香附對(duì)未孕大鼠離體子宮肌收縮的影響

1、香附對(duì)未孕大鼠離體子宮肌收縮的影響    作者：李志強(qiáng)，馬力揚(yáng)，徐敬東，楊慧霞    【摘要】 目的 探討香附對(duì)未孕大鼠離體子宮平滑肌條運(yùn)動(dòng)的影響及其機(jī)制。方法 選用Wistar雌性未孕大鼠60只，體重250-300g，用Biolap410生物機(jī)能儀記錄正常子宮平滑肌肌條收縮運(yùn)動(dòng)，并分別用苯海拉明(2×10-6mol/L)、酚妥拉明(2×10-6mol/L)、異搏定(2×10-7mol/L)、吲哚美辛(2×10-5mol/L)作用于肌條5min后，加入香附水煎醇沉液(以下簡(jiǎn)稱

2、香附)以及單用香附，觀察對(duì)離體子宮平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響并分析作用機(jī)制。結(jié)果 香附減弱未孕大鼠離體子宮平滑肌的收縮運(yùn)動(dòng)，收縮波的頻率減慢，振幅減小，持續(xù)時(shí)間縮短。結(jié)論 香附減弱未孕大鼠離體子宮平滑肌的收縮運(yùn)動(dòng)，該作用可能是通過前列腺素的合成與釋放，與L?型鈣通道、H1受體、受體無關(guān)。    【關(guān)鍵詞】 大鼠；離體子宮平滑?。幌愀?；苯海拉明；酚妥拉明；異搏定；吲哚美辛 Effect of nutgrass galingale rhizome decotion on contractile activityof uterine smooth muscle stri

3、ps of non?pregnant rats in vitro ABSTRACT: Objective To study the effects of nutgrass galingale rhizome decotion on contractile activity of uterine smooth muscle strips of non?pregnant rats. Methods We selected 60 Wistar non?pregnant rats of weight 250-300g to record the effects of nutgrass galingal

4、e rhizome decotion (1.0g/L, 2.0g/L, 4.0g/L, 8.0g/L) on contractile activity of uterine smooth muscle strips of non?pregnant rats with Biolap 410 Biological System. Four antagonists, diphenhydramine(2×10-6mol/L), phentolamine (2×10-6mol/L ), verapamil (2×10-7mol/L), and indomethacin (2

5、×10-5mol/L) were used to study their mechanisms respectively. Results Water extract of nutgrass galingale rhizome (4×10-3kg/L) could significantly weaken uterine contractile activity of non?pregnant rats, lessen the frequencies, shorten the duration and lower the amplitude of contractile a

6、ctivity. Conclusion The effect of nutgrass galingale rhizome on contractile activity of uterine smooth muscle strips in rats may be mainly associated with prostaglandin synthese or release nothing with L?voltage?dependant calcium channels, H1 receptor or receptor. KEY WORDS: rat; isolate uterine smo

7、oth muscle; nutgrass galingale rhizome; diphenhydramine; phentolamine; verapamil; indomethacin 香附，異名雀香、莎草根等，為莎草科植物莎草(Nutgrass galingale rhizome)的干燥根莖。本品味辛、微苦、微甘，性平，具有行氣解郁、調(diào)經(jīng)解痛之功效。香附醇提取物對(duì)注射酵母菌及內(nèi)毒素引起的大鼠發(fā)熱有明顯的解熱作用，并有起效快、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)的特點(diǎn)1?2。此外，其揮發(fā)油對(duì)小鼠正常體溫有明顯的降溫作用。其解熱鎮(zhèn)痛有效成分可能為三萜類化合物，香附的有效成分為?香附酮，香附流浸膏能抑制豚鼠、家兔、貓、

8、犬等離體已孕及未孕子宮的收縮3,但有效作用機(jī)制尚未明確。本研究將探討其可能機(jī)制。 1 材料與方法 1.1 動(dòng)物及離體子宮肌條標(biāo)本準(zhǔn)備 成年未孕Wistar大鼠60只，體重250-300g，由蘭州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供(合格證書：醫(yī)動(dòng)字第3676494號(hào))。動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)前72h皮下注射乙烯雌酚0.5mg/kg，人工造成動(dòng)情期以提高子宮對(duì)藥物的敏感性。猛擊大鼠頭部致暈厥，游離卵巢及子宮分叉處之間的中段子宮，沿系膜縱軸剖開子宮角，經(jīng)Kreb?s緩沖液漂洗后，平鋪固定在盛有石蠟的培養(yǎng)皿中，加入Kreb?s液并持續(xù)供給950mL/L O2和50mL/L CO2混合的標(biāo)準(zhǔn)氣體。在石蠟盤中，用固定的兩片平行刀片

9、沿平滑肌纖維的縱行方向取寬2mm的肌條，用大頭針固定兩端，以肌條平展為宜，用手術(shù)縫線將肌條扎緊打結(jié)，另一端打結(jié)后再結(jié)一個(gè)直徑約0.5cm的環(huán)以備懸掛。扎線后的肌條長(zhǎng)約5-8mm。將肌條分別安置在盛有5mL 37 Kreb?s 液的CW?3恒溫平滑肌肌槽中。 1.2 藥品及配制 香附購于甘肅省黃河中藥材批發(fā)市場(chǎng)，經(jīng)過蘭州醫(yī)學(xué)院生藥教研室周印鎖教授鑒定后，按常規(guī)制備為1000g/L的水煎劑，于4冰箱內(nèi)冷藏保存。使用時(shí)用250g/L NaHCO3調(diào)pH值為7.3-7.4，并稀釋至其終濃度為100g/L。苯海拉明(江蘇興化制藥廠，批號(hào)：00032331)，針劑20g/L；酚妥拉明(上海旭東海普藥業(yè)有限

10、公司，批號(hào)：20000502)，針劑10g/L；異搏定(上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)：00701)，針劑5g/L；吲哚美辛(江蘇太倉制藥廠，批號(hào)：990113)，于50g/L的NaOH溶液中溶解后，以10mol/L的鹽酸滴定至pH為7.4，四種藥品分別制備為2×10-6mol/L、2×10-6mol/L、2×10-7mol/L、2×10-5mol/L終濃度的溶液。 1.3 實(shí)驗(yàn)分組及方法 將大鼠隨機(jī)分為5組，每只大鼠取4條平滑肌標(biāo)本，將肌條按1.1中制備并分別安置在恒溫平滑肌肌槽中，每個(gè)肌槽中分別盛有5mL 37 Kreb?s液。肌條在1g的前負(fù)荷下溫育，

11、每20min更換一次5mL新鮮的Kreb?s液(37)，待肌條的自發(fā)活動(dòng)平穩(wěn)后再加入藥物。肌條平穩(wěn)的自發(fā)活動(dòng)設(shè)為正常對(duì)照組，之后累計(jì)加入香附100g/L50L使其終濃度(指溶于肌槽中5mL溶液后的濃度)分別為1.0、2.0、4.0、8.0g/L，為單用香附組。肌條的自發(fā)活動(dòng)平穩(wěn)后分別加入苯海拉明、酚妥拉明、異搏定、吲哚美辛5min后，再加入香附(2.0g/L)為受體拮抗劑 香附組(給藥組)。    1.4 結(jié)果記錄及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用Biolap410生物機(jī)能儀記錄子宮平滑肌肌條收縮運(yùn)動(dòng)，計(jì)算給藥前5min子宮平滑肌條的收縮波平均振幅和平均持續(xù)時(shí)間以及5mi

12、n內(nèi)收縮波頻率作為對(duì)照值，給藥后5min記錄相同指標(biāo)的數(shù)值作為效應(yīng)值，單用香附組和給藥組用變化指數(shù)表示(效應(yīng)值一對(duì)照值)/對(duì)照值×100% 3。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，使用SPSS 8.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，單用香附組和給藥組與正常對(duì)照組之間進(jìn)行配對(duì)比較的t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為=0.05。 2 結(jié)果    單用香附組(1.0、2.0、4.0、8.0g/L)子宮平滑肌收縮運(yùn)動(dòng)減弱，收縮波的頻率減慢，振幅減小，持續(xù)時(shí)間縮短(表1)。在加入抑制前列腺素合成酶吲哚美辛后，香附對(duì)子宮平滑肌的作用減弱，與單用香附組相比無顯

13、著性差異(P>0.05)；在加入L型Ca2 通道阻斷劑異搏定后，香附抑制子宮平滑肌收縮振幅減弱，收縮波的頻率與單用香附組比較無顯著性差異(P>0.05)；在加入受體阻斷劑酚妥拉明后，香附對(duì)子宮平滑肌的收縮活動(dòng)無顯著影響(P>0.05)，收縮波的持續(xù)時(shí)間與單用香附組比較有顯著性差異(P<0.05)；在加入H1受體阻斷劑苯海拉明后香附對(duì)子宮平滑肌的作用被部分阻斷，與單用香附組有顯著性差異(P<0.05，表2)。    表1 香附對(duì)大鼠離體子宮平滑肌條收縮活動(dòng)的影響（略） Table 1 The effect of nutgras

14、s galingale rhizome on uterine smooth muscle strips *P<0.05， *P<0.01 vs. control; NGR: nutgrass galingale rhizome 表2 使用拮抗劑后香附對(duì)大鼠離體子宮平滑肌條作用的影響（略） Table 2 The mechanism of using the antagonist on uterine smooth muscle strips *P<0.05, *P<0.01 vs. NGR; P<0.05，P<0.01 vs. antagonistNGR (

15、data as changed indexes in the table); NGR: nutgrass galingale rhizome 3 討論    香附為莎草科多年生草本植物莎草的根莖，性味辛、微苦、微甘，平，主歸肝、脾、三焦經(jīng)。具有疏肝理氣,調(diào)經(jīng)止痛的功效。李時(shí)珍稱其為”氣病之總司，女科之主帥”，臨床應(yīng)用十分廣泛。以往的研究表明香附具有強(qiáng)心和雌激素樣作用1，香附水提物有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用，但解熱效應(yīng)不明顯2。香附的化學(xué)成分復(fù)雜，藥理作用廣泛3。實(shí)驗(yàn)證明4?5香附的有效成分?香附酮能有效地抑制未孕大鼠離體子宮肌的自發(fā)性收縮，同時(shí)抑制縮宮素引起的離體

16、子宮肌的收縮，并呈劑量依賴關(guān)系，是香附調(diào)經(jīng)解痛的主要有效成分。香附可緩解縮宮素致小鼠子宮的激烈收縮，可減輕痛經(jīng)時(shí)的疼痛癥狀。通過實(shí)驗(yàn)，確定了香附發(fā)揮較好鎮(zhèn)痛作用的劑量，在同樣的生藥量下，確定了石油醚、乙酸乙酯部位為香附治療痛經(jīng)的有效部位。    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：香附可抑制大鼠離體子宮平滑肌的自發(fā)收縮活動(dòng)，并不被酚妥拉明、苯海拉明、異搏定阻斷，但可被吲哚美辛阻斷。推測(cè)香附抑制大鼠離體子宮平滑肌條的收縮，可能與降低子宮平滑肌細(xì)胞內(nèi)的前列腺素的合成與釋放有關(guān)，而沒有通過細(xì)胞膜上L?型鈣通道、H1受體、受體。 基金項(xiàng)目：國(guó)家民委自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 2002?127) 【參考文獻(xiàn)】 1歐潤(rùn)妹，鄧遠(yuǎn)輝，李偉英，等. 香附不同溶劑提取物解熱鎮(zhèn)痛效應(yīng)的比較 J. 山東中醫(yī)雜志, 2004, 23(12):740?742.2