實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基適用性檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、起單人prepared by:起草h期date:qc審核h期date:市核人reviewed by:qc審核口期date:審核人reviewed by:qa批準(zhǔn)h期date:扌烯人approved by:質(zhì)量部qd頒發(fā)部門issued byqc執(zhí)行口期effective date臟文件replaced r)rsop-qc-562-02實(shí)辦瞬基io性檢 杏標(biāo)磁作刪復(fù)審口期review date分發(fā)部門：distributed toqa,qc分發(fā)號(hào)distribution no.:目的 purpose為保障微生物檢驗(yàn)的準(zhǔn)確磁相關(guān)工作特制定本規(guī)定。范圍scope本程序適用于微&物限度測(cè)定培養(yǎng)

2、基的適用性檢査及相關(guān)丁作。responsibility分析員：嚴(yán)格按照木操作規(guī)程執(zhí)行。及時(shí)完成各類相關(guān)拆。在上管的指導(dǎo)下進(jìn)行任何可能的00s及偏并調(diào)杳。主管：監(jiān)督本操作規(guī)程的執(zhí)行。對(duì)檢驗(yàn)員進(jìn)行必要的培訓(xùn)。指導(dǎo)任何町能的00s和偏外調(diào)查。內(nèi)容procedure1 檢驗(yàn)員應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基配偉耀序或培養(yǎng)基各自的說明書配刪養(yǎng)基。2 '謂釧菌種及培養(yǎng)基2.1 菌種：2.1.1培養(yǎng)基貝敏度測(cè)試所川的菌株傳代次數(shù)吋j超過5代，從國(guó)家藥檢所或菌種儷中心購(gòu)買。2.1.2枯草芽f包桿菌(bacillus subtilis)atcc 66332.1.3人腸埃希菌(escherichia coli) atcc 8

3、7392.1.4金黃色葡萄球菌(staphylococcus aureus) atcc 65382.1.5白色斜菌(candida albicans) atcc 102312.1.6黑曲霉(aspergillus niger) atcc 164o4j2.1.7傷寒沙門菌(salmonella) atcc 14()2812.1.8銅綠假小胞菌(pseudomonas aeniginosa) atcc 90272.2 培養(yǎng)基2.2.1按照培養(yǎng)基說明書進(jìn)行配制滅菌。2.2.2人b.酪蛋口消化肉湯 soybean-casein digest broth2.2.3酪蛋白消彳曲月旨 soybean-cas

4、ein digest agar2.2.4沙氏葡萄糖瓊脂sabouraud dextrose agar2.2.5腸道菌增菌肉湯 entembacteria enrichment broth mossel2.2.6紫紅刨駙匍萄糖瓊u旨violet red bile glucose agar2.2.7麥愿幾肉湯macconkey broth2.2.8 麥/拗麻脂 macconkey agar2.2.9 rv 沙門氏菌富集肉湯 rappaport vassiliadis salmonella enrichment bmth2.2.10 木wi賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂 xylose lysine deoxyc

5、holate agar2.2.11 lt霧醇氯化鈉瓊丿曲餅基mannitol salt agar2.3微生物i i 數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢査2.3.1微生物計(jì)數(shù)用的成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均丿、'、/進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢杳。232菌懸液的制備名稱金黃色葡萄球菌atcc 6538瞬假單胞菌atcc 9027菌刪備人豆酪蛋門消化肉湯或人豆酪蛋門消化瓊d旨人豆酪蛋門消化肉湯或人豆酪蛋門消化瓊j旨30°c35°c, 18-24 小時(shí)30°c-35°c, 18-24 小時(shí)名稱枯草菌 atcc 6633白色念珠菌atcc 10231菌株制備大戸

6、酪蛋白消化肉湯或大戸酪蛋h消化，刺旨沙氏衙萄糖瓊脂30°c-35°c, 18-24 小吋20°c-25°c, 2-3 天名稱黑曲霉atcc 16404菌刪備沙氏荷萄臟脂20°c-25°c, 57天 或者宜到 形成良好僦了狀態(tài)2.3.3 i謎培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶沁ph7.2臓鹽緩沖液制成每linl含菌數(shù)不大j- loocfii的菌懸 液,制備黑曲每他子懸浮液時(shí)，添加3-5ml含0.05% （ml/nil）聚山梨酯）的0.9%無菌氯化鈉溶液 或ph7.2磷酸鹽緩沖液，將砲子洗脫。然后，用適宜加去吸岀砲子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.0

7、5% （ml/ml）聚山梨酯80的0.9%菌氯化鈉溶液或ph7.2磷酸鹽緩河液制成每lml含孑包了數(shù)不人于loocfii 的他 侶液。菌懸液在室溫下放直應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用，若保存在28°c可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑|11| 霉他了懸液町保存在2-8°c,在驗(yàn)訐過的貯存期內(nèi)例ijo2.4 大9酪蛋白消化肉湯促生氏試驗(yàn)2.4.1取以i.前3利菌懸液各0.1ml（不大jtoocfu）,分另入滅過菌的含有10ml大豆酪蛋白消化肉湯的 試管屮，于30°c-35°c培養(yǎng)不超過3天。同時(shí)用相應(yīng)的上一批通過促住知滋的培養(yǎng)基替代被檢培 養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。培養(yǎng)結(jié)束后進(jìn)行觀察，如果

8、肉眼能淸晰看到的微牛物的牛長(zhǎng)與上批通過促牛: 長(zhǎng)試驗(yàn)的培養(yǎng)基的牛長(zhǎng)情形基本致貝ij判定此養(yǎng)基通過促牛長(zhǎng)試驗(yàn)。反之則判定此培養(yǎng)基不符 定，促心長(zhǎng)極2.5 大豆酪蛋白消化瓊丿j訝u沙氏衙萄糖瓊脂促生長(zhǎng)試驗(yàn)2.5.1取以上5利菌懸液各1ml （不大于于100c1u）,分另雌入無菌平皿中，立即傾注人u酪蛋口消化 月旨，侮株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平血，混勻、凝固，置3o°c35°c培養(yǎng)不超過3天，計(jì)數(shù)，后2種菌 懸液不超過5天，計(jì)數(shù)。再取后2利菌懸液各少于loocfti,分為肚入無菌平皿中，立即傾注沙氏衙 萄糖瓊脂，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻、凝固，置20°c-25

9、76;c培養(yǎng)不超過5天，計(jì)數(shù)。同時(shí)用相應(yīng)的上井闕促牛©般的培養(yǎng)m弋被粗咅養(yǎng)基進(jìn)行垃越 進(jìn)行促牛©式驗(yàn)的培養(yǎng) 基平|吐，鯉物生長(zhǎng)劇泌須與n過促生長(zhǎng)i期僉的培基旳i吐的彳坯物生長(zhǎng)肯況一致財(cái)更 好，同i寸將待測(cè)定的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)與已通過促牛長(zhǎng)試驗(yàn)的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)對(duì)比，兩者之間的 比值應(yīng)處于70%-200%之間,貝ij判定此培養(yǎng)基通過促牛長(zhǎng)試驗(yàn)；反之則判定該培養(yǎng)基不符規(guī)定，未2.6 控制菌測(cè)wf用培養(yǎng)基的性檢查2.6.1控制菌檢查用的成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢杳。2.6.2菌懸液的制備趨菌種菌粗餅1金黃色葡萄球菌atcc 6538人u酪蛋

10、口消化肉湯或人u酪蛋肖化瓊脂30°c-35°c, 18-24小吋2銅綠假單胞菌 atcc 9027人豆酪蛋白消化肉湯或人豆酪蛋白消化瓊脂30°c-35°c, 18-24小時(shí)3枯草芽砲桿菌 atcc 6633人u酪蛋口消化肉湯或人u酪蛋肖化瓊脂30°c-35°c, 18-24小吋4畑埃希菌atcc 8739人豆酪蛋白消化肉湯或人豆酪蛋白消化瓊脂30°c-35°c, 18-24小時(shí)5鼠傷寒沙門菌 atcc 14028人址酪蛋白消化肉湯或人豆酪蛋白消化瓊脂30°c-35°c, 18-24小時(shí)2.6.3

11、 閔咅猶勿用0.9%無菌氯化鈉溶沁ph7.2磷融緩沖液制輕白沁的菌師 菌融直溫下 放置應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用，若保存在28°c可在24小時(shí)內(nèi)使用。2.6.4控制菌檢查川培養(yǎng)基的適）1刖檢查項(xiàng)冃包括培慕的促生長(zhǎng)能力、抑制能力及指示能力的檢查。各 培養(yǎng)基的檢査測(cè)試項(xiàng)h妬用菌株見下表控制腐檢查瞬基特性翩菌株州十耐受革蘭氏 陰性菌的檢測(cè)腸道菌增菌肉湯培養(yǎng)基促牛長(zhǎng)能力皿埃希菌銅纟勰單胞菌金黃色葡萄球菌畑刨旦汁葡鋼鯨脂促牛長(zhǎng)能力+扌8*5能力顧矣希菌 銅綠假單胞菌人腸桿菌的檢測(cè)麥劇1肉湯促牛:長(zhǎng)能力換埃希菌抑制育幼金黃色鯛球菌麥刪體腺咅養(yǎng)基船長(zhǎng)能力+指示能力畑埃希菌沙門氏菌的檢測(cè)rv沙門氏菌富集肉湯促

12、生長(zhǎng)能力鼠傷寒沙門菌齣能力金黃色葡萄球菌鹽瓊脂培養(yǎng) 基促牛長(zhǎng)能力+柝能力鼠濮沙門菌銅綠假單胞菌的oj漠化十六魅甲脂砒長(zhǎng)勒銅鋼單胞菌陶矣希菌金黃色制鋼菌片露醇氯化鈉瓊畑誹基促牛長(zhǎng)能力+指示能力金黃色窗的檢則抑制能力畑埃希菌2.7 液體培養(yǎng)楓生t能力檢查収試驗(yàn)菌各0.1ml （含菌數(shù)不大于loocfb）（見l表）于被檢i咅養(yǎng)基和上-批檢驗(yàn)并通過的培養(yǎng)基中，在相 融制菌檢査規(guī)的培湄s度軸短培獅t間卜培孤兩者比較，被檢1 耕基與上-批驗(yàn)并測(cè)的晞 基比較，微牛物牛長(zhǎng)良好并口相當(dāng)。2.8 固體培養(yǎng)基促牛長(zhǎng)能力檢査取試驗(yàn)菌各0.1ml （含菌數(shù)不大于loocfo）（見上表）分另i賒布于彼檢培和上一批檢驗(yàn)并通

13、過的培養(yǎng)基 中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最舫轎時(shí)間下培養(yǎng)。兩者比較，被檢培與上一批檢驗(yàn)并通 過的培養(yǎng)基比較，微生物生憐良好并一目相當(dāng)。2.9 液體培養(yǎng)基和固體培基的抑制能力檢查収試驗(yàn)菌各0.1ml （含菌數(shù)不小于loocfti）（見1：農(nóng)）于被檢培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度 如慟寸間下土樣試撿菌應(yīng)榴生長(zhǎng)。2.10 土耕斟際能力檢杏取試驗(yàn)菌各0.1ml （含菌數(shù)不人于loocfu）（見上表）分別涂布于被檢培養(yǎng)基w上一批檢驗(yàn)并通過的培養(yǎng)基 屮，在相丿'v控制腐檢杳規(guī)定的培養(yǎng)溫度及時(shí)間范|韋1內(nèi)培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)基屮生長(zhǎng)的菌落在外觀和指示反/、'肚 與從此前c檢測(cè)并批

14、準(zhǔn)的培養(yǎng)基批次所獲得的菌落是丹i當(dāng)?shù)摹? 參考文件current usp、bp、ep附件及件attachment cmd related documentsr01微生物計(jì)數(shù)固體培基適h剛檢查記r02 她協(xié)i數(shù)液催咅養(yǎng)基jsffl性檢奮盡r03微生物控制菌培養(yǎng)基瀕性檢査歸 歷史 history修訂號(hào)牛效口期修訂內(nèi)容001 培養(yǎng)基促生長(zhǎng)、抑制能力等規(guī)定了試驗(yàn)菌的取樣魚tsi group yessamin health標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程standard operating procedure貝碼/page: 6 of 8實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基適用性檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程standard operating procedu

15、re for growth promotion test of media編號(hào)/no： sop-qc-moio版本號(hào)/version: 00附件編號(hào)attachment no.:r()l微生物計(jì)數(shù)固體培養(yǎng)基適用性檢查記錄growth promotion test of solid media for microbial enumeration test培養(yǎng)基名稱廠家/批號(hào)配制后批號(hào)有效期至檢驗(yàn)h期培養(yǎng)溫度培養(yǎng)箱編號(hào)有效期至對(duì)照批號(hào)有效期至檢驗(yàn)員1 操作步驟1.1使用().9%無菌氯化鈉溶液或磷酸鹽緩沖液制備測(cè)試菌懸液，制備黑也霉抱了懸浮液時(shí)，可以添加().()5%的聚山梨脂8()到緩沖液屮。測(cè)

16、試菌懸液m在兩小時(shí) 內(nèi)使用，或者在28°c的條件下24小時(shí)內(nèi)使用。1.2取金黃色制萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽砲桿菌、白色念珠菌、黑曲霉5種菌懸液各少于loocfu,分別注入無菌平1111中，立即傾注人豆酪蛋白消化瓊脂， 每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻、凝固，置30°c-35°c培養(yǎng)不超過3天，計(jì)數(shù)；后2種菌懸液不超過5天，計(jì)數(shù)。再取后2種菌懸液各少于loocfu,分 別注入無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻、凝固，置20°c-25°c培養(yǎng)不超過5天，計(jì)數(shù)。取銅綠假單胞菌、枯草 芽抱桿菌2種菌懸液各少于loo

17、cfu,分別注入無菌平皿屮，立即傾注r2a,每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平111l,混勻、凝固，置30°c35°c培養(yǎng)不超過3犬。同 時(shí)用相應(yīng)的上-批通過促生長(zhǎng)測(cè)試的培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。1.3進(jìn)行促生長(zhǎng)試驗(yàn)的培養(yǎng)基平1111上，微生物生長(zhǎng)情況必須與已通過促生長(zhǎng)測(cè)試的培養(yǎng)基平皿上的微生物生長(zhǎng)情況一致或者更好，同時(shí)將待測(cè)定的培養(yǎng)基上的菌 落數(shù)與已通過促生長(zhǎng)測(cè)試的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)對(duì)比，兩者z間的比值應(yīng)處于70%-200%z間，則判定此培養(yǎng)基通過促牛長(zhǎng)測(cè)試；反z則判定該培養(yǎng)基不符合 規(guī)定，未通過促生長(zhǎng)測(cè)試。2 記錄：菌種菌液批號(hào)開始培養(yǎng) 時(shí)間/溫度結(jié)束培養(yǎng) 時(shí)間/溫度測(cè)試培

18、養(yǎng)基菌落數(shù)對(duì)照培養(yǎng)基菌落數(shù)對(duì)比生長(zhǎng)情況(基木一致或更好)兩者比值(70%-200% 之間)觀察員結(jié)果 判定平皿1平 1111 2平均平皿1平皿2平均tsi group yessamin health標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程standard operating procedure貝碼/page: 7 of 8實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基適用性檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程standard operating procedure for growth promotion test of media編號(hào)/no： sop-qc-moio版本號(hào)/version: 00附#號(hào) attachment no:r02微生物計(jì)磁體辭基銅性檢growth

19、promotion test of liquid media for microbial enumeration test培養(yǎng)基稱廠家批號(hào)配制后批號(hào)ww1至培和編號(hào)有效期至對(duì)照批號(hào)有效期至檢驗(yàn)員檢驗(yàn)口期1操作步驟1.1使用0.陽無菌氯化鈉溶液或ph7. 2磷酸4j緩沖液制備測(cè)試菌懸液。測(cè)試菌懸液應(yīng)在兩小時(shí)內(nèi)使用，或者在2-8°c的條件下 24小時(shí)內(nèi)使用。1.2取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌3種菌懸液各少刊oocfu,分娜主入滅過菌的含有10ml川鵬蛋口消 化肉湯的試管中，于3()°c35°c培養(yǎng)不超過3天。同時(shí)用相應(yīng)的上一批通過促生長(zhǎng)測(cè)ji式的培養(yǎng)基

20、替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述 測(cè)僉。培髀朿后進(jìn)行觀察。13如果肉眼能清晰看到的微生物的生長(zhǎng)與上一批逋過滅敏度測(cè)試的培養(yǎng)基的生長(zhǎng)痔形相同的話，則判定此培養(yǎng)棊通過促生長(zhǎng) 測(cè)試。反z則判定此®養(yǎng)基不符合規(guī)定，未通過促牛長(zhǎng)測(cè)試。2 -鈕開姆繇時(shí)1'沏艇結(jié)束瞬時(shí)堿艇菌種菌液批巧測(cè)冊(cè)養(yǎng)基 q：長(zhǎng)惰況對(duì)照培養(yǎng)基 仆長(zhǎng)惰況對(duì)比生長(zhǎng)悄況(基 本致或更好)觀察員結(jié)果判定祐不杯齡不樸符合科跆口 期 date:復(fù)核人 checked by:tsi groupyessamin health標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程standard operating procedure貝碼/page: 8 of 8實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基適用性檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程standard operating procedure for growth promotion test of media編號(hào)/no： sop-qc-moio版本號(hào)/version: 00微生物控制菌培養(yǎng)基適用性檢查記錄培養(yǎng)基名稱廠家/批號(hào)配制后批號(hào)有效期至檢驗(yàn)口期培養(yǎng)溫度培養(yǎng)箱編號(hào)有效期至對(duì)照批號(hào)有效期至檢驗(yàn)員1操作步驟1.1使用0.9%無菌氯化鈉溶液或ph7.2磷酸鹽緩沖液制備菌懸