0.6 ml；50%的甘油 5 ml；10%的 SDS溶液 2 ml；1%的溴酚蘭 1 ml；2. 加入去離子水定容至 10 ml；3. 分裝；4. 在 4可保存數(shù)周， -20可保存數(shù)月之久。你還可以參考下面這個(gè)配方

2、：2SDS 凝膠加樣緩沖液 組分（摘自分子克隆第三版）Tris-HCl pH6.8（100 mM）； SDS （4%）；溴酚蘭（ 0.2%）；甘油 （20%）；-巰基乙醇或二硫蘇糖醇（ 200 mM ） 不含硫代試劑的加樣 Buffer 可在室溫保存。-巰基乙醇或二硫蘇糖醇臨用前加 入。我想配點(diǎn)兒 5X 的 loading buffer, 分子克隆上寫著 10%SDS ，我的配制思路是 （200ml ） 25ml1M Tris pH6.8, 20gSDS, 及 1g溴酚藍(lán)配制到 100mL ，然后再 加 100ml 甘油，但是問(wèn)題是 20gSDS 要溶解到那么小體積的水中實(shí)在是困 難，我把 S

3、DS 溶解（其實(shí)大部分是不溶的）放到 65 度烘箱里，放大概幾個(gè)小 時(shí)， SDS 倒是溶了，但是變得非常黏稠，搖都搖不動(dòng)的那種，跟果凍似的， 請(qǐng)問(wèn)這樣配法是不是正確，如果不正確應(yīng)該怎樣配，請(qǐng)配過(guò)的大蝦教教我，最 好有詳細(xì)配制流程。5X 的 loading buffer 已經(jīng)配制成功，雖然 SDS 很難溶，但還是溶了。因 為 5X 的上樣量可以大一些，做 western 的時(shí)候比較有用， 2X 的我有配好的， 呵呵 我想說(shuō)以下幾點(diǎn)：1.SDS-PAGE loading buffer 一般配成 2X 的，5X loading buffer 確實(shí)過(guò)于粘 稠，且 SDS 在低溫下難溶于水，這就導(dǎo)致你配

4、的 buffer 搖“都搖不動(dòng) ”了2. 不知你為何要配那么多 loading buffer （況且是 5X 的），這些東西都是用量 很少的，建議你少配些，比如 10 ml？收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系管理員刪除精品文檔3. 以下就以 2X loading buffer （配制 10 ml ）為例說(shuō)明配制步驟首先配制 1 mol/L Tris-HCl（pH6.8） ，10%SDS 溶液。然后稱取 0.02 g 溴酚藍(lán)于小燒杯里，依次加入 1 mol/L Tris-HCl（pH6.8） 1ml，10%SDS 溶液 4ml ，甘油 2ml，去離子水 2ml，2-巰基乙醇 1ml?；靹颍?分裝成小份，

5、 -20 度保存。用時(shí)溶解，與樣品 1:1 混合上樣。需要說(shuō)明的是， 2- 巰基乙醇是還原劑，也可用前加入，以防失效。5SDS-PAGE Loading Buffer TAKARA select組分濃度：? 250mM Tris-HCl （PH6.8） ;? 10% （W/V ） SDS；? 0.5% （W/V ） BPB；? 50% （V/V ）甘油；? 5% （V/V） 巰基乙醇（ 2-ME）配制量：? 5ml配制方法 ：1. 量取試劑（ 1M Tris-HCl （PH6.8） 1.25ml ；SDS 0.5g；BPB 25mg；甘 油 2.5ml ），置于 10ml 塑料離心管中。2.

6、加去離子水溶解后定容至 5ml 。3. 小份分裝后室溫保存。4. 使用前加入 2-ME（ 50ul/1ml ）5. 加入 2-ME 的 Loading Buffer 可在室溫保存一個(gè)月左右。5XSDS 上樣緩沖液0.5 mol/L Tris HCl （ pH6.8 ） 2.5ml 緩沖二硫叔糖醇（ DTT ， MW154.5 ） 0.39g 維持蛋白穩(wěn)定SDS 0.5g 形成 SDS-PRO 復(fù)合物，使 pro 帶負(fù)電溴酚藍(lán) 0.025g 示蹤指示劑收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系管理員刪除精品文檔甘油 2.5ml 增加樣品比重，利于加樣（膠中甘油可減少 電滲我用的是 10ml:0.5mol/L T

7、ris-HCl(pH6.8) 1.0 ml 甘油 1.0ml20%SDS(w/v) 1.0ml-巰基乙醇 0.5ml0.1% 溴酚藍(lán)( w/v ) 0.25ml 雙蒸水 6.25mldog002 (2014-7-07 17:56:00)My 2XSDS sample bffer 配方是：2.4 ml 0.5mol/L Tris-HCl(pH6.8)4 ml 10% SDS2ml 甘油0.5ml 0.5% 溴酚藍(lán)0.1 ml 雙蒸水-mercaptoethanol必須在水浴之前新鮮加入， 終濃度是 10%5X Sample buffer (loading buffer):10% w/v SDS10 mM Dithiothrei