急性髓細胞白血病M2亞型細胞形態(tài)學及細胞遺傳學分析

1、急性髓細胞白血病M2亞型細胞形態(tài)學及細胞遺傳學分析    【摘要】nbsp;nbsp;目的：了解急性粒細胞白血病AML-M2亞型的細胞形態(tài)學及細胞遺傳學特征。方法：對23例以FAB分類標準確診的AML-M2初發(fā)患者的細胞形態(tài)學及細胞遺傳學資料進行回顧性分析；應用骨髓細胞短期培養(yǎng)法制備染色體標本，以R顯帶技術進行核型分析。結果     作者：謝守軍， 王娜， 彭興榮， 郝長來    作者單位：承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院， 河北 承德 067000河北省灤平縣醫(yī)院， 河北 灤平 0682

2、50 【摘要】  目的：了解急性粒細胞白血病AML-M2亞型的細胞形態(tài)學及細胞遺傳學特征。方法：對23例以FAB分類標準確診的AML-M2初發(fā)患者的細胞形態(tài)學及細胞遺傳學資料進行回顧性分析；應用骨髓細胞短期培養(yǎng)法制備染色體標本，以R顯帶技術進行核型分析。結果：34%M2a、92%M2b患者白血病細胞內(nèi)可見Auer小體，Auer小體在M2b患者細胞中檢出率明顯高于M2a患者；M2患者白血病細胞POX染色呈強陽性反應，在M2a細胞表達多為彌散細顆粒狀，而在M2b呈局灶團塊狀。23例患者中18例有克隆性染色體異常，異常核型檢出率78.3%（18/23）。16例M2a患者無一致性的染色體異常

3、。7例M2b患者均有特異性的t(8;21)異常，其中3例伴有y染色體丟失。結論：M2白血病組內(nèi)異質(zhì)性較大，M2a和M2b似乎具有各自獨特的細胞形態(tài)學及細胞遺傳學特性。 【關鍵詞】  急性粒細胞白血??； AML-M2； 細胞形態(tài)學； 細胞遺傳學 急性粒細胞部分分化型白血病 (acute myelomonocytic leukemia, AML-M2) 是一組異質(zhì)性較大的髓細胞白血病，常伴有特殊的染色體異常。其診斷標準由FAB協(xié)作組于1976年提出，在FAB分型的基礎上，國內(nèi)又將其分為M2a和M2b，后者由我國首先提出，1980年被列入國內(nèi)急性非淋巴細胞白血病分型標準中的一種特殊亞型。2

4、001年WHO分型中特別提出4種有再現(xiàn)性遺傳學異常的急性髓細胞白血病，其中t(8;21)(q22,q22)與M2b密切相關。細胞形態(tài)學和細胞遺傳學對AML-M2白血病的診斷、治療和預后判斷具有重要意義。為了解AML-M2的細胞形態(tài)學及細胞遺傳學特點，報告57例研究資料。 1  資料與方法 1.1  研究對象：57例均為2003年至2006年12月在我院血液室按FAB標準確診的M2初診治患者，其中23例進行了染色體核型分析。M2的診斷標準按文獻1。 1.2  試劑：瑞氏-姬姆薩（Wright-Gimsa）染液：珠海貝索生物技術有限公司。-NAE,PAS和POX試劑盒

5、購自中國醫(yī)學科學院血研所科技公司。 1.3  形態(tài)學檢查：骨髓及血涂片經(jīng)瑞氏-姬姆薩染色后分類計數(shù)，常規(guī)進行POX、-NAE（NaF）和PAS組化染色。 1.4  染色體核型分析：取患者初診治療前的骨髓，經(jīng)2448h培養(yǎng)后，收集細胞常規(guī)制片，應用R顯帶技術進行核型分析。分析中期細胞數(shù)1642個，根據(jù)細胞遺傳學國際命名體制（ISCN，1995）2對核型進行描述。至少2個細胞有同樣的染色體增加或結構重排，或者3個細胞有同樣的染色體丟失方可確認為一個異?？陕?。 1.5  統(tǒng)計學處理：兩均數(shù)比較應用t檢驗，統(tǒng)計數(shù)據(jù)采用SPSS10.0分析軟件處理。 2  結果

6、2.1  臨床特征：57例患者中男32例，女25例，中位年齡40歲（373）。其中13例為M2b亞型，余均為M2a亞型。乏力、面色蒼白為常見臨床表現(xiàn)，肝、脾、淋巴結腫大例數(shù)分別為12、7、11例，16例有胸骨壓痛，21例有皮膚紫癜、瘀斑。 2.2  血液學特征：本組57例患者白細胞中位數(shù)20.08×109/L，（0.66450.01）×109/L，血紅蛋白中位數(shù)70g/L，（36168）g/L，血小板中位數(shù)40×1012/L，（6658）×1012/L。其中M2a患者44例，白細胞中位數(shù)27.84×109/L，（0.6645

7、0.01）×109/L ，血紅蛋白中位數(shù)75g/L（38168）g/L，血小板中位數(shù)44×1012/L，（6658）×1012/L。M2b患者13例，白細胞中位數(shù)10.43×109/L（1.9177.0）×109/L ，血紅蛋白中位數(shù)60g/L（3695）g/L，血小板中位數(shù)29×1012/L，（11241）×1012/L。M2b患者白細胞、血紅蛋白和血小板減少較M2a更為明顯(p<0.05)。49例患者外周血涂片可見原粒。M2患者骨髓增生多為明顯活躍或極度活躍，2例（3.5%）M2a患者為低增生性急性白血病。約34%

8、（15/44）M2a、92% （12/13）M2b患者白血病細胞內(nèi)可見Auer小體。Auer小體在M2b發(fā)生頻率較M2b明顯增高，有顯著性差異(P<0.01)。M2b患者骨髓細胞異常中性中幼粒明顯增多：胞核與胞質(zhì)發(fā)育極不平衡，胞質(zhì)豐富，易見空泡，內(nèi)外漿明顯，內(nèi)漿含多量細小粉紅色中性顆粒，亦常見粗大橙紅色朝陽紅顆粒，染色質(zhì)細致疏松，核仁大而明顯，該特點有助于M2a與M2b的鑒別診斷。M2患者白血病細胞POX染色呈強陽性反應，在M2a細胞表達多呈彌散細顆粒狀分布，而在M2b多表達于異常中幼粒細胞胞核凹陷處（高爾基富含區(qū)）呈局灶團塊狀，此點亦有助于鑒別診斷。 2.3  細胞遺傳學特征

9、：57例M2患者中23例進行了染色體核型分析，第116例為M2a亞型白血病，第1723例為M2b白血病。23例M2患者異常核型檢出率78.3%（18/23），18例染色體異?；颊咧校瑔渭償?shù)目異常1例，結構異常12例，5例同時伴有數(shù)目和結構異常。分別占異常核型總數(shù)的5.5%、66.7%和27.8%。9例患者為異常核型與正常核型的嵌合體。t(8;21)易位8例，占M2亞型的34.8%，其中1例為罕見的伴t(8;21)(q22,q22)的復雜易位，核型為46,xy,t(8;21;8)(q22,q22,q24)。7例M2b患者均有t(8;21)異常，其中3例伴有y染色體丟失。16例M2a患者無特異性的

10、染色體重排，除2、10、13、16和19號染色體未見受累外，其余染色體均被累及。詳細資料見表1。 3  討論      AML-M2白血病的年發(fā)病率較高，約為0.66/10萬，占急性粒細胞白血病的35.5%3。M2b多為全血細胞減少，血紅蛋白、血小板減少較M2a更為明顯，與慢性再生障礙性貧血相似。本組47.4% （27/57）M2患者骨髓白血病細胞內(nèi)可見Auer小體，該小體在M2b更為易見，約占92%（12/13）。異常中性中幼粒細胞在M2b明顯增多：胞核與胞質(zhì)發(fā)育極不均衡，內(nèi)外漿明顯，內(nèi)漿含細小粉紅色中性顆粒，胞核凹陷折疊，呈腎形、

11、馬蹄形，染色質(zhì)細致疏松，核仁大而明顯。M2細胞POX呈強陽性，在M2a細胞表達多為彌散細顆粒狀分布，而在M2b呈局灶團塊狀。從免疫表型看，胞核、胞質(zhì)的多種蛋白形成紊亂遠較核漿發(fā)育不平衡復雜得多，有以下特點：代表不同發(fā)育階段的蛋白共存（CD34和CD33共存）；代表不同細胞系列的蛋白共存（CD33和CD19共存，CD19和CD56共存）；該共存的同細胞系列的蛋白卻不同時表達（M2b細胞表達CD19卻不表達CD10、 CD20、 CD22）。AML1/ETO融合基因有助于探明這些紊亂現(xiàn)象的發(fā)生機制，最近發(fā)現(xiàn)AML1/ETO對在正常髓細胞分化中起重要作用的轉(zhuǎn)錄因子PU.1和粒細胞分化因子C/EBP發(fā)

12、揮關鍵調(diào)節(jié)作用4,5。 表1  23例M2患者細胞遺傳學檢測結果（略） 大約20%40%的AML-M2患者有t(8;21)，本組資料t(8;21)占M2的34.8%，與文獻相符6。在分子水平上該易位導致原位于21號染色體長臂2區(qū)2帶的AML1基因易位到8號染色體長臂2區(qū)2帶上，與該處的ETO基因融合，形成AML1/ETO融合基因轉(zhuǎn)錄本，在M2白血病發(fā)病中起重要作用7。本組7例M2b患者均有t(8;21)異常，提示M2b與t(8;21)存在高度特異性，t(8;21)可作為M2b診斷分型的標志。M2b患者t(8;21)可以單獨發(fā)生，也可伴有其它染色體異常，-y是M2b最常見的伴隨改變，本

13、組42.9%（3/7）M2b患者伴有性染色體y丟失。第六屆國際白血病染色體會議對103例復發(fā)的AML進行分析8，發(fā)生多次復發(fā)的病例大多在t(8;21)組，t(8;21)復發(fā)時常伴隨出現(xiàn)9q-非隨機性異?；驈碗s易位。這可能與AML1/ETO在長期緩解的M2b患者骨髓細胞中持久表達而不能剔除有關9。本組中4例有t(8;21)的M2b患者經(jīng)HA（高三尖杉酯堿、阿糖胞苷）方案治療獲完全緩解813個月后復發(fā)，1例染色體核型為t(8;21;8)復雜變異易位，另1例為t(8;21)易位伴9q-附加異常，支持上述結論。具有單純t(8;21)者預后較佳，完全緩解率高，伴有附加復雜異常預后相對較差，尤其-y和9q

14、-的t(8;21)者CR率低。      16例M2a患者進行了染色體核型分析,異常核型檢出率68.8%（11/16），無一致性的染色體異常。可見較有特異性的異常染色體，包括del(5)，-7，t(8;21)，del(11)，del(12)(p12)等。11q23(MLL)異常主要見于AML-M5患者，該異常為高度異質(zhì)性，可以是缺失或易位，后者中涉及的伙伴染色體不定，以t(9;11)(p21,q23)為最常見，患者預后差。有文獻報道，del(12)(p12)異常較少見，患者多為M2型，本組2例患者有12p-，并不少見，可能與樣本量偏少有關。3例

15、（例5、13、15）患者有MDS前驅(qū)病史，涉及der(3)(3;6), del(5q), -11,del(11), del(12p), der(14)(5;14), del(15),-18異常，有MDS前驅(qū)病史患者的CR率明顯低于無MDS前驅(qū)病史的AML患者。值得一提的是本文發(fā)現(xiàn)1例嗜酸細胞明顯增高的病例，嗜酸細胞占骨髓有核細胞總數(shù)的19.5%，其染色體核型為46,xy,inv(1)(p22q44)。嗜酸細胞增多與該染色體異常是否具有內(nèi)在關聯(lián)，需要進一步研究闡明。      M2患者組內(nèi)異質(zhì)性較大，特別是M2b和M2a似乎具有各自獨特的臨床表現(xiàn)

16、和和生物學特性。概而言之有6點區(qū)別：M2b患者白細胞、血紅蛋白、血小板減少較M2a更為明顯。M2b患者骨髓異常中性中幼粒細胞較M2a明顯增多。M2b患者POX染色呈局灶團塊狀分布于異常中幼粒細胞胞核凹陷處，而M2a多為彌散細顆粒狀分布。Auer小體在M2b更為多見。M2b患者有特征性的t(8;21)異常和AML1/ETO融合基因，而M2a多表現(xiàn)為非特異性的基因重排，無一致性的染色體異常。M2b具有單純t(8;21)異?；颊咭锥啻螐桶l(fā)，但預后較佳，完全緩解率高，中位生存時間長。有鑒于此，WHO在對惡性血液系統(tǒng)疾病分類時，把AML伴t(8;21)(q22,q22)/AML1-ETO作為獨立亞型應用

17、于臨床診斷。 【參考文獻】  1 張之南，主編血液病診斷及療效標準M第版北京：科學技術出版社，1998171-1792 Mitelman F, edtor. ISCN 1995: An international system for human cytogenetic nomenclatureM.Basel: S. Karger,19951-114.3 鄧家棟，楊崇禮，楊天楹，等主編鄧家棟臨床血液學M第版上海：科學技術出版，2001954-9654 Vangala RK, Heiss-Neumann MS, Rangatia JS, et al. The myeloid maste

18、r regulator transcription factor PU.1 is inactivated by AML-ETO in t(8;21) myeloid leukaemiaJ. Blood,2003,101:270.5 Pabst T, Mueller BU, Harakawa N, et al. AML-ETO downregulates the granulocytic differentiation factor C/EBP alpha in t(8;21) myeloid leukaemiaJ. Nat Med, 2001,7:444.6 Nucifora G, Rowley JD. AML1 and the 8;21 and 3;21 translocations in acute and chronic myeloid leukaemiaJ. Blood, 1995,86:1-14.7 Nucifora G, Rowley JD. The AML1 and ETO genes in acute myeloid leukemia with a t(8;21). Leuk Lymphoma,1994,14:353.8 The sixth Internatio