實驗四+食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測完ppt課件

1、實驗四實驗四食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測食品中細菌總數(shù)及大腸菌群的檢測主講：鄭海濤一、目的要求一、目的要求1 1、掌握食品中微生物學(xué)根本目的的檢測、掌握食品中微生物學(xué)根本目的的檢測方法。了解食質(zhì)量量與細菌和大腸菌群數(shù)方法。了解食質(zhì)量量與細菌和大腸菌群數(shù)量的重要關(guān)系量的重要關(guān)系2 2、經(jīng)過實驗，初步掌握食品中污染的活、經(jīng)過實驗，初步掌握食品中污染的活細菌計數(shù)方法，以判別食品的衛(wèi)生質(zhì)量細菌計數(shù)方法，以判別食品的衛(wèi)生質(zhì)量1 1、菌落總數(shù)主要作為判別食品被污染程度的標(biāo)志，也可以運、菌落總數(shù)主要作為判別食品被污染程度的標(biāo)志，也可以運用這一方法察看細菌在食品中繁衍的動態(tài)，以便對被檢樣品進用這一方法察看細

2、菌在食品中繁衍的動態(tài)，以便對被檢樣品進展衛(wèi)生學(xué)評價時提供根據(jù)。展衛(wèi)生學(xué)評價時提供根據(jù)。 2 2、大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧和兼性厭、大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。由腸桿菌科中四個菌屬內(nèi)的一些細菌所組成，即艾希氏菌屬、由腸桿菌科中四個菌屬內(nèi)的一些細菌所組成，即艾希氏菌屬、枸櫞酸桿菌屬、產(chǎn)氣克雷伯氏菌屬和腸桿菌屬。枸櫞酸桿菌屬、產(chǎn)氣克雷伯氏菌屬和腸桿菌屬。該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染目的來評價該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染目的來評價食品的衛(wèi)生質(zhì)量，具有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義。食品的衛(wèi)生質(zhì)量，

3、具有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義。二、實驗原理二、實驗原理 一、待測樣品：一、待測樣品： 奶粉復(fù)原液、豆腐等。奶粉復(fù)原液、豆腐等。 二、培育基二、培育基平板計數(shù)瓊脂培育基、月桂基磺酸鹽胰蛋白平板計數(shù)瓊脂培育基、月桂基磺酸鹽胰蛋白胨 肉 湯 胨 肉 湯 L S T 、 煌 綠 乳 糖 膽 鹽 肉 湯 、 煌 綠 乳 糖 膽 鹽 肉 湯BGLB, 225m1無菌生理鹽水、無菌生理鹽水、 9m1無無菌生理鹽水、菌生理鹽水、1mol/L氫氧化鈉、氫氧化鈉、1mol/L鹽酸。鹽酸。 三、無菌培育皿、革蘭氏染色液、移液器、槍三、無菌培育皿、革蘭氏染色液、移液器、槍頭、培育箱、水浴鍋、電子天平、電爐、玻頭、培育箱、水浴

4、鍋、電子天平、電爐、玻璃珠直徑為璃珠直徑為5mm、試管架、酒精燈、滅、試管架、酒精燈、滅菌鑷子、菌鑷子、75%酒精棉球、玻璃蠟筆、不銹鋼酒精棉球、玻璃蠟筆、不銹鋼勺等。勺等。三、實驗資料三、實驗資料四、操作方法一、細菌總數(shù)：一、細菌總數(shù)： (1) (1) 以無菌操作將檢樣以無菌操作將檢樣2525克克( (或或25ml)25ml)放于裝有放于裝有225ml225ml滅菌生滅菌生理鹽水和玻璃珠的三角瓶中，充分振蕩制形成理鹽水和玻璃珠的三角瓶中，充分振蕩制形成1:101:10的均勻的均勻稀釋液，樣品稀釋液，樣品PHPH值應(yīng)在值應(yīng)在6.5-7.56.5-7.5之間，必要時用之間，必要時用1mol/L1

5、mol/L氫氫氧化鈉或氧化鈉或1mol/L1mol/L鹽酸調(diào)理鹽酸調(diào)理( (固體食品需先用無菌均質(zhì)器均固體食品需先用無菌均質(zhì)器均質(zhì)后再稀釋質(zhì)后再稀釋) )。 (2) (2) 用移液器，汲取用移液器，汲取1:101:10稀釋液稀釋液1ml1ml，注入含有，注入含有9ml9ml滅菌生滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖均勻，制成理鹽水的試管內(nèi)，振搖均勻，制成1:1001:100的稀釋液。的稀釋液。 (3) (3) 另取槍頭，按上述操作進展另取槍頭，按上述操作進展1010系列稀釋成不同濃度的系列稀釋成不同濃度的稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1 1支無菌槍頭。支無菌槍頭。

6、(4) (4) 根據(jù)對標(biāo)本污染情況的估計，選擇根據(jù)對標(biāo)本污染情況的估計，選擇2-32-3個稀釋度，分別個稀釋度，分別在作在作1010倍遞增稀釋的同時，即汲取該稀釋度的稀釋液倍遞增稀釋的同時，即汲取該稀釋度的稀釋液1ml1ml于滅菌培育平皿內(nèi)，每個稀釋度作兩個平皿。于滅菌培育平皿內(nèi)，每個稀釋度作兩個平皿。 (5) (5) 稀釋液吸入平皿后，將融化并冷卻至稀釋液吸入平皿后，將融化并冷卻至4545的平板計數(shù)的平板計數(shù)瓊脂培育基注入平皿約瓊脂培育基注入平皿約15ml15ml，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻，同時將營養(yǎng)瓊脂培育基傾入加有同時將營養(yǎng)瓊脂培育基傾入加有1ml1ml滅菌生理鹽水

7、的滅菌滅菌生理鹽水的滅菌平皿作空白對照。平皿作空白對照。 (6) (6) 待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36+136+1恒溫箱內(nèi)培育恒溫箱內(nèi)培育48482 2小時后取出，計算平板內(nèi)菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，小時后取出，計算平板內(nèi)菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即得每克樣品所含菌落總數(shù)。即得每克樣品所含菌落總數(shù)。菌落總數(shù)的檢驗程序菌落總數(shù)的檢驗程序檢樣25g(或25ml)樣品225ml稀釋液，均質(zhì)10倍系列稀釋選擇2-3個樣品勻液各取1ml,分別參與無菌培育皿內(nèi)每皿參與15-20ml培育基搖勻361培育482h計算菌落數(shù)，報告梯度稀釋操作方法操作方法二、大腸菌群檢驗：二、大腸菌群檢驗

8、： 取樣品及稀釋方法與菌落總數(shù)檢驗方法一樣，做成取樣品及稀釋方法與菌落總數(shù)檢驗方法一樣，做成1:10的均勻稀的均勻稀釋液為檢樣，取樣量為釋液為檢樣，取樣量為1ml及及0.1ml(相當(dāng)于相當(dāng)于1克及克及0.1克奶粉樣品克奶粉樣品)各各3管。管。1初發(fā)酵實驗初發(fā)酵實驗 選擇待測樣品選擇待測樣品3個適宜稀釋度接種于個適宜稀釋度接種于LST發(fā)酵管內(nèi)，接種量在發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1ml以上者，用雙料以上者，用雙料LST發(fā)酵管；每一稀釋度接種發(fā)酵管；每一稀釋度接種3管，置管，置361溫箱內(nèi)，培育溫箱內(nèi)，培育242小時，如一切發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，繼小時，如一切發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，繼續(xù)培育續(xù)培育242小時，察看倒管內(nèi)能

9、否產(chǎn)氣，如未產(chǎn)氣可報告為大小時，察看倒管內(nèi)能否產(chǎn)氣，如未產(chǎn)氣可報告為大腸菌群陰性；如有產(chǎn)氣者，那么進展復(fù)發(fā)酵實驗。腸菌群陰性；如有產(chǎn)氣者，那么進展復(fù)發(fā)酵實驗。 2復(fù)發(fā)酵實驗復(fù)發(fā)酵實驗 將一切產(chǎn)氣的將一切產(chǎn)氣的LST發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)接在發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)接在BGLB肉湯管中，置肉湯管中，置361溫箱內(nèi)，培育溫箱內(nèi)，培育48h 2 小時小時,然后取出，察看產(chǎn)氣情況。然后取出，察看產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計為大腸菌群陽性管產(chǎn)氣者，計為大腸菌群陽性管 3報告報告 根據(jù)復(fù)發(fā)酵實驗的陽性管數(shù)，查大腸菌群最能夠數(shù)根據(jù)復(fù)發(fā)酵實驗的陽性管數(shù)，查大腸菌群最能夠數(shù)(MPN)檢索檢索表。得出每表。得出每1m1(g)食品中存在的大腸菌群數(shù)的近似值。食品中存在的大腸菌群數(shù)的近似值。檢樣25g或25ml225ml稀釋液，均質(zhì)10倍系列稀釋，選三個適宜稀釋度接種LST肉湯管361培育482h不產(chǎn)氣產(chǎn)氣接種BGLB肉湯361培育482h不產(chǎn)氣產(chǎn)氣大腸菌群陰性大腸菌群陽性查MPN表，報告LST發(fā)酵管景象發(fā)酵管景象1 1影響雜菌總數(shù)準(zhǔn)確性