細菌真菌放線菌培養(yǎng)基配方

1、 。細菌培養(yǎng)基：肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種廣泛用于培養(yǎng)細菌的一培養(yǎng)基 , 肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和 nacl。肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1. 藥品比例 ：牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，nacl5g，瓊脂 1520g，水 1000ml，ph7.47.62. 實驗器材：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉紅、鏈霉素、1mol/l naoh、lmol/lhcl、kno 、nacl、k hpo 3h o、mgso 7h o、324242feso 7h o、4.5ml 無菌水 6 管，10%酚液，49.5ml 無菌水 ( 帶玻璃珠 )142瓶。土壤樣品、試管、培養(yǎng)皿、移液管、三角瓶、燒

2、杯、量筒、玻璃棒、天平、稱量紙、牛角匙、 ph 試紙、棉花、報紙、記號筆、線繩、紗布、酒清燈。電爐、高壓蒸氣滅菌鍋、超凈工作臺 .3. 配置方法（1）稱藥品：按實際用量計算后，按配方稱取各種藥品放入大燒杯中。牛肉膏可放在小燒杯中稱量，用熱水溶解后倒入大燒杯。蛋白胨極易吸潮，故稱量時要迅速。（ 2）加熱溶解：在燒杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉網上，小火加熱，并用玻棒攪拌，待藥品完全溶解后再補充水分至 所需量。若配制固體培養(yǎng)基，則將稱好的瓊脂放入己溶解的藥品中，再加熱融化，此過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，最后補足所失的水分。（ 3）調 ph：檢測培養(yǎng)基的 ph，若 ph 偏酸，可

3、滴加 lmol/l naoh，邊加邊攪拌，并隨時用 ph 試紙檢測，直至達到所需 ph 范圍。若偏堿，則用 lmol/l hcl 進行調節(jié)。 ph 的調節(jié)通常放在加瓊脂之前。應注意ph 值不要調過頭，以免回調而影響培養(yǎng)基內各離子的濃度。（ 4）過濾：液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾，固體培養(yǎng)基可用 4 層紗布趁熱過濾，以利培養(yǎng)的觀察。但是供一般使用的培養(yǎng)基，這步可省略。（ 5）分裝：按實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶內。分裝時可用漏斗以免使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上而造成污染。分裝量：固體培養(yǎng)基約為試管高度的 l/5 ，滅菌后制成斜面。分裝入三角瓶內以不超過其容積的一半為宜。 半固體培養(yǎng)基以試管

4、高度的 1/3 為宜，滅菌后垂直待凝。（6）加棉塞：試管口和三角瓶口塞上用普通棉花 ( 非脫脂棉 ) 制作的棉塞。棉塞的形狀、大小和松緊度要合適，四周緊貼管壁，不留縫隙，才能起到防止雜菌侵入和有利通氣的作用。要使棉塞總長約3/5 塞入試管口或瓶口內，以防棉塞脫落。有些微生物需要更好的通氣，則可用 8 層紗布制成通氣塞。 有時也可用試管帽或塑料塞代替棉塞。（7）包扎：加塞后，將三角瓶的棉塞外包一層牛皮紙或雙層報紙，以防滅菌時冷凝水沾濕棉塞。若培養(yǎng)基分裝于試管中，則應以 5支或 7 支在一起，再于棉塞外包一層牛皮紙，用繩扎好。然后用記號筆注明、培養(yǎng)基名稱、組別、日期。 （8）滅菌：將上述培養(yǎng)基于

5、121.3 濕熱滅菌 20min。如因特殊情況不能及時滅菌，則應故人冰箱內暫存。（9）擺斜面：滅菌后，如制斜面，則需趁熱將試管口端擱在一根長木條上，并調整斜度，便斜面的長度不超過試管總長的 1/2 。（10）無菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入 37溫箱中培養(yǎng) 2448h，無菌生長即可使用，或貯存于冰箱或清潔的櫥內，備用。二. 放線菌培養(yǎng)基 : 高氏合成一號培養(yǎng)基是一種用于培養(yǎng)放線菌的合成培養(yǎng)基 , 培養(yǎng)基中的可溶性淀粉作為碳源和能源， kno 作為氮源，3k hp0 、mgso 和 fes0 作為無機鹽等2444高氏合成一號培養(yǎng)基1. 藥品比例：20g可溶性淀粉naci0 5gkno1g0 5g3k

6、 hpo 3h o242mgso 7h o 0 5g42feso 7 h o 0 01g421525g1000ml瓊脂水ph7.4 7.6 2. 實驗器材：試管，錐形瓶，燒杯，量筒，玻璃棒，培養(yǎng)基分裝器，天平，高壓蒸汽滅菌器， ph 試紙，棉花，牛皮紙，麻繩，紗布3. 配制方法：（1）、稱量和溶化按配方先稱取可溶性淀粉，放入小燒杯中，并用少量冷水將淀粉調成糊狀，再加入少于所需水量的沸水中，繼續(xù)加熱，使可溶性淀粉完全溶化。然后再稱取其他各成分，并依次溶化，對微量成分feso 7 h o 可先配成高濃度的貯備42液，按比例換算后再加入。 待所有試劑完全溶解后，補充水分到所需的總體積。配制固體培養(yǎng)基

7、時，將稱好的瓊脂放入已溶的試劑中，在加熱融化，最后補充所損失的水分。（2）、調 ph用試紙測培養(yǎng)基的原始 ph,如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中加入1mol/lnaoh,邊滴邊攪拌，并隨時用 ph 試紙測其 ph,直至 ph 達 7.6 。反之，用 1mol/lhci 進行調節(jié)。（3）、分裝和加塞將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內，在試管口或錐形瓶口上塞上棉塞。（4）、包扎加塞后，將全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，其外再用一根麻繩扎好。 用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、 組別、配制日期。（5）、滅菌 將上述培養(yǎng)基以 121 c,20min,0.103mpa 高壓蒸汽滅菌。0（6）、擱置斜面將滅菌的試管培

8、養(yǎng)基冷卻至 50 c 左右，將試管口端擱在玻璃棒0上。斜面的斜度要適當，使斜面的長度約為管長 1/3 。（7）、無菌檢查將滅菌培養(yǎng)基放入 37 c 的培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 2428h，以檢查滅菌是否0徹底。三真菌培養(yǎng)基： 馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基（馬丁氏培養(yǎng)基）馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基1. 藥品比例k hpo 1g，mgso 7h o 0.5g ，蛋白胨 5g，葡萄糖 l0g ，瓊脂 1520g，2442水 1000ml，自然 ph此培養(yǎng)液 1000ml 加 1%孟加拉紅水溶液 33ml 。臨用時每 100ml 培養(yǎng)基中加 1%鏈霉素液 0 3ml。（孟加拉紅和鏈霉素主要是細菌和放線菌的抑制劑，對真菌無抑制作用，

9、因而真菌在這種培養(yǎng)基上可以得到優(yōu)勢生長，從而達到分離真菌的目的）2. 實驗器材kh2po4，mgso4?7h2o，蛋白胨，葡萄糖，瓊脂，孟加拉紅，鏈霉素； 試管，三角燒瓶，量筒，玻棒，培養(yǎng)基分裝器，扭力天平，牛角匙，高壓蒸汽滅菌鍋3. 配制方法（1）稱量和溶解：先計算后稱量，按用量稱取各成分，并將其溶解在少于所需的水中。 待各成分完全溶解后， 補充水分到所需體積。再將孟加拉紅配成 1%的水溶液，在 1000ml 培養(yǎng)液中加入以上孟加拉紅溶液 3.3ml，混勻后，加入瓊脂加熱融化，方法同牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配制。（2）分裝、包扎、滅菌及無菌檢查同牛肉膏蛋白膝培養(yǎng)基配制。（3）鏈霉素的加入：鏈霉素受

10、熱容易分解，所以臨用時，將培養(yǎng)基融化后待溫度降至 45左右時才能加入?？上葘㈡溍顾嘏涑?1%的溶液 ( 配好的鏈霉素溶液保存于 -20 ) ，在 100ml 培養(yǎng)基中加 1%鏈霉素 0.3ml ，使每毫升培養(yǎng)基中合鏈霉素 30g。四滅菌采用高壓蒸氣滅菌法進行滅菌，步驟如下：1首先將內層鍋取出，再向外層鍋內加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。切勿忘記加水，同時水量不可過少，以防滅菌鍋燒干而引起炸裂事故。2放回內層鍋，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸氣流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與鍋壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。3加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內層鍋的排

11、氣槽內。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。 4用電爐或煤氣加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關上排氣閥，讓鍋內的溫度隨蒸氣壓力增加到逐漸上升。當鍋內壓力升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。本實驗用 0.1mpa，121.5 ， 20min 滅菌。滅菌的主要因素是溫度而不是壓力。因此鍋內冷空氣必須完全排盡后，才能關上排氣閥，維持所需壓力。5滅菌所需時間到后，切斷電源或關閉煤氣，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至“ 0”時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。壓力一定要降到“ 0”時，才能打開排氣閥

12、，開蓋取物。否則就會因鍋內壓力突然下降， 使容器內的培養(yǎng)基由于內外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染， 甚至灼傷操作者。6將取出的滅菌培養(yǎng)基， 需擺斜面的則擺成斜面， 然后放入 37溫箱培養(yǎng) 24h，經檢查若無雜菌生長，即可待用。五土壤微生物的分離1取土壤：取表層以下510cm 處的土樣，放入無菌的袋中備用，或放在 4冰箱中暫存。2制備稀釋液 ( 要無菌操作 )(1) 制備土壤懸液：稱土樣 0.5g ，迅速倒入帶玻璃珠的 49.5ml 無菌水瓶中 ( 玻璃珠用量以充滿瓶底力最好 ) ，振蕩 510min，使土樣充分打散，即成為 10 的土壤懸液。-2(2) 稀釋：用無

13、菌移液管吸 10 的土壤懸液 0.5ml，放入 4.5ml 無-2菌水中即為 10 稀釋液，如此重復，可依次制成 10 10-3 的稀釋液。-8-3注意：操作時管尖不能接觸液面，每一個稀釋度換用一支移液管，每 次吸入土液后，要將移液管插入液面，吹吸 3 次，每次吸上的液面要高于前一次，以減少稀釋中的誤差。六混菌法測定菌落數的方法(1) 細菌：取 10 、10 兩管稀釋液各 1ml，分別接人相應標號的平-7-6皿中，每個稀釋度接兩個平皿。然后取冷卻至 50的牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基，分別倒入以上培養(yǎng)皿中 ( 裝量以鋪滿皿底高 1.5 2mm 為宜 ) ，迅速輕輕搖動平皿，使菌液與培養(yǎng)基充分混勻，但不沾濕

14、皿的邊緣，待瓊脂凝固即成細菌平板。倒平板時要注意無菌操作。（2）放線菌：取 10-5 、10-4 兩管稀釋液，在每管中加入 10%酚液 56 滴，搖勻，靜置片刻，然后分別從兩管中吸出 1ml加入相應標號的平皿中，選用高氏 1 號培養(yǎng)基，用與細菌相同的方法倒入平皿中，便可制成放線菌平板。（3）真菌：取 10 、10 兩管稀釋各 1ml，分別接入相應標號的-2-3平皿中，每個稀釋度接兩個平皿。 在融化的馬鈴薯培養(yǎng)基中， 每 100ml加入滅菌的乳酸 1ml，輕輕搖勻，然后用與細菌相同的方法倒入平皿中，便可制成真菌的平板。4培養(yǎng)：將接種好的細菌、放線菌、真菌平板倒置，即皿蓋朝下放置，于 2830中恒

15、溫培養(yǎng)， 細菌培養(yǎng) 12d，放線菌培養(yǎng) 57d，真菌培養(yǎng) 35d。觀察生長的菌落，用于進一步純化分離或直接轉接斜面。七. （一） 平板制作及劃線分離方法。1倒平板：按無菌操作要求，在火焰旁操作。2劃線分離： 使用接種環(huán)， 從待純化的菌落或待分離的斜面菌種只沾取少量菌樣，在相應培養(yǎng)基平板中劃線分離，劃線的方法多樣，目的是獲得單個菌落。 3培養(yǎng)：方法同“土壤稀釋分離”。（二）斜面接種和穿刺接種1斜面接種（1）取新鮮固體斜面培養(yǎng)基，分別做好標記（寫上菌名、接種日期、接種人等），然后用無菌操作方法，把待接菌種接入以上新鮮培養(yǎng)基斜面上。（2）接種的方法是， 用接種環(huán)沾取少量待接菌種， 然后在新鮮斜面上“

16、之”字形劃線，方向是從下部開始， 一直劃至上部（圖 34a）。注意劃線要輕，不可把培養(yǎng)基劃破。（3）接種后 30 恒溫培養(yǎng)，細菌培養(yǎng) 48h，放線菌、霉菌培養(yǎng)至孢子成熟方可取出保存。2穿刺接種（1）取兩支新鮮半固體牛肉膏蛋白胨柱狀培養(yǎng)基， 做好標記（寫上菌名）、接種日期，接種人等）。（2）接種的方法是， 用接種針沾取少量待接菌種，然后從柱狀培養(yǎng)基的中心穿入其底部（但不要穿透），然后沿原刺入路線抽出接種針，注意接種針不要移動。（3）接種后 30恒溫培養(yǎng)， 24h 后觀察，比較兩種菌的生長結果。八、注意事項1稱藥品用的牛角匙不要混用，稱完藥品應及時蓋緊瓶蓋。2調 ph 時要小心操作，避免回調。3不同培養(yǎng)基各有配制特點，要注意具體操作。 4一般土壤中，細菌最多，放線菌及真菌次之，而酵母菌主要見于果園及菜園土壤中，故從土壤中分離細菌時，要取較高的稀釋度，否則菌落連成一