人類白細(xì)胞抗原等位基因與HBV宮內(nèi)感染關(guān)系

1、人類白細(xì)胞抗原等位基因與HBV宮內(nèi)感染關(guān)系    【關(guān)鍵詞】  乙型肝炎病毒；宮內(nèi)感染；人類白細(xì)胞抗原DR等位基因(HLA-DR)摘要： 目的   研究人類白細(xì)胞抗原(HLA)-DR3、DR7、DR13、DR53等位基因與乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)宮內(nèi)感染的關(guān)系，探討HBV宮內(nèi)感染的遺傳易感性，確定HBV宮內(nèi)感染的易感基因和保護(hù)基因。方法   采用聚合酶鏈反應(yīng)/序列特異性引物(PCR-SSP)技術(shù)檢測HBsAg陽性孕婦及其新生兒各187例外周靜脈血血塊中HLA-DR3、DR

2、7、DRl3、DR53等位基因型分布及頻率。結(jié)果   (1)宮內(nèi)感染組孕婦HLA-DR3基因頻率為2414(729)，顯著高于非宮內(nèi)感染組孕婦的633(10158)(P=0007)。其余各表型比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)。(2)宮內(nèi)感染組新生兒HLA-DR3基因頻率為1724(529)，顯著高于非宮內(nèi)感染組新生兒的506(8158)(P=0033)。其余各表型比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)。(3)母嬰HLA-DR3同陽性在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0049)；母嬰HLA-DR7、DR13、DR53同陽性在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未

3、感染組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)。結(jié)論   HBsAg陽性孕婦及其胎兒同時(shí)或任一攜帶HLA-DR3，易導(dǎo)致HBV宮內(nèi)感染；HLA-DR3是HBV宮內(nèi)感染的易感基因。關(guān)鍵詞： 乙型肝炎病毒；宮內(nèi)感染；人類白細(xì)胞抗原DR等位基因(HLA-DR)Association between HLA-DR alleles and HBV intrauterine infection   Abstract： Objective   To study the association between HLA-DR3,DR7,DR13,D

4、R53 and HBV intrauterine infection to probe into the susceptibility to intrauterine infection of hepatitis B virus and to find its predisposing genes and protecting genes.Methods   HLA-DR3,DR7,DR13,DR53 were detected by the technique of polymerase chain reaction-sequence specific primers(P

5、CR-SSP) in maternal and neonatal blood clot.Results   (1) The frequency of HLA-DR was 24.14% in women with intrauterine infection,which was higher than that (6.33%) in women without intrauterine infection(P=0.007).There was no association between HLA-DR7,DR13,DR53 positive in pregnant wome

6、n and HBV intrauterine infection(P>0.05).(2) The frequeney of HLA-R of newborns was 17.24% in women with intrauterine infection,which is higher that (5.06%) in women withotll infection(P=0.033).There was no association between HLA-DR7,DR13,DR53 positive in newborns and HBV intrauterine infection(

7、P>0.05).(3)There was significant association between HLA-DR3 concordance and HBVintrauterine infection(P=0.049).There was no association between DR7,DR13,DR53 concordance and HBV intrauterine infection(P>0.05).Conclusion   HLA-DR3 carriers of pregnant women and their newborns have su

8、sceptibility to HBV intrauterine infection.HLA-DR3 is the predisposing gene of HBV intrauterine infection.Key words： HBV；intrauterine infection；HLA-DR antigen      肝炎是一種嚴(yán)重危害人類健康的世界性傳染病，我國是乙肝高發(fā)區(qū)，乙肝病毒的母嬰傳播不僅造成人群中眾多的HBsAg攜帶者，而且是引起成人慢性肝炎、肝硬化以及肝癌的重要因素。迄今，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，人類白細(xì)胞抗原DR等位基因(HLA-

9、DR)與乙型肝炎病毒(HBV)感染密切相關(guān)，而HLA-DR等位基因與HBV宮內(nèi)感染的關(guān)系爭議較多。本文通過研究HLA-DR3、DR7、DR13、DR53與HBV宮內(nèi)感染的關(guān)系，探討HBV宮內(nèi)感染的遺傳易感性，為防制HBV宮內(nèi)感染提供理論依據(jù)。1   對象與方法11   對象   以2003年6月2004年11月太原市省各市級醫(yī)院篩檢，并在太原市傳染病院婦產(chǎn)科進(jìn)行產(chǎn)前檢查及分娩的HBsAg陽性孕婦及其新生兒各187例作為研究對象。并根據(jù)新生兒有無宮內(nèi)感染，分為宮內(nèi)感染組(29例)和宮內(nèi)未感染組(158例)，2組在年齡分布、文化程度、職業(yè)

10、構(gòu)成等均衡可比。12   方法   121   標(biāo)本采集及處理   收集孕婦肘靜脈血及新生兒出生24h內(nèi)且未注射高效價(jià)免疫球蛋白(HBIG，hepatitis B immune globulin)的股靜脈血各2ml，4冰箱保存，6h內(nèi)以4000r/min4離心15min，分離血清與血塊，-20保存?zhèn)錂z。122   乙肝血清標(biāo)志物檢測   采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法，試劑盒（上?？迫A實(shí)業(yè)總公司）。123   HBV DNA檢測  

11、(1)HBV DNA提?。簠⒖嘉墨I(xiàn)1，采用異硫氰酸胍一步法提取血清DNA；(2)HBV DNA的擴(kuò)增：采用巢式聚合酶鏈反應(yīng)(nPCR)。124   HLA-DR等位基因檢測   (1)人類基因組DNA的提取十二烷基磺酸鈉（SDS）蛋自酶K法提取血塊基因組DNA。(2)HLA-DR等位基因擴(kuò)增：參考文獻(xiàn)2的引物設(shè)計(jì)采用聚合酶鏈反應(yīng)序列特異性引物(PCR-SSP)技術(shù)檢測孕婦及其新生兒外周靜脈血血塊中HLA-DR3、DR7、DR13、R53基因型分布及頻率。(3)PCR產(chǎn)物的檢測：取擴(kuò)增產(chǎn)物510l，按5：1(V：V)與溴酚蘭混勻，加樣于15瓊脂糖凝膠(含0

12、5gml溴化乙錠)板，在60Vcm電壓下泳動(dòng)50min，紫外燈下觀察結(jié)果。125   新生兒HBV宮內(nèi)感染診斷標(biāo)準(zhǔn)   新生兒外周血血清HBsAg和/或HBV DNA陽性，即診斷為HBV宮內(nèi)感染。13   統(tǒng)計(jì)分析   資料輸入SPSS115軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；計(jì)算各指標(biāo)的陽性率，四格表2、Fisher確切概率、OR值及OR95%CI。2   結(jié)果21   HBsAg陽性孕婦及其新生兒HLA-DR擴(kuò)增圖譜   提取的血塊DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增后呈現(xiàn)明顯條帶，與標(biāo)

13、準(zhǔn)分子標(biāo)記物（Marker）條帶比較，確定HLA-DR基因型（圖1，2，3，4）。DR3+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR3陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物片斷長度為151bp;DR3-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR3陰性擴(kuò)增產(chǎn)物；M：標(biāo)準(zhǔn)分子標(biāo)記物(Marker)圖1   HLA-DR3等位基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果（略）DR7+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR7陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物片斷長度為232bp；DRT-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR7陰性擴(kuò)增產(chǎn)物；M：標(biāo)準(zhǔn)分子標(biāo)記物(Marker)圖2   HLA-DR7等位基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

14、（略）DR13+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR13陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物片斷長度為130bp；DR13-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR13陰性擴(kuò)增產(chǎn)物；M：標(biāo)準(zhǔn)分子標(biāo)記物(Marker)圖3   HLA-DR13等位基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果（略）DR53+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR53陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物片斷長度為213bp；DR53-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR53陰性擴(kuò)增產(chǎn)物；C：內(nèi)對照注：DR53引物與內(nèi)對照引物可能發(fā)生了引物間的錯(cuò)配等，故分管同時(shí)擴(kuò)增圖4   HLA-DR53等位基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果（略）22&

15、#160;  HLA-DR與HBV宮內(nèi)感染的關(guān)系   221   孕婦HLA-DR等位基因分布及頻率比較（表1）   宮內(nèi)感染組孕婦HLA-DR3基因頻率明顯高于宮內(nèi)未感染組，經(jīng)檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR=4709,P=0007）；HLA-DR7、DR13、DR53基因頻率在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組孕婦比較，經(jīng)檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。表1   宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組孕婦HLA-DR基因分布及頻率比較（略）注：*為fisher確切概率法計(jì)算結(jié)果222   新生兒HLA