飼料中粗纖維的測(cè)定

1、飼料中粗纖維的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)飼料樣品中粗纖維的測(cè)定，掌握用飼料中粗纖維的測(cè)定方法。二、適用范圍本方法適用于粗纖維含量大于10g/kg的飼料。對(duì)粗纖維含量等于或小于10g/kg的飼料，可用ISO 6541描述的方法測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)還適用于谷物和豆類植物。三、方法原理用固定量的酸和堿，在特定條件下消煮樣品，再用醚、丙酮除去醚溶物，經(jīng)高溫灼燒扣除礦物質(zhì)后的所余物為粗纖維。（試樣用沸騰的稀釋硫酸處理，過(guò)濾分離殘?jiān)?，洗滌，然后用沸騰的氫氧化鉀溶液處理，過(guò)濾分離殘?jiān)?，洗滌，干燥，稱量，然后灰化。因灰化而失去的質(zhì)量相當(dāng)于試料中粗纖維質(zhì)量。）它不是一個(gè)確切的化學(xué)實(shí)體，只是在公認(rèn)強(qiáng)制規(guī)定的條件下，測(cè)出的概略養(yǎng)

2、分。其中以纖維素為主，還有少量半纖維素和木質(zhì)素。四、試劑和材料除非另有規(guī)定，只用分析純?cè)噭?。?）水 至少應(yīng)為GB/T 6682規(guī)定的3級(jí)水。（2）鹽酸溶液 c（HCl）=0.5mol/L（3）硫酸溶液 c（H2SO4）（0.23±0.005） mol/L（4）氫氧化鉀溶液 c（KOH）（0.23±0.005） mol/L（5）丙酮。（6）濾器輔料 海沙或硅藻土，或質(zhì)量相當(dāng)?shù)钠渌牧?。使用前，海沙用沸騰鹽酸c（HCl）4mol/L處理，用水洗至中性，在（500±25）下至少加熱1h。（7）防泡劑 如正辛醇。（8）石油醚 沸點(diǎn)范圍40-60。五、儀器設(shè)備（1）粉碎設(shè)

3、備 能將樣品粉碎，使其能完全通過(guò)篩孔為1mm的篩。（2）分析天平 感量0.1mg。（3）濾堝 石英的、陶瓷的或硬質(zhì)玻璃的，帶有燒結(jié)的濾板，濾板孔徑40100m。在初次使用前，將新濾堝小心地逐步加溫，溫度不超過(guò)525，并在（500±25）下保持?jǐn)?shù)分鐘。也可使用具有同樣性能特性的不銹鋼坩堝，其不銹鋼篩板的孔徑為90m。（4）陶瓷篩板。（5）灰化皿。（6）燒杯或錐形瓶 容量500mL，帶有一個(gè)適當(dāng)?shù)睦鋮s裝置，如冷凝器或一個(gè)盤。（7）干燥箱 用電加熱，能通風(fēng)，能保持溫度（30士2）。（8）干燥器 盛有藍(lán)色硅膠干燥劑，內(nèi)有厚度為23mm的多孔板，最好由鋁或不銹鋼制成。（9）馬福爐 用電加熱，可

4、以通風(fēng)，溫度可調(diào)控，在475-525條件下，保持濾堝周圍溫度準(zhǔn)至±25。馬福爐的高溫表讀數(shù)不總是可信的，可能發(fā)生誤差，因此對(duì)高溫爐中的溫度要定期檢查。因高溫爐的大小及類型不同，爐內(nèi)不同位置的溫度可能不同。當(dāng)爐門關(guān)閉時(shí)，必須有充足的空氣供應(yīng)。空氣體積流速不宜過(guò)大，以免帶走濾堝中物質(zhì)。（10）冷提取裝置 包括一個(gè)濾堝支架、一個(gè)裝有至真空和液體排出孔旋塞的排放管及連接濾堝的連接環(huán)。（11）加熱裝置（手工操作方法） 帶有一個(gè)適當(dāng)?shù)睦鋮s裝置，在沸騰時(shí)能保持體積恒定。（12）加熱裝置（半自動(dòng)操作方法） 用于酸和堿消煮，包括：一個(gè)濾堝支架、一個(gè)裝有至真空和液體排出孔旋塞的排放管、一個(gè)容積至少270

5、 mL的圓筒（供消煮用，帶有回流冷凝器）、一個(gè)將加熱裝置與濾堝及消煮圓筒連接的連接環(huán)。可選擇性地提供壓縮空氣，使用前，設(shè)備用沸水預(yù)熱5min。六、分析步驟試樣制備：試樣按GB/T 20195制備。用粉碎裝置將實(shí)驗(yàn)室風(fēng)干樣粉碎，使其能完全通過(guò)篩孔為1mm的篩，充分混合。方法一：手工操作法分析步驟（1）試料 稱取約1g制備的試樣（m1），準(zhǔn)確至0.1mg。如果試樣脂肪含量超過(guò)100g/kg，或試樣中脂肪不能用石油醚直接提取，則將試樣裝移至一濾堝，并按步驟（2）處理。如果試樣脂肪含量不超過(guò)100g/kg，則將試樣裝移至一燒杯。如果其碳酸鹽（碳酸鈣形式）超過(guò)50 g/kg，按步驟（3）處理，如果碳酸鹽

6、不超過(guò)50 g/kg，則按步驟（4）處理。（2）預(yù)先脫脂 在冷提取裝置中，在真空條件下，試樣用石油醚脫脂3次，每次用石油醚30ml，每次洗滌后抽吸干燥殘?jiān)?，將殘?jiān)b移至一燒杯。（3）除去碳酸鹽 將100ml鹽酸傾注在試樣上，連續(xù)振搖5min，小心將此混合物傾入一濾堝，濾堝底部覆蓋一薄層濾器輔料。用水洗滌兩次，每次用水100ml，細(xì)心操作最終使盡可能少的物質(zhì)留在濾器上。將濾堝內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至原來(lái)的燒杯中并按步驟（4）處理。（4）酸消煮 將150ml硫酸傾注在試樣上。盡快使其沸騰，并保持沸騰狀態(tài)30±1min。在沸騰開(kāi)始時(shí)，轉(zhuǎn)動(dòng)燒杯一段時(shí)間。如果產(chǎn)生泡沫，則加數(shù)滴防泡劑。在沸騰期間使用一個(gè)適

7、當(dāng)?shù)睦鋮s裝置保持體積恒定。（5）第一次過(guò)濾 在濾堝中鋪一層濾器輔料，其厚度約為濾堝高度的1/5，濾器輔料上面可蓋一篩板以防濺起。當(dāng)消煮結(jié)束時(shí)，將液體通過(guò)一個(gè)攪拌棒濾至濾堝中，用弱真空抽濾，使150ml幾乎全部通過(guò)。如果濾器堵塞，則用一個(gè)攪拌棒小心地移去覆蓋在濾器輔料上的粗纖維。殘?jiān)脽崴礈?次，每次約用10ml水，要注意使濾堝的過(guò)濾板始終有濾器輔料覆蓋，使粗纖維不接觸濾板。停止抽真空，加一定體積的丙酮，剛好能覆蓋殘?jiān)?，靜置數(shù)分鐘后，慢慢抽濾排出丙酮，繼續(xù)抽真空，使空氣通過(guò)殘?jiān)?，使之干燥。?）脫脂 在冷提取裝置中，在真空條件下，試樣用石油醚脫脂3次，每次用石油醚30ml，每次洗滌后抽吸干燥。

8、（7）堿消煮 將殘?jiān)哭D(zhuǎn)移至酸消煮用的同一燒杯中。加150ml氫氧化鉀溶液，盡快使其沸騰，保持沸騰狀態(tài)（30±1）min，在沸騰期間用一適當(dāng)?shù)睦鋮s裝置，使溶液體積保持恒定。（8）第二次過(guò)濾 燒杯內(nèi)容物通過(guò)濾堝過(guò)濾，濾堝內(nèi)鋪有一層濾器輔料，其厚度約為濾堝高度的1/5，上蓋一篩板以防濺起。殘?jiān)脽崴粗林行浴堅(jiān)谡婵諚l件下用丙酮洗滌3次，每次用丙酮30ml，每次洗滌后抽吸干燥殘?jiān)＃?）干燥 將濾堝置于灰化皿中，灰化皿及其內(nèi)容物在130干燥箱中至少干燥2h。在灰化或冷卻過(guò)程中，濾堝的燒結(jié)濾板可能有些部分變得松散，從而可能導(dǎo)致分析結(jié)果錯(cuò)誤，因此將濾堝置于灰化皿中。濾堝和灰化皿在干燥器中

9、冷卻，從干燥器中取出后，立即對(duì)濾堝和灰化皿進(jìn)行稱量（m2），準(zhǔn)確至0.1mg。（10）灰化 將濾堝和灰化皿置于馬福爐中，其內(nèi)容物在（500±25）下灰化，直至冷卻后連續(xù)兩次稱量的差值不超過(guò)2mg。每次灰化后，讓濾堝和灰化皿初步冷卻，在尚溫?zé)釙r(shí)置于干燥器中，使其完全冷卻，然后稱量（m3），準(zhǔn)確至0.1mg。（11）空白測(cè)定 用大約相同數(shù)量的濾器輔料，按步驟（4）-步驟（10）進(jìn)行空白測(cè)定，但不加試樣?；一鸬馁|(zhì)量損失不應(yīng)超過(guò)2mg。方法二：半自動(dòng)操作方法的分析步驟（1）試料 稱取約1g制備的試樣（m1），準(zhǔn)確至0.1mg。轉(zhuǎn)移至一帶有約2g濾器輔料的濾堝中。如果樣品脂肪含量超過(guò)100

10、 g/kg或樣品含脂肪不能用石油醚直接提取，則按步驟（2）進(jìn)行。如果樣品脂肪含量不超過(guò)100 g/kg，其碳酸鹽（碳酸鈣形式）含量超過(guò)50，按步驟（3）進(jìn)行，如果碳酸鹽不超過(guò)50 g/kg，則按步驟（4）進(jìn)行。（2）預(yù)先脫脂 將濾堝與冷提取裝置連接，試樣在真空條件下用石油醚洗滌3次，每次用石油醚30ml，每次洗滌后抽吸干燥殘?jiān)?。?）除去碳酸鹽 將濾堝與加熱裝置連接，試樣用鹽酸洗滌3次，每次用鹽酸30 ml，在每次加鹽酸后在過(guò)濾之前停留約1min。約用30ml水洗滌一次，按步驟（4）進(jìn)行。（4）酸消煮 將消煮圓筒與濾堝連接，將150ml沸硫酸轉(zhuǎn)移至帶有濾堝的圓筒中，如果出現(xiàn)泡沫，則加數(shù)滴防泡劑

11、，使硫酸盡快沸騰，并保持劇烈沸騰（30±1）min。（5）第一次過(guò)濾 停止加熱，打開(kāi)排放管旋塞，在真空條件下通過(guò)濾堝將硫酸濾出，殘?jiān)脽崴辽傧礈?次，每次用水30ml，洗滌至中性，每次洗滌后抽吸干燥殘?jiān)?。如果過(guò)濾發(fā)生問(wèn)題，建議小心吹氣排出濾器堵塞。如果樣品所含脂肪不能直接用石油醚提取，按步驟（6）進(jìn)行，否則，按步驟（7）進(jìn)行。（6）脫脂 將濾堝與冷提取裝置連接，殘?jiān)谡婵諚l件下用丙酮洗滌3次，每次用丙酮30ml。然后，殘?jiān)谡婵諚l件下用石油醚洗滌3次，每次用石油醚30ml。每次洗滌后抽吸干燥殘?jiān)?。?）堿消煮 關(guān)閉排出孔旋塞，將150ml。沸騰的氫氧化鉀溶液轉(zhuǎn)移至帶有濾堝的圓筒，加

12、數(shù)滴防泡劑，使溶液盡快沸騰，并保持劇烈沸騰（30±1）min。（8）第二次過(guò)濾 停止加熱，打開(kāi)排放管旋塞，在真空條件下通過(guò)濾堝將氫氧化鉀溶液濾去，用熱水至少洗滌3次，每次用水約30ml，洗至中性，每次洗滌后抽吸干燥殘?jiān)?。將濾堝與冷提取裝置連接，殘?jiān)谡婵諚l件下用丙酮洗滌3次，每次用丙酮30ml，每次洗滌后抽吸干燥殘?jiān)?。?）干燥 將濾堝置于灰化皿中，灰化皿及其內(nèi)容物在130干燥箱中至少干燥2h，在灰化或冷卻過(guò)程中，濾堝的燒結(jié)濾板可能有些部分變得松散，從而可能導(dǎo)致分析結(jié)果錯(cuò)誤，因此需將濾堝置于灰化皿中。濾堝和灰化皿在干燥器中冷卻，從干燥器中取出后，立即對(duì)濾堝和灰化皿進(jìn)行稱量（m2），準(zhǔn)

13、確至0.1mg。（10）灰化 將濾堝和灰化盤置于馬福爐中，其內(nèi)容物在（500±25）下灰化，直至冷卻后連續(xù)兩次稱量的差值不超過(guò)2mg。每次灰化后，讓濾堝和灰化皿初步冷卻，在尚溫?zé)釙r(shí)置于干燥箱中，使其完全冷卻，然后稱量（m3），準(zhǔn)確至0.1mg。（11）空白測(cè)定 用大約相同數(shù)量的濾器輔料，按步驟（4）-步驟（10）進(jìn)行空白測(cè)定，但不加試樣?；一鸬馁|(zhì)量損失不應(yīng)超過(guò)2mg。7測(cè)定結(jié)果的計(jì)算試樣中粗纖維的含量（X）以g/kg表示，按下式計(jì)算： 式（1）式中，m1為試料的質(zhì)量，g；m2為灰化盤、濾堝以及在130干燥后獲得的殘?jiān)馁|(zhì)量，mg；m3為灰化盤、濾堝以及在（500±25）灰化后獲得的殘?jiān)馁|(zhì)量，mg。結(jié)果四舍五入，精確到1g/kg。8重復(fù)性用同一方法對(duì)相同的實(shí)驗(yàn)材料，在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，由同一操作人員使用同一臺(tái)設(shè)備，在短時(shí)間內(nèi)獲得的兩個(gè)獨(dú)立的測(cè)定結(jié)果之間的絕對(duì)差值，超過(guò)表7-8中列出的重復(fù)性限r(nóng)的情況不大于5%。表7-8 測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性限（r）和再現(xiàn)性限（R）樣品粗纖維含量（