幾種牛結(jié)核病檢疫方法在結(jié)核污染牛群中的應(yīng)用研究的認(rèn)識

1、    幾種牛結(jié)核病檢疫方法在結(jié)核污染牛群中的應(yīng)用研究的認(rèn)識    吳肅摘 要：文章主要針對幾種牛結(jié)核病檢疫方法在結(jié)核污染牛群中的應(yīng)用進(jìn)行分析，結(jié)合當(dāng)下牛結(jié)核病檢疫方法發(fā)展現(xiàn)狀，從實驗材料與方法、研究結(jié)果、研究分析方面進(jìn)行深入研究與探索，更好的推動牛結(jié)核病檢疫方法的發(fā)展與進(jìn)步。關(guān)鍵詞：牛結(jié)核?。粰z疫方法；結(jié)核污染隨著我國畜牧業(yè)的快速發(fā)展，牛結(jié)核病情在我國的蔓延程度也逐漸加快，使得人們對于其檢疫方法逐漸重視，并通過科學(xué)方法實現(xiàn)對牛結(jié)核病的預(yù)防與控制。但當(dāng)前我國經(jīng)常使用的方法為皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)，而對其的運用也缺少相應(yīng)的成熟性。一些發(fā)達(dá)國家則長使用皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)與-

2、干擾素等試驗方法，進(jìn)而在其良好的檢測效果影響下，使得其受到了人們的廣泛關(guān)注與認(rèn)同。一、研究材料與方法1.研究材料。首先，準(zhǔn)備較為完善的單純牛型提純結(jié)核菌素（ppd）與像一個的試劑盒。其中變態(tài)反應(yīng)試劑主要分為進(jìn)口牛型提純的ppd與禽型提純的ppd，同時還配備良好的牛結(jié)核分枝桿菌，即-干擾素檢測試劑盒。其次，研究使用的牛群主要為我國某地區(qū)2880頭活牛。2.研究方法。其一，牛結(jié)核皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)實驗。其主要結(jié)合我國有關(guān)部門制定的動物結(jié)核并診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行科學(xué)的研究與處理。其二，歐美對比變態(tài)反應(yīng)。其與牛結(jié)核變態(tài)反應(yīng)實驗具有較強的相似性，也就是在對ppd注射的基礎(chǔ)上，在牛境位置的其他位置（最好為另一側(cè)）一

3、同注射注射進(jìn)口牛型與禽型ppd，而兩者之間的間隔應(yīng)為12厘米至15厘米之間，注射計量為每頭牛3000iu與2500iu。其中注射前后的實驗結(jié)果檢測應(yīng)有同一人完成。其三，-干擾素檢測。這種實驗可分兩個方面：一方面為抗原刺激。對每頭牛都采集5ml肝素抗凝血液，并在室溫環(huán)境下30小時內(nèi)運輸?shù)綄嶒炍恢?。接著將各抗凝血提?.5ml防止在3個孔洞中，在使用100l牛型ppd、禽型ppd、陰性對照；磷鹽酸緩沖液等添加至抗凝全血中，在均勻攪拌后放置時在二氧化碳含量為5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16小時，其中培養(yǎng)箱溫度為37。同時在使用移液器對培養(yǎng)的上清液進(jìn)行吸取，并將其防止在0.5ml離心管中，這就是刺激形成的-干擾

4、素上清。對其可第一時間使用相應(yīng)的設(shè)備進(jìn)行檢測或進(jìn)行冷凍存儲，在條件與時間等允許時在進(jìn)行檢測。另一方面為-干擾素酶聯(lián)免疫吸附實驗。即在單抗包被板上的各個孔洞中添加50l樣品稀釋液，接著在加入50l待檢測樣品，在混合后放置在室溫環(huán)境中一小時左右，這時在各孔洞中加入100l酶標(biāo)抗體。并在背光的室溫環(huán)境下放置30min后添加終止液，步步高對其od值進(jìn)行檢測。若牛型ppd刺激上清od值大于0.1，則明證其為陽性，若小于則為陰性。其四，頸部變態(tài)反應(yīng)實驗。對該實驗附近各散戶牛群共13587頭活畜進(jìn)行國內(nèi)的單純頸部變態(tài)反應(yīng)檢疫處理。其五，歐盟比較變態(tài)反應(yīng)。對在進(jìn)行頸部變態(tài)反應(yīng)實驗后檢測為陽性的牛進(jìn)行比較變態(tài)反

5、應(yīng)研究、-干擾素檢測以及病理解刨檢測等實驗，并通過實驗數(shù)發(fā)展，這幾種牛結(jié)核病檢疫方法的陽性符合率。二、研究結(jié)果對該研究地區(qū)附近共13587頭活畜進(jìn)行頸部變態(tài)反應(yīng)實驗后，檢測為陽性的數(shù)量為45頭。以此為基礎(chǔ)進(jìn)行比較試驗可以發(fā)現(xiàn)，通過比較變態(tài)反應(yīng)研究的牛型與禽型ppd分為20頭與6頭、-干擾素檢測發(fā)現(xiàn)牛型與禽型ppd分為28頭與3頭，而通過病理解剖發(fā)現(xiàn)具有病變數(shù)量為24頭。三、研究分析1.牛結(jié)核活禽檢疫方法的選擇。當(dāng)前對于牛結(jié)核病的診斷措施通常為病原學(xué)診斷與免疫學(xué)診斷，其中病原學(xué)診斷可分為細(xì)菌學(xué)檢測與分子生物學(xué)檢測兩種技術(shù)。而在發(fā)達(dá)國家中經(jīng)常使用細(xì)菌學(xué)診斷方法，但因其分枝桿菌的生長較為緩慢，使得這

6、種方法在使用時需要消耗大量的時間。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)揮，一些研究人員創(chuàng)建了pcr對牛結(jié)核病進(jìn)行診斷，各種試驗結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)其敏感性相對較弱，其原因可能與體內(nèi)分支桿菌的繁殖特性具有一定的關(guān)聯(lián)。同時這些方法需要對死亡家禽病料進(jìn)行收集，所以病原學(xué)檢測不太符合活禽檢疫需求。另外免疫學(xué)檢測方法可分為抗體檢測與細(xì)胞免疫檢測兩種方法，而其牛結(jié)核的免疫主要以免疫細(xì)胞為基礎(chǔ)，這也使得抗體檢測敏感度相對較小，所以當(dāng)前在牛結(jié)核臨床診斷期間，細(xì)胞免疫學(xué)診斷方法有著較為廣泛的使用。2.干擾素實驗分析。當(dāng)前牛-干擾素實驗檢測有著有著較為廣泛的使用與寬闊的發(fā)展空間，并逐漸成為發(fā)達(dá)國家主要的牛結(jié)核并檢疫方法。其中-干擾素試驗與進(jìn)

7、口比較變態(tài)反應(yīng)試驗都有著較強的符合率，同時還可在實驗中對直接進(jìn)行這一試驗，使其判斷結(jié)果具有較強的客觀性，與皮試試驗相比較，試驗所需要使用的時間也相對較短。若在特殊條件下以-干擾素試驗為基礎(chǔ)與標(biāo)準(zhǔn)對檢疫結(jié)果為陽性的牛進(jìn)行撲殺時，會有效的降低牛不殺數(shù)量，避免養(yǎng)殖人員出現(xiàn)不必要的經(jīng)濟(jì)損失。與此同時，這種方法還可與布病檢疫進(jìn)行有機結(jié)合，即在進(jìn)行一次抽血后可對兩種病疫進(jìn)行科學(xué)的檢測。所以這也使得-干擾素試驗在牛結(jié)核病檢疫中有著較為廣闊的發(fā)展空間。同樣這一方法也存在著相應(yīng)的不足與缺陷，其中檢測成本較高以及需要在具有較強水平實驗室中進(jìn)行檢測是其主要的問題之一。3.比較變態(tài)反應(yīng)分析?，F(xiàn)階段，各發(fā)達(dá)國家主要以比

8、較變態(tài)反應(yīng)為基礎(chǔ)對結(jié)核檢測為陽性牛群進(jìn)行捕殺。我國相關(guān)研究實驗也證明了，比較變態(tài)反應(yīng)可較好對一些禽類ppd陽性牛進(jìn)行清除，但卻認(rèn)為禽型ppd陽性主要是由禽分支桿菌引發(fā)的非特異反應(yīng)。在該次實驗中，這種檢測方法的陽性符合率約為47.8%，與-干擾素試驗的陽性符合率66.7%相比較小。而其禽型檢出率卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于-干擾素試驗，其主主要原可能為人們操作以及主觀分析判斷期間相關(guān)因素所導(dǎo)致。4.病理解剖檢測。對病牛尸體進(jìn)行解剖，進(jìn)而較為直觀的分析與觀測結(jié)核病位置，這也是得該方法具有較強的直觀性。在該次研究期間，病理解刨與常規(guī)的ppd變態(tài)反應(yīng)試驗的符合率都相對較小，而比較變態(tài)試驗與-干擾素試驗的符合率則相對較高

9、，這也在一定程度上表明了存在禽類結(jié)核的干擾，并充分的證明了-干擾素試驗與比較變態(tài)反應(yīng)試驗具有較強的精準(zhǔn)性。與此同時，在病理解刨期間若沒有發(fā)現(xiàn)結(jié)核病灶時，也不可證明其沒有感染結(jié)核病癥，其中病理解剖還有著相應(yīng)的危險性，因此在臨床普查中的推廣受到阻礙。四、結(jié)語綜上所述，通過實際分析與研究后可以發(fā)現(xiàn)，國產(chǎn)ppd檢測仍屬于我國當(dāng)前進(jìn)行牛結(jié)核病檢疫期間，需要不斷進(jìn)行推廣與優(yōu)化的主要技術(shù)與方法。該方法可較為良好的檢測出結(jié)核剛性牛，同時在輔助其他方法可更好的實現(xiàn)其發(fā)展與進(jìn)步。參考文獻(xiàn)：1巴提馬·賽甫拉.牛結(jié)核病檢疫方法研究進(jìn)展研究j.北京農(nóng)業(yè)，2014（27）.2徐敏，許禮義，王六合，王文秀，馬衛(wèi)平，呼西旦，徐志光，孫國林.幾種牛結(jié)核病檢疫方法在結(jié)核污染牛群中的應(yīng)用研究j.草食家畜，2011（02）.3劉金曄，郝永清.牛結(jié)核病檢疫方法