武漢理工大學(xué)中藥學(xué)課件

1、第三章 中藥制劑的檢查樓一層樓一層制劑通則檢查一般雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查微生物限度檢查通則檢查之一物理常數(shù)測定物理常數(shù)測定n相對密度比重瓶和韋氏比重秤w檢查樣品的純雜程度n熔點n凝點】 比重瓶法比重瓶法毛細(xì)管法毛細(xì)管法測定熔點測定熔點顯微熔點測定儀顯微熔點測定儀第一節(jié) 中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)雜質(zhì)：指能危害人體健康或影響藥物質(zhì)量的物質(zhì)。雜質(zhì)的分類雜質(zhì)的分類一般雜質(zhì)（如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽）特殊雜質(zhì)雜質(zhì)來源雜質(zhì)來源n中藥材原料中帶入n生產(chǎn)制備過程中引入n貯存過程中引起的中藥制劑自身理化性質(zhì)的改變第一節(jié) 中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)的限量檢查雜質(zhì)的限量檢查 雜質(zhì)限量雜質(zhì)限量：指藥物中

2、所含雜質(zhì)的最大允許量，通常用指藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，通常用%或或 ppm來表示。來表示。雜質(zhì)限量檢查及計算方法雜質(zhì)限量檢查及計算方法取一定量與被檢雜質(zhì)相同的純物質(zhì)或其它對照品配制成標(biāo)準(zhǔn)溶取一定量與被檢雜質(zhì)相同的純物質(zhì)或其它對照品配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液，與一定量供試藥物的溶液，在相同處理條件下，比較反應(yīng)液，與一定量供試藥物的溶液，在相同處理條件下，比較反應(yīng)結(jié)果，從而確定雜質(zhì)限量是否超過規(guī)定結(jié)果，從而確定雜質(zhì)限量是否超過規(guī)定 %100樣品量雜質(zhì)最大允許量雜質(zhì)限量%100%100SCVLSCVL）樣品量（）標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（）標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（）雜質(zhì)限量（注射用雙黃連（凍干）中砷鹽限量檢查注射用雙黃連（凍

3、干）中砷鹽限量檢查 取本品取本品0.4g，加，加2%硝酸鎂乙醇溶液硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡后，先用，點燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在小火熾灼使炭化，再在500600熾灼使完全灰化，放冷，加熾灼使完全灰化，放冷，加鹽酸鹽酸5ml與水與水21ml使溶解，依法檢查（中國藥典使溶解，依法檢查（中國藥典2000版附錄版附錄 F）。）。如果標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（如果標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（1gAs/ml）取用量為）取用量為2ml，雜質(zhì)限量的計算如下：，雜質(zhì)限量的計算如下：百萬分之五%0005. 0%1004 . 0100 . 12%100)()/()(6gSmlgCmlVL第一節(jié) 中藥制劑雜質(zhì)檢查雜質(zhì)的限量檢查雜

4、質(zhì)的限量檢查 不用標(biāo)準(zhǔn)溶液，直接在供試品溶液中加入試劑進(jìn)行檢查。肉桂油中重金屬檢查肉桂油中重金屬檢查取肉桂油取肉桂油10ml10ml，加水，加水10ml10ml與鹽酸與鹽酸1 1滴，振搖后，通硫化氫氣使滴，振搖后，通硫化氫氣使飽和，水層與油層均不得變色。飽和，水層與油層均不得變色。 第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法重金屬檢查法n重金屬重金屬：在實驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)。n重金屬檢查法基本原理重金屬檢查法基本原理 CH3CSNH2+H2O CH3CONH2+H2S Pb2+H2SPbS+2H+pH3.5第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法 重金屬檢查法重金屬檢查法 檢查方法檢查

5、方法第一法第一法 硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法第二法第二法 熾灼殘渣法熾灼殘渣法第三法第三法 硫化鈉法硫化鈉法第四法第四法 微孔濾膜過濾法微孔濾膜過濾法第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法重金屬檢查法n檢查方法方方 法法適用范圍適用范圍檢檢 查查 方方 法法第一法第一法適用于供試品不經(jīng)有適用于供試品不經(jīng)有機(jī)破壞，在酸性溶液機(jī)破壞，在酸性溶液中顯色的重金屬限量中顯色的重金屬限量檢查。檢查。甲管：標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（甲管：標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（1g/ml）+醋酸鹽緩沖液（醋酸鹽緩沖液（pH3.5） 2ml + 水或各藥品項下規(guī)定的溶劑稀釋成水或各藥品項下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml；乙管：供試品溶液乙管：供試品溶液25ml

6、；甲管甲管 硫代乙酰胺試液各硫代乙酰胺試液各2ml搖勻搖勻放置放置2分鐘分鐘同置白紙同置白紙 上上,自上向下透視自上向下透視乙管中顯出的顏色不得比甲管更深。乙管中顯出的顏色不得比甲管更深。乙管乙管 第二法第二法適用于供試品需灼燒適用于供試品需灼燒破壞，取熾灼殘渣項破壞，取熾灼殘渣項下遺留的殘渣，經(jīng)處下遺留的殘渣，經(jīng)處理后在酸性溶液中顯理后在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查。色的重金屬限量檢查。取熾灼殘渣項下遺留的殘渣取熾灼殘渣項下遺留的殘渣加硝酸加硝酸0.5ml0.5ml蒸干至氧化氮蒸蒸干至氧化氮蒸氣除盡氣除盡放冷放冷加鹽酸加鹽酸2ml2ml置水浴上蒸干置水浴上蒸干加水加水15ml15ml滴加滴

7、加氨試液至對酚酞指示液顯中性氨試液至對酚酞指示液顯中性加醋酸鹽緩沖液（加醋酸鹽緩沖液（pH3.5pH3.5）2ml2ml微熱溶解微熱溶解移置納氏比色管中移置納氏比色管中加水稀釋成加水稀釋成25ml25ml；另取配制供試品溶液的試劑另取配制供試品溶液的試劑置瓷皿中蒸干置瓷皿中蒸干加醋酸鹽緩沖加醋酸鹽緩沖液（液（pH3.5pH3.5）2ml2ml水水15ml15ml微熱溶解微熱溶解移置納氏比色管中移置納氏比色管中加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量用水稀釋成用水稀釋成25ml25ml；以上兩管溶液，照上述第一法檢查。以上兩管溶液，照上述第一法檢查。第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法重金屬檢查法n

8、檢查方法方方 法法適用范圍適用范圍檢檢 查查 方方 法法第三法第三法適用于檢查能溶適用于檢查能溶于堿而不溶于稀于堿而不溶于稀酸（或在稀酸中酸（或在稀酸中即生成沉淀）的即生成沉淀）的藥品中的重金屬。藥品中的重金屬。甲管：標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液適量甲管：標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液適量 + + 氫氧化鈉試液氫氧化鈉試液5ml + 5ml + 水水 20ml + 20ml + 硫化鈉試液硫化鈉試液5 5滴，搖勻；滴，搖勻；乙管：供試品適量乙管：供試品適量 + + 加氫氧化鈉試液加氫氧化鈉試液5ml + 5ml + 水水20ml20ml 溶解溶解置納氏比色管中置納氏比色管中 + + 加硫化鈉試液加硫化鈉試液5 5滴，滴， 搖勻；搖

9、勻；兩管比較，乙管顏色不得比甲管深。兩管比較，乙管顏色不得比甲管深。第四法第四法適用于有色溶液適用于有色溶液或重金屬限量低或重金屬限量低的品種。的品種。用微孔濾膜過濾，使重金屬硫化物沉淀富集成色斑后用微孔濾膜過濾，使重金屬硫化物沉淀富集成色斑后與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液獲得的色斑進(jìn)行比較檢查。與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液獲得的色斑進(jìn)行比較檢查。第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法重金屬檢查法重金屬檢查法n注意事項注意事項w方法靈敏度方法靈敏度 適用于含鉛量在10g-30g之間。標(biāo)準(zhǔn)鉛液的用量以20g（相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2ml）為宜。w反應(yīng)條件反應(yīng)條件 硫代乙酰胺試液與重金屬反應(yīng)的最佳pH值是3.5，硫代乙酰胺試液加入量以2m

10、l時呈色最深，最佳顯色時間為2分鐘。w有色供試液的處理有色供試液的處理 供試品在加硫代乙酰胺試液以前如帶色，可用稀焦糖液或加常用的指示劑調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)溶液，使兩者顏色一致。w其他離子的干擾nFe3+- 加抗壞血酸。n當(dāng)使用鹽酸超過1.0ml、氨試液超過2 ml，以及用硫酸或硝酸進(jìn)行有機(jī)破壞，或加入其他試劑進(jìn)行處理者，對照溶液應(yīng)取同樣量試液蒸干后，依法檢查。n鐵鹽供試品，可利用Fe3+在比重為1.103-1.105的鹽酸（鹽酸9ml與蒸餾水6ml的混合液）中成為HFeC162-，可用乙醚提取而除去，再將酸性溶液加氨試液使呈堿性后，用氰化鉀作為微量鐵鹽的掩蔽劑，再加硫化鈉試液測定。第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方

11、法重金屬檢查法重金屬檢查法n注意事項注意事項w前處理前處理 需將藥品灼燒破壞，使有機(jī)物分子中的重金屬游離。灼燒時熾灼溫度必須控制在500600。w其他其他n標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液應(yīng)在臨用前精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液新鮮稀釋配制n硫化鈉試液應(yīng)采用分析純的硫化鈉配制，貯存在棕色瓶中可保存12個月。n含有Pb2+的中性或弱酸性溶液，如需過濾，可加入對酚酞呈微堿性的飽和醋酸銨溶液，溫?zé)岷笥弥睆捷^小的定量濾紙濾過，或者選用玻砂漏斗過濾。n如供試品本身能生成不溶性硫化物時，影響重金屬的檢查，可加入適當(dāng)?shù)难诒蝿?第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查砷鹽檢查：藥品中微量砷（以As計算）的限量檢查n古蔡氏法古蔡氏法n二乙基二硫代氨

12、基甲酸銀法二乙基二硫代氨基甲酸銀法過去過去第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查砷鹽檢查：n古蔡氏法古蔡氏法w基本原理 AsO33-+3Zn+9H+AsH3+3Zn2+3H2O AsH3+2HgBr22HBr+AsH(HgBr)2 (黃色) （溴化汞試紙） AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3 (棕色) As(V)反應(yīng)慢，須將As(V)還原成As(III)初生初生態(tài)的態(tài)的氫氫第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查砷鹽檢查：n古蔡氏法古蔡氏法 AsO43-+2I-+2H+ AsO33-+I2+H2O AsO43-+Sn2+2H+AsO33-+Sn4+H2O I2+Sn2+2I-+ Sn4+ 4

13、I-+Zn2+ZnI42- Sn2+Zn Sn+Zn2+促進(jìn)反應(yīng)向促進(jìn)反應(yīng)向右進(jìn)行右進(jìn)行形成鋅錫齊，有利形成鋅錫齊，有利于反應(yīng)平穩(wěn)的進(jìn)行于反應(yīng)平穩(wěn)的進(jìn)行第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查砷鹽檢查：n古蔡氏法古蔡氏法 古蔡氏法檢查砷裝置古蔡氏法檢查砷裝置A: 100ml標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶B: 中空的標(biāo)準(zhǔn)磨口塞C: 導(dǎo)氣管(外徑8.0mm，內(nèi)徑 6.0mm)，全長約180mmD/E :具孔（孔徑6.0mm）的有機(jī)玻璃旋塞HgBr2試紙試紙醋酸鉛棉醋酸鉛棉60mg(裝管高度裝管高度6-8cm)第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查砷鹽檢查：n古蔡氏法古蔡氏法 標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備 A瓶：標(biāo)準(zhǔn)砷溶液(1g

14、/ml )2ml+鹽酸5ml+水21ml+KI試液5ml+酸性SnCl2試液5滴，室溫10min A瓶鋅粒2g，接導(dǎo)氣管C 25 -40水浴45min檢查法檢查法2 一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查砷鹽檢查n古蔡氏法古蔡氏法w注意事項注意事項n方法靈敏度方法靈敏度 約為約為0.75g(以以As計計)。2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（相當(dāng)于于2 gAs）所形成的砷斑色度適中，清晰，便于辨認(rèn)。）所形成的砷斑色度適中，清晰，便于辨認(rèn)。n酸度及各種試液用量酸度及各種試液用量 反應(yīng)液的酸度相當(dāng)于反應(yīng)液的酸度相當(dāng)于2mol/L的鹽酸液。的鹽酸液。含含KI濃度為濃度為2.5%，SnC12濃度為濃度為0.3%，加入

15、鋅粒以，加入鋅粒以2g為為宜。宜。n反應(yīng)溫度和時間反應(yīng)溫度和時間: 2540，時間為，時間為45分鐘。分鐘。n鋅粒鋅粒選選用用2 mm左右粒徑左右粒徑(能通過一號篩能通過一號篩)的為宜。的為宜。n汞試紙的選擇汞試紙的選擇 選用質(zhì)量較好，組織疏松的中速定量濾紙；選用質(zhì)量較好，組織疏松的中速定量濾紙；溴化汞試紙一般宜新鮮制備。溴化汞試紙一般宜新鮮制備。n采用采用醋酸鉛棉花醋酸鉛棉花吸收除去吸收除去H2S。2000版藥典規(guī)定稱取版藥典規(guī)定稱取60mg醋酸鉛棉花，裝管高度約醋酸鉛棉花，裝管高度約80mm。 第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查砷鹽檢查：n古蔡氏法古蔡氏法w注意事項注意事項n中藥制劑的前處理

16、中藥制劑的前處理：常用酸破壞法、堿破壞法及直接炭化法等：常用酸破壞法、堿破壞法及直接炭化法等使有機(jī)砷游離出來，以氫氧化鈣破壞法較為常用。使有機(jī)砷游離出來，以氫氧化鈣破壞法較為常用。n干擾物質(zhì)：干擾物質(zhì)：如硝酸、磷、銻化合物或硫化物、亞硫酸鹽、硫代如硝酸、磷、銻化合物或硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽、碘、氯、汞、銀、鎳、鈷、銅、鐵、鉍等的干擾。硫酸鹽、碘、氯、汞、銀、鎳、鈷、銅、鐵、鉍等的干擾。n其他其他A 所用儀器、試液等的影響所用儀器、試液等的影響B(tài) 同一套儀器應(yīng)能辨別出標(biāo)準(zhǔn)砷溶液同一套儀器應(yīng)能辨別出標(biāo)準(zhǔn)砷溶液1.5ml與與2.0ml所呈砷所呈砷斑的深淺。斑的深淺。C 標(biāo)準(zhǔn)砷溶液應(yīng)于實驗當(dāng)天配

17、制，標(biāo)準(zhǔn)砷貯備液存放時間一標(biāo)準(zhǔn)砷溶液應(yīng)于實驗當(dāng)天配制，標(biāo)準(zhǔn)砷貯備液存放時間一般不宜超過一年。般不宜超過一年。D 砷斑不穩(wěn)定，反應(yīng)應(yīng)保持干燥及避光，并立即比較。砷斑不穩(wěn)定，反應(yīng)應(yīng)保持干燥及避光，并立即比較。E 配制成的酸性氯化亞錫試液配制成的酸性氯化亞錫試液3個月后不宜使用。個月后不宜使用。 第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查砷鹽檢查：n二乙基二硫代氨基甲酸銀法（二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）法）w基本原理基本原理 既可做限量檢查，又可做含量測定。AsH3 C2H5NSSHC2H5CSSAgAg63+AsC2H5NC2H5CSS+NCSSC2H5NC2H5C3 + 6紅色膠態(tài)銀紅色膠態(tài)

18、銀第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查砷鹽檢查：n二乙基二硫代氨基甲酸銀法（二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）法）w檢查方法檢查方法Ag-DDC5ml目視檢測分光光度計, =510第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法砷鹽檢查砷鹽檢查：n二乙基二硫代氨基甲酸銀法（二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）法）w注意事項注意事項n有機(jī)堿液的選擇 吡啶(DL=0.5 gAs/30ml) 三乙胺(0.75-7.5 g范圍內(nèi), AC) n 溫度和時間：2540水浴，45min 第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法鐵鹽檢查法鐵鹽檢查法n硫氰酸鹽法硫氰酸鹽法(CP)w原理原理 Fe3+6SCN- Fe(SCN)63-w檢查方法

19、檢查方法供試品標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液w方法靈敏度方法靈敏度 20-50 g Fe3+ /50ml H+H20至25ml, +稀HCl4ml, +(NH4)2S2O850mg, +H20至35ml, +30%NH4SCN3ml, +H20至50ml第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法鐵鹽檢查法鐵鹽檢查法n巰基醋酸法（巰基醋酸法（EP） 2Fe3+2HSCH2COOH 2Fe2+HOOCCH2-S-S-CH2COOH+2H+Fe2+2HSCH2COOH Fe(SCH2COOH)2 +2H+ Fe(SCH2COOH)2 +2OH- Fe(SCH2COO)22-+2H2O 第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法硫酸鹽檢查法硫酸鹽檢查法SO

20、42- + Ba2+ BaSO4 (白色混懸液)（pH 1，25-30，+25%BaCl2) 適宜的濃度范圍：100-500 g SO42- /50ml 氯化物檢查法氯化物檢查法Cl-+Ag+ AgCl (白色混懸液)（5ml HNO3/50ml，30-40，置暗處反應(yīng)) 適宜的濃度范圍：50-80 g Cl- /50ml第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法干燥失重干燥失重：藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所減失 的重量，包括水分及其他揮發(fā)性成分。檢查方法檢查方法n常壓恒溫干燥常壓恒溫干燥（烘干法）-受熱較穩(wěn)定的中藥制劑恒重：連續(xù)2次干燥后的重量差異不超過0.3mgn干燥劑干燥干燥劑干燥 受熱易分解或揮發(fā)的供

21、試品w硅膠，五氧化二磷，硫酸等干燥劑n減壓干燥減壓干燥熔點低、受熱不穩(wěn)定及較難趕除水分的供試品第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法水分測定法水分測定法n烘干法烘干法不含或含少量揮發(fā)性成分的供試品n甲苯法甲苯法-含揮發(fā)性成分的供試品n減壓干燥減壓干燥-含揮發(fā)性成分的貴重藥品 干燥劑：P2O5 n氣相色譜法氣相色譜法-散劑、顆粒劑、丸劑、片劑等各類型中藥制劑中微量水分的測定 n 快速水分測定儀快速水分測定儀甲苯法裝置甲苯法裝置第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法熾灼殘渣檢查法熾灼殘渣檢查法 (硫酸灰分,EP) 700800 +硫酸 取樣量由熾灼殘渣限量決定,一般12 g 緩慢灼燒 將殘渣留作重金屬檢查時, 500600灰

22、分測定灰分測定n總灰分總灰分 500600 灰燼灰燼 +鹽酸溶解鹽酸溶解 過濾過濾 濾渣濾渣 灼燒灼燒 (+10% NH(+10% NH4 4NONO3 3) )n酸不溶性灰分酸不溶性灰分有機(jī)物有機(jī)物炭化，分解炭化，分解非揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)非揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)硫酸鹽硫酸鹽第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查方法特殊雜質(zhì)：指在該藥品的生產(chǎn)和貯存過程中，根據(jù)其來源、生產(chǎn)工藝及藥品的性質(zhì)有可能引入的雜質(zhì)。 1.1.西洋參中摻有人參西洋參中摻有人參（西洋參中人參皂苷（西洋參中人參皂苷Rb1含量高；后者含量高；后者人參皂苷人參皂苷Rg1高）2.2.烏頭酯型生物堿的檢查烏頭酯型生物堿的檢查( (毒性較大毒性較大) ) （制川烏、

23、制草烏、制附子藥材含有烏頭堿不得高于制川烏、制草烏、制附子藥材含有烏頭堿不得高于0.15% ；附子理中丸附子理中丸）3.3.大黃流浸膏中土大黃苷的檢查大黃流浸膏中土大黃苷的檢查（取本品適量，加甲醇（取本品適量，加甲醇2 ml，溫浸，溫浸10分鐘，放冷，取上清液分鐘，放冷，取上清液10l，點于濾紙上，以，點于濾紙上，以45%乙醇乙醇展開，取出，晾干，放置展開，取出，晾干，放置10分鐘，置紫外燈（分鐘，置紫外燈（365nm）下檢視，不得顯持久的亮紫色熒光。）下檢視，不得顯持久的亮紫色熒光。） C HC HO HO C H3OH OgluOHOOHOHO大黃素大黃素土大黃苷土大黃苷第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量

24、的檢查常用農(nóng)藥常用農(nóng)藥 n有機(jī)氯類有機(jī)氯類：艾氏劑、六六六、氯丹、DDT、狄氏劑等n有機(jī)磷類有機(jī)磷類：三硫磷、氯硫磷、蠅毒磷、內(nèi)吸磷、敵敵畏、樂果等n苯氧羧酸類除草劑苯氧羧酸類除草劑：2，4-D；2，4，5-Tn氨基甲酸酯類氨基甲酸酯類：西維因（甲萘威）n二硫代氨基甲酸酯類二硫代氨基甲酸酯類：福美鐵、代森錳、代森鈉、福美雙等n無機(jī)農(nóng)藥：無機(jī)農(nóng)藥：磷化鋁、砷酸鈣、砷酸鉛n植物性農(nóng)藥：植物性農(nóng)藥：煙葉和尼古丁；除蟲菊花提取物和除蟲菊酯（合成除蟲菊酯）；毒魚藤根和魚藤根n其他：其他：溴螨酯、氯化苦、二溴乙烷、環(huán)氧乙烷、溴甲烷。 第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測定農(nóng)藥殘留量的測定 n供試品的制備

25、供試品的制備w殘留農(nóng)藥的提取殘留農(nóng)藥的提取 n提取溶劑：乙腈、丙酮n提取方法：索氏提取法和振蕩提取法 w樣品純化樣品純化液-液分配+柱層析分離n檢測方法檢測方法色譜分離法 第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測定農(nóng)藥殘留量的測定 n檢測方法檢測方法w薄層色譜法w氣相色譜法和液相色譜法 吸附劑吸附劑展開劑展開劑顯色劑顯色劑有機(jī)氯農(nóng)藥有機(jī)氯農(nóng)藥 硅膠G、氧化鋁、硅膠GF254 己烷、庚烷等 硝酸銀顯色劑、芳胺類顯色劑、熒光顯色劑 有機(jī)磷農(nóng)藥有機(jī)磷農(nóng)藥 硅膠G、氧化鋁、硅藻土、纖維素粉、聚酰胺 丙酮、氯仿、乙腈、環(huán)己烷等 剛果紅、4-（對硝基芐基）吡啶（NBP）、四溴苯酚磺酞乙酯-硝酸銀-檸檬酸、硝

26、酸銀-溴酚藍(lán)以及薄層-酶抑制法 第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測定農(nóng)藥殘留量的測定 n有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量檢查有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量檢查w色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗彈性石英毛細(xì)管柱SE-54(或DB-1701) 、電子捕獲檢測器，進(jìn)樣口溫度：230，檢測器溫度：300，不分流進(jìn)樣，程序升溫w對照品儲備液對照品儲備液 六六六（BHC）-，-，-，-BHC，滴滴涕（DDT）PP-DDE，-DDD，-DDT，OP-DDT及五氯硝基苯（PCNB）+石油醚（60-90）分別制成每1ml約含4-5g的溶液w混合對照品儲備液的制備混合對照品儲備液的制備對照品儲備液0.5ml 10mlw混合

27、對照品溶液的制備混合對照品溶液的制備取混合對照品儲備液制成每1L含0g、1g、5g、10g、50g、100g、500g濃度系列。 第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測定農(nóng)藥殘留量的測定 n有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量檢查有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量檢查w供試品溶液制備供試品溶液制備供試品研細(xì)，稱取適量（相當(dāng)于藥材2g），置100ml具塞錐形瓶中，+水20ml浸泡過夜，+丙酮40ml，稱定，超聲處理30min，放冷，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，+氯化鈉約6g及二氯甲烷30ml，稱定，超聲處理15min，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，靜置使分層，將有機(jī)相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100ml具塞錐形瓶中，放置4小時。精密量取35

28、ml，于40水浴減壓濃縮至近干，加少量石油醚（6090）如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚（60-90）溶解并轉(zhuǎn)移至10ml具塞刻度離心管中，加石油醚（6090）至5ml。+硫酸1ml，振搖1分鐘，離心（3000轉(zhuǎn)/分）10分鐘。精密量取上清液2ml置具刻度的濃縮瓶（見圖3-5）中，連接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器， 40下（或用氮氣）將溶液濃縮至適量，精密稀釋至1ml ，即得。w測定測定第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測定農(nóng)藥殘留量的測定 n有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量檢查有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量檢查w色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗彈性石英毛細(xì)管柱DB-17MS(或HP-5)、氮磷檢測器，進(jìn)樣口溫度

29、：230，檢測器溫度：300，不分流進(jìn)樣，程序升溫w對照品儲備液對照品儲備液 對硫磷、甲基對硫磷、樂果、氧化樂果、甲胺磷、久效磷、二嗪農(nóng)、乙硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷，+用乙酸乙酯，制成每1ml約含100g的溶液w混合對照品儲備液的制備混合對照品儲備液的制備對照品儲備液1ml 20mlw混合對照品溶液的制備混合對照品溶液的制備取混合對照品儲備液制成每1ml含0.1g、0.5g、1g、2g、5g濃度系列。 第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測定農(nóng)藥殘留量的測定 n有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量檢查有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量檢查w供試品溶液制備供試品溶液制備供試品研細(xì)，稱取適量（相當(dāng)于藥材5g），+無水

30、硫酸鈉5g，+乙酸乙酯50-100ml，冰浴超聲處理3min，放置，取上層液濾過，藥渣加乙酸乙酯30-50ml，冰浴超聲處理3min，放置，濾過，合并濾液， 40減壓濃縮至干，+乙酸乙酯5ml，使溶解。精密量取1ml，加到活性炭小柱（120-400目，0.25g），置多功能真空樣品處理器上，用正己烷-乙酸乙酯（1:1）5ml洗脫。洗脫液置氮吹儀上濃縮至近干。+乙酸乙酯1ml，溶解。 w測定測定第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查農(nóng)藥殘留量的測定農(nóng)藥殘留量的測定 n有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量檢查有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量檢查1-敵敵畏 2-速滅磷3-久效磷 4-甲拌磷5-巴胺磷 6-二嗪農(nóng)7-乙嘧硫磷8-甲基嘧啶硫磷9-甲基對

31、硫磷10-稻瘟凈 11-水胺硫磷12-氧化喹硫磷13-稻豐散 14-甲喹硫磷15-克線磷 16-乙硫磷十六種有機(jī)磷農(nóng)藥的氣相色譜圖十六種有機(jī)磷農(nóng)藥的氣相色譜圖第五節(jié) 黃曲霉毒素的檢查黃曲霉毒素黃曲霉毒素（aflatoxinaflatoxin）n極強(qiáng)的毒性和致癌性n在紫外線照射下，能發(fā)出熒光n耐熱，在280時發(fā)生裂解n低濃度時易受紫外線破壞，被氧化或遇堿被破壞n在水中溶解度低，易溶于油及氯仿、丙酮、甲醇等有機(jī)溶劑測定方法測定方法微柱色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法、熒光分析法、免疫化學(xué)分析法等第五節(jié) 黃曲霉毒素的檢查測定方法測定方法n微柱色譜法微柱色譜法 （測定黃曲霉毒素的總量）w原理及分析方

32、法原理及分析方法雜質(zhì)雜質(zhì) 氧化鋁吸附氧化鋁吸附aflatoxin 硅鎂型吸附劑吸附硅鎂型吸附劑吸附對照品溶液對照品溶液：每1ml含0.005g、0.01g、0.025g、0.05g、 黃曲霉毒素B1氯仿溶液供試品溶液供試品溶液：氯仿提取微柱色譜微柱色譜：上樣1ml，+1ml 丙酮-氯仿（10:90）展開，365nm 波長紫外光下觀察熒光 本法測定的是黃曲霉毒素的總量，靈敏度為10g/kg。 使用的試劑和棉花中不得含有熒光物質(zhì)。 無水硫酸鈉、中性氧化鋁、硅鎂型吸附劑應(yīng)為60-120目，使用前應(yīng)灼燒脫水或活化。 實驗完畢后，應(yīng)及時消毒（安替福民溶液或5%次氯酸鈉溶液）中性氧化鋁中性氧化鋁硅鎂型硅鎂

33、型吸附劑吸附劑第五節(jié) 黃曲霉毒素的檢查測定方法測定方法n薄層色譜法薄層色譜法w原理原理：黃曲霉毒素B1在365nm紫外光照射下產(chǎn)生藍(lán)紫色熒光w分析方法分析方法n黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)液的制備黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)液的制備每1ml含0.04g、0.2 g、0.5 g 、1g，溶劑為苯-乙腈(98:2)n樣品處理樣品處理n薄層層析薄層層析（兩次展開）首先：無水乙醚, 展開12 cm然后：氯仿-丙酮(92:8)，展開10 cm 本法最低檢出量為0.0004g，靈敏度為5g/kg。 如樣品中雜質(zhì)干擾嚴(yán)重，可采用雙向展開。 層析硅膠可加入熱鹽酸(1:4)處理，使得斑點集中，且黃曲霉毒素B1熒光不易消失。第五節(jié) 黃曲霉毒

34、素的檢查測定方法測定方法n高效液相色譜法高效液相色譜法w原理原理：黃曲霉毒素經(jīng)衍生后得到能產(chǎn)生強(qiáng)熒光的物質(zhì)，可用 熒光檢測器進(jìn)行檢測。n衍生的方法：柱前三氟乙酸（TFA）衍生，柱后碘衍生和柱后過溴化溴化吡啶（PBPB）衍生w分析方法分析方法n標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制n黃曲霉毒素衍生標(biāo)樣的配制n樣品提取、凈化n衍生物的制備n色譜條件（甲醇-水的磷酸緩沖體系） 本法靈敏度為0.2g/kg第五節(jié) 黃曲霉毒素的檢查測定方法測定方法n熒光分析法熒光分析法 黃曲霉毒素B1 -香豆素鈉鹽 （熒光） （無熒光）w激發(fā)波長360nm，發(fā)射波長450nmn免疫化學(xué)分析法免疫化學(xué)分析法w放射免疫測定法法放射免疫測定法法(BIA)w親和免疫色譜法：借助毛細(xì)作用親和免疫色譜法：借助毛細(xì)作用5-10分鐘出結(jié)果分鐘出結(jié)果w酶聯(lián)免疫吸附法酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)NaOHHCl第六節(jié) 微生物限度檢查 細(xì)菌總數(shù)霉菌總數(shù)大腸桿菌數(shù)其他第六節(jié) 微生物限度檢查 細(xì)菌總數(shù) 一、設(shè)備和材料 恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴槽、試管、移液管、菌落計數(shù)器、放大鏡、托盤天平、稱量紙、培養(yǎng)皿。 二、培養(yǎng)基和試劑 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 0.9%生理鹽水 三、檢驗程序 待檢樣 適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液 選擇2-3 個適當(dāng)稀釋度各1ml分別加入滅菌平皿內(nèi) 每皿內(nèi)加入適量營養(yǎng)瓊脂 37 482小時 菌