中藥護(hù)心靈對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血大鼠內(nèi)皮源性因子及缺血修飾性白蛋白的影響及意義

1、中藥護(hù)心靈對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血大鼠內(nèi)皮源性因子及缺血修飾性白蛋白的影響及意義              作者：周春香，張延軍，杜永平，徐江平【關(guān)鍵詞】  護(hù)心靈；心肌缺血；內(nèi)皮源性因子；缺血修飾性白蛋白Effects and significance of Chinese medicine Huxinling on endotheliumderived factors and ischemiamodified albumin of experimental cardia

2、c ischemia rats【Abstract】 AIM: To investigate the effects and significance of Chinese medicine Huxingling on ET, TXB2, NO, 6KetoPGF1a and ischemiamodified albumin (IMA) of experimental cardiac ischemia rats after ischemia reperfusion. METHODS:  Forty Wistar rats were divided into 4 groups （n=10

3、 in each group）: sham operation group, sodium chloride group, compound Danshen group and Huxinling group. After 10 d of consecutive intragastric administration, the left main coronary trunk was ligated in all groups except sham operation group to establish experimental cardiac ischemia model to dete

4、ct and compare the concents of ET, TXB2, NO, 6KetoPGF1a and IMA following reperfusion. RESULTS: The concentrations of ET, TXB2, TXB2/6KetoPGF1a and IMA of sodium chloride group, compound Danshen group and Huxinling group were all significantly higher than those of sham operation group after ischemia

5、/reperfusion. At the same time , NO and 6KetoPGF1a in these 3 groups were significantly lower than those in sham operation group(P0.05). The concentrations of ET, TXB2, TXB2/6KetoPGF1a and IMA of compound Danshen group and Huxinling group were significantly lower than those of sodium chloride group,

6、 but ones of NO and 6KetoPGF1a were higher than those of sodium chloride group(P0.05, P0.01). CONCLUSION: Compound Danshen and Huxinling can elevate the concentrations of NO and 6KetoPGF1a in acute cardiac ischemia rats and reduce the levels of ET, TXB2. They have protective effects on ischemic card

7、iac muscle of rats and Huxinling is more effective than compound Danshen. 【Keywords】 Huxinling; myocardial  ischemia; endotheliumderived factors;  ischemiamodified albumin【摘要】 目的： 研究中藥護(hù)心靈對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血大鼠缺血復(fù)灌注后內(nèi)皮源性因子內(nèi)皮素（ET），血栓素B2（TXB2），一氧化氮（NO），6酮前列腺素F1a（6KetoPGF1a）及缺血修飾性白蛋白（IMA）的影響及意義. 方法：

8、40只Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、生理鹽水組、復(fù)方丹參組和護(hù)心靈組，每組10只，連續(xù)10 d灌胃給藥后，結(jié)扎除假手術(shù)組外大鼠的左冠狀動(dòng)脈主干，建立實(shí)驗(yàn)性心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ?，并?duì)大鼠缺血復(fù)灌注后的內(nèi)皮源性因子ET, TXB2, NO, 6KetoPGF1a及IMA的含量進(jìn)行檢測(cè)比較. 結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)性心肌缺血大鼠缺血復(fù)灌注后生理鹽水組、復(fù)方丹參組和護(hù)心靈組ET, TXB2, TXB2/6KetoPGF1a比值及IMA顯著高于假手術(shù)組，NO及6KetoPGF1a顯著低于假手術(shù)組(P0.05)，復(fù)方丹參組和護(hù)心靈組與生理鹽水組比較則ET, TXB2, TXB2/6KetoPGF1a比值及IMA顯著

9、低于生理鹽水組，NO及6KetoPGF1a呈顯著高于生理鹽水組（P0.05,  P0.01）. 結(jié)論： 復(fù)方丹參和護(hù)心靈均能顯著提高急性缺血大鼠內(nèi)皮源性因子NO及6KetoPGF1a水平，降低ET, TXB2水平，對(duì)大鼠缺血心肌均具有保護(hù)作用，其中以護(hù)心靈效果更為顯著. 【關(guān)鍵詞】  護(hù)心靈；心肌缺血；內(nèi)皮源性因子；缺血修飾性白蛋白0引言當(dāng)心肌缺血發(fā)生后，心肌細(xì)胞也同時(shí)發(fā)生著缺血性損傷，但心肌細(xì)胞的損傷是一個(gè)逐漸進(jìn)行的動(dòng)態(tài)過(guò)程1，在缺血30 min以后即使血流恢復(fù)，受損心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能也不可能再得到完全的恢復(fù)2，當(dāng)心肌細(xì)胞發(fā)展為不可逆性的損傷時(shí)，即使恢復(fù)血液再

10、灌注也并不能使這種損傷減輕，甚至?xí)铀偈軗p心肌細(xì)胞的損傷、甚至導(dǎo)致心肌細(xì)胞死亡3，因此加強(qiáng)心肌缺血再灌注后心肌的保護(hù)對(duì)于缺血性心臟功能的保護(hù)就顯得特別重要. 護(hù)心靈是中草藥復(fù)方制劑. 其主要成分由隔山香、毛麝香4等組成. 為了解護(hù)心靈對(duì)缺血性心臟病的治療作用，我們就護(hù)心靈對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血大鼠內(nèi)皮源性因子及IMA的影響進(jìn)行了研究.1材料和方法1材料40只清潔Wistar雄性大鼠(196±14) g，由第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，隨機(jī)分為假手術(shù)組、生理鹽水組、復(fù)方丹參組和護(hù)心靈組，每組10只. 復(fù)方丹參片由上海海虹實(shí)業(yè)（集團(tuán)）巢湖中辰藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z3402069

11、3；HXL由南方醫(yī)科大學(xué)藥理教研室研制，由三七、川芎、麝香、冰片四味藥組成，經(jīng)檢測(cè)質(zhì)量控制在有效活性部位含量大于50%(批號(hào)： 20030715)；烏拉坦由曹陽(yáng)中學(xué)化工廠(chǎng)生產(chǎn)（批號(hào)： 990418）,用時(shí)以滅菌注射用水配制成20%注射液. ET, NO, TXB2, 6KetoPGF1a，購(gòu)自北京華英生物制品研究所，IMA試劑盒購(gòu)自北京邦定泰克生物技術(shù)有限公司，SN697型雙探頭計(jì)數(shù)器購(gòu)自上海原子核研究所日環(huán)儀器一廠(chǎng)；7510型全自動(dòng)生化分析儀購(gòu)自日本日立公司. 1.2方法復(fù)方丹參組按0.68 g/kg劑量給藥，護(hù)心靈組按200 mg/kg給藥、用溫生理鹽水配成體積分?jǐn)?shù)為50%的混懸

12、液. 假手術(shù)組和生理鹽水組均給予等容量的溫生理鹽水，1次/d，連續(xù)10 d，均采取灌胃給藥. 末次給藥后1 h，用20%烏拉坦5 mL/kg腹腔淺麻醉大鼠，背位固定，頸動(dòng)脈插管連接多導(dǎo)生理記錄儀，用橡皮球套住大鼠頭部，連接人工呼吸機(jī)進(jìn)行人工呼吸. 胸部去毛、常規(guī)消毒，沿左鎖骨中線(xiàn)縱行切開(kāi)皮膚約2 cm，于心尖明顯搏動(dòng)處拉開(kāi)胸廓，小心暴露心臟，剪開(kāi)心包，輕壓右側(cè)胸廓，微微擠出心臟，于左心耳根部與肺動(dòng)脈圓椎間結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈，假手術(shù)組只在結(jié)扎部位穿線(xiàn)，不結(jié)扎. 缺血45 min后恢復(fù)冠脈血流120 min結(jié)束實(shí)驗(yàn)，迅速心臟采血3 mL，置于100 g/L EDTA2Na2  30 L和抑肽

13、酶40 L試管中混勻，在4下4000 r/min離心20 min，取血漿分裝后，置于-70冰箱保存?zhèn)錂z測(cè). ET, NO, TXB2, 6KetoPGF1a放射免疫檢測(cè)采用上海原子核研究所日環(huán)儀器一廠(chǎng)生產(chǎn)的SN697型雙探頭計(jì)數(shù)器檢測(cè)；IMA的檢測(cè)采用日立7510型全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)，操作過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒提供說(shuō)明書(shū)進(jìn)行. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 所有數(shù)據(jù)采用SPSS10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量指標(biāo)數(shù)據(jù)用x±s表示，組間比較采用方差分析，兩兩比較采用SNKq檢驗(yàn). P0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.2結(jié)果實(shí)驗(yàn)性心肌缺血大鼠缺血復(fù)灌注后生理鹽水組、復(fù)方丹參組和護(hù)心靈組ET, TX

14、B2, TXB2/6KetoPGF1a比值及IMA顯著高于假手術(shù)組，NO及6KetoPGF1a顯著低于假手術(shù)組(護(hù)心靈組，P0.05；復(fù)方丹參組，P0.01；生理鹽水組，P0.001)；復(fù)方丹參組和護(hù)心靈組與生理鹽水組比較ET, TXB2, TXB2/6KetoPGF1a比值及IMA顯著低于生理鹽水組，NO及6KetoPGF1a呈顯著高于生理鹽水組(復(fù)方丹參組，P0.05；護(hù)心靈組，P0.01). 各組大鼠缺血復(fù)灌注后ET, NO, TXB2, 6KetoPGF1a, TXB2/6KetoPGF1a比值及IMA的含量有一定變化（表1）. 表1大鼠缺血復(fù)灌注后ET, NO, TXB2,

15、 6KetoPGF1a, TXB2/6KetoPGF1a及IMA變化情況（略）aP0.05, bP0.01 vs假手術(shù).3討論血漿ET, NO, TXA2和PGI2是一組由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成并分泌的血管活性物質(zhì)，對(duì)冠狀血管的舒縮有著重要的調(diào)節(jié)作用，ET和NO, TXA2和PGI2是兩對(duì)相互對(duì)抗的血管舒縮因子5-6，他們通過(guò)協(xié)同或?qū)棺饔脕?lái)舒張或收縮血管，以維護(hù)冠狀血管的正常狀態(tài). 其中TXA2和PGI2性質(zhì)         不穩(wěn)定，TXA2半衰期為30 s, PGI2的半衰期也僅有3 min，所以二者分泌后便迅速代謝

16、為T(mén)XB2和6KetoPGF1a. 因此通常通過(guò)測(cè)定TXB2和6KetoPGF1a的變化來(lái)反映TXA2和PGI2的變化情況. ET是迄今所知作用最強(qiáng)、持續(xù)最久的縮血管活性多肽，冠狀動(dòng)脈對(duì)ET的反應(yīng)最為敏感. 阻斷ET可明顯抑制Ca2+內(nèi)流，減輕心肌鈣超載和脂質(zhì)過(guò)氧化，減少細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和酶的漏出，對(duì)心肌有顯著的保護(hù)作用. NO在維持有效的冠狀動(dòng)脈循環(huán)血流、缺血后心肌的轉(zhuǎn)歸及心功能恢復(fù)等方面有著重要作用. 心肌缺血所導(dǎo)致的心功能障礙與心肌組織內(nèi)NO含量減少有關(guān),缺血后NO合酶抑制劑可對(duì)心功能產(chǎn)生負(fù)性肌力效應(yīng),影響缺血后心臟的功能. TXA2和PGI2由于相互拮抗，在通常情況下TXA2/PGI2維持

17、一種相對(duì)的比例，以維持適當(dāng)?shù)墓跔顒?dòng)脈張力及血小板內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定. 在心肌缺血導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷后，血小板被激活，TXA2產(chǎn)生增多，它通過(guò)抑制腺苷酸環(huán)化酶使血小板和血管壁平滑肌內(nèi)環(huán)磷酸腺苷（cAMP）減少，或者作為Ca2+載體直接促進(jìn)Ca2+內(nèi)流和致密管系統(tǒng)的Ca2+釋放，從而促進(jìn)血小板聚積和局部血管收縮，加重內(nèi)皮損傷. 鄰近的正常血管內(nèi)皮細(xì)胞能利用血小板釋放的前列腺素環(huán)內(nèi)過(guò)氧化物來(lái)增加PGI2合成. PGI2通過(guò)興奮腺苷酸環(huán)化酶，增加cAMP濃度，起到擴(kuò)張血管，限制血小板聚積和保護(hù)受損內(nèi)皮的作用. 心肌缺血后TXA2/PGI2失衡可引起血小板與血管壁相互作用的惡性循環(huán)，導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈痙攣，血栓形成，心

18、肌缺血性損傷進(jìn)一步加重7. 而缺血心肌內(nèi)產(chǎn)生的大量氧自由基又可以抑制冠狀動(dòng)脈的PGI2合成，形成惡性循環(huán)，從而引起一系列的心肌缺血后的病理性變化. IMA是近來(lái)在檢驗(yàn)心肌缺血中研究較熱門(mén)的檢測(cè)項(xiàng)目，是1994年以來(lái)美國(guó)藥品食品質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局（FDA）批準(zhǔn)的第一個(gè)用來(lái)評(píng)價(jià)心肌缺血的試驗(yàn)性指標(biāo). 它不僅敏感性強(qiáng)，而且具有高度的心肌特異性，在心肌缺血后數(shù)分鐘內(nèi)IMA便可出現(xiàn)迅速升高8，而且在循環(huán)中穩(wěn)定性好，維持時(shí)間長(zhǎng)，不易受其他器官組織缺血的影響9. 在我們的實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)性心肌缺血大鼠缺血復(fù)灌注后生理鹽水組、復(fù)方丹參組和護(hù)心靈組ET, TXB2, TXB2/6KetoPGF1a比

19、值及IMA顯著高于假手術(shù)組，NO及6KetoPGF1a顯著低于假手術(shù)組；復(fù)方丹參組和護(hù)心靈組與生理鹽水組比較則ET, TXB2, TXB2/6KetoPGF1a比值及IMA顯著低于生理鹽水組，NO及6KetoPGF1a呈顯著高于生理鹽水組. 說(shuō)明在大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌缺血后，其血管內(nèi)皮細(xì)胞受損非常明顯，其合成的血管舒縮因子正常的平衡關(guān)系受到了破壞，對(duì)心肌缺血具有高度的特異性和敏感性的IMA也顯著升高. 說(shuō)明實(shí)驗(yàn)性大鼠復(fù)灌注后心肌細(xì)胞受到了明顯的損傷，表明復(fù)方丹參和護(hù)心靈對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性缺血心肌均具有很好的保護(hù)作用，其中護(hù)心靈對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性缺血心肌的保護(hù)效果更為顯著.【參考文獻(xiàn)】1 Kaneko N, Ta

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