廣州工商培訓(xùn)-菌落總數(shù)

1、筑食品安全長城，保中華民族真元筑食品安全長城，保中華民族真元食食 品品 快快 篩篩 技技 術(shù)術(shù) 廣州達(dá)元食品安全技術(shù)有限公司廣州達(dá)元食品安全技術(shù)有限公司筑食品安全長城，保中華民族真元筑食品安全長城，保中華民族真元菌落總數(shù)測試片筑食品安全長城，保中華民族真元筑食品安全長城，保中華民族真元 菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得后所得1mL(g)檢樣或單位面積樣品中所含菌落的檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數(shù)，是最常用的微生物檢測項目?？倲?shù)，是最常用的微生物檢測項目。 菌落總數(shù)測試片含有標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基，冷水可菌落總數(shù)測試片含有標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基，

2、冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（唑（TTC），菌落在測試片上呈紅色，這樣可縮），菌落在測試片上呈紅色，這樣可縮短計數(shù)時間和增強(qiáng)計數(shù)效果。短計數(shù)時間和增強(qiáng)計數(shù)效果。 適合于各類食品及食品原料中菌落總數(shù)的測定，適合于各類食品及食品原料中菌落總數(shù)的測定，也可用于檢測食品加工容器、操作臺和其他設(shè)備也可用于檢測食品加工容器、操作臺和其他設(shè)備表面的菌落總數(shù)。表面的菌落總數(shù)。原理筑食品安全長城，保中華民族真元筑食品安全長城，保中華民族真元 樣品處理：樣品處理：取樣品取樣品25mL（g）放入含有）放入含有225mL滅滅菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水

3、）的取樣罐或菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液，必要時用的樣品勻液，必要時用1mol/LNaOH或或1mol/LHCl溶液調(diào)節(jié)樣品勻液溶液調(diào)節(jié)樣品勻液pH至至6.67.2。用。用1mL滅菌吸管吸取滅菌吸管吸取1:10樣品勻液樣品勻液1mL，注入含有，注入含有9mL稀釋液的試管內(nèi)，振搖后成稀釋液的試管內(nèi)，振搖后成為為1:100的樣品勻液，以此類推，做出的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。操作方法筑食品安全長城，保中華民族真元筑食品安全長城，保中華民族真元 接種：接種：一

4、般食品選一般食品選23個稀釋度進(jìn)行檢測，含菌個稀釋度進(jìn)行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進(jìn)行檢測。將菌落總數(shù)測試片（接吸取原液進(jìn)行檢測。將菌落總數(shù)測試片（BB202）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置10s左右使左右使培養(yǎng)基凝固，每個稀釋度接種兩片。同時做一片培養(yǎng)基凝固，每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照?？瞻钻幮詫φ铡２僮鞣椒ㄖ称钒?/p>

5、全長城，保中華民族真元筑食品安全長城，保中華民族真元 培養(yǎng)：培養(yǎng)：將測試片疊在一起放回原自封袋中將測試片疊在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。一般食品培養(yǎng)片。一般食品培養(yǎng)溫度為溫度為361，培養(yǎng)，培養(yǎng)1524h；水產(chǎn)品；水產(chǎn)品培養(yǎng)溫度為培養(yǎng)溫度為301，培養(yǎng)，培養(yǎng)48h。操作方法筑食品安全長城，保中華民族真元筑食品安全長城，保中華民族真元表面取樣方法 加加1mL滅菌磷酸緩沖液（或生理鹽水）在滅菌磷酸緩沖液（或生理鹽水）在測試片上，至少靜置測試片上，至少靜置10S，使培養(yǎng)基凝固；，使培養(yǎng)基凝固；提

6、起上層膜，使中央濾紙部分貼到待測物提起上層膜，使中央濾紙部分貼到待測物表面，用手在外側(cè)輕壓；然后將上蓋膜合表面，用手在外側(cè)輕壓；然后將上蓋膜合上，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。上，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。筑食品安全長城，保中華民族真元筑食品安全長城，保中華民族真元結(jié)果判讀 細(xì)菌在測試片上生長后會顯示紅色斑點，選擇細(xì)菌在測試片上生長后會顯示紅色斑點，選擇菌落數(shù)適中（菌落數(shù)適中（30300個）的測試片進(jìn)行計數(shù)個）的測試片進(jìn)行計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（或每克）樣品，乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（或每克）樣品中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。筑食品安全長城，保中華民族真元筑食品安全長城，保中華民族真元若只有一個

7、稀釋度紙片上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個紙片若只有一個稀釋度紙片上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個紙片菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每毫升菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每毫升(或克或克)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。若有兩個連續(xù)稀釋度的紙片菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按以下公式若有兩個連續(xù)稀釋度的紙片菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按以下公式計算計算:式中：式中：N樣品中菌落數(shù)；樣品中菌落數(shù)；C測試片上測試片上(含適宜范圍菌落數(shù)的測試片含適宜范圍菌落數(shù)的測試片)菌落數(shù)之和；菌落數(shù)之和；n1第一個適宜稀釋度測試片數(shù)；第一個適宜稀釋度測試片數(shù)；n2第二

8、個適宜稀釋度測試片數(shù)；第二個適宜稀釋度測試片數(shù)；d稀釋因子稀釋因子(第一稀釋度第一稀釋度)。計數(shù)原則筑食品安全長城，保中華民族真元筑食品安全長城，保中華民族真元計數(shù)原則 示例：示例： 上述數(shù)據(jù)經(jīng)上述數(shù)據(jù)經(jīng)“四舍五入四舍五入”后，表示后，表示25000或或2.5104。筑食品安全長城，保中華民族真元筑食品安全長城，保中華民族真元計數(shù)原則 若所有的稀釋度菌落總數(shù)均大于若所有的稀釋度菌落總數(shù)均大于300CFU，則對，則對稀釋度最高的測試片進(jìn)行計數(shù)，其他測試片可記稀釋度最高的測試片進(jìn)行計數(shù)，其他測試片可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。倍數(shù)

9、計算。 若所有的稀釋度菌落總數(shù)均小于若所有的稀釋度菌落總數(shù)均小于30CFU，則應(yīng)按，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。 若所有的稀釋度（包括液體樣品原液）均無菌落若所有的稀釋度（包括液體樣品原液）均無菌落生長，則以小于生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。乘以最低稀釋倍數(shù)計算。 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30CFU300CFU之間，其中一部分小于之間，其中一部分小于30CFU或大于或大于300CFU，則以最接近，則以最接近30CFU或或300CFU的平均菌的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。筑

10、食品安全長城，保中華民族真元筑食品安全長城，保中華民族真元報告方式 菌落總數(shù)在菌落總數(shù)在100CFU以內(nèi)時，按以內(nèi)時，按“四舍五入四舍五入”原原則修約，采用兩位有效數(shù)字報告。則修約，采用兩位有效數(shù)字報告。 大于或等于大于或等于100CFU時，第三位數(shù)字采用時，第三位數(shù)字采用“四舍四舍五入五入”原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面的原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面的0代代替位數(shù)，也可用替位數(shù)，也可用10的指數(shù)形式來表示，按的指數(shù)形式來表示，按“四舍四舍五入五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。 若測試片上一片紅色無法計數(shù)時，則報告多不可若測試片上一片紅色無法計數(shù)時，則報告多不

11、可計。計。 若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。 稱重取樣以稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。為單位報告。筑食品安全長城，保中華民族真元筑食品安全長城，保中華民族真元符合率 菌落總數(shù)測試片檢測結(jié)果與傳統(tǒng)平板計數(shù)菌落總數(shù)測試片檢測結(jié)果與傳統(tǒng)平板計數(shù)瓊脂平板法符合率可達(dá)瓊脂平板法符合率可達(dá)80以上，山東省以上，山東省疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行的驗證試驗表明，疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行的驗證試驗表明，24h計數(shù)測試片上菌落數(shù)為平板菌落數(shù)的計數(shù)測試片上菌落數(shù)為平板菌落數(shù)的87。筑食品安全長城，保中華民族真元筑食

12、品安全長城，保中華民族真元試劑配制 緩沖液：稱取緩沖液：稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸蒸餾水中，用大約餾水中，用大約175mL的的1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)節(jié)pH至至7.2，用蒸餾水稀釋至，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰后貯存于冰箱。箱。 稀釋液：取貯存液稀釋液：取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，分裝于適宜容器中，121高壓滅菌高壓滅菌15分鐘，或者放入消毒碗柜中消毒。分鐘，或者放入消毒碗柜中消毒。 生理鹽水的配制與滅菌：取生理鹽水的配制與滅菌：取8.5g分析純氯化鈉（分析純氯化鈉（NaCl）溶解到）溶解到1000mL蒸餾水或純