菌種保藏的原理簡介

1、菌種保藏的原理簡介菌種保藏的具體方法很多，原理卻大同小異。首先要挑選典型菌種（typeculture）的優(yōu)良純種，最好采用它們的休眠體（如分生孢子、芽孢等）；其次，還要?jiǎng)?chuàng)造一個(gè)適合其長期休眠的環(huán)境條件，諸如干燥、低溫、缺氧、避光、缺乏營養(yǎng)以及添加保護(hù)劑或酸度中和劑等。 水分對(duì)生化反應(yīng)和一切生命活動(dòng)至關(guān)重要，因此，干燥尤其是深度干燥，在保藏中占有首要地位就不言而喻了。五氧化二磷、無水氯化鈣和硅膠是良好的干燥劑，當(dāng)然，高度真空還可同時(shí)達(dá)到驅(qū)氧和深度干燥的雙重目的。 除水分外，低溫乃是保藏中的另一重要條件。微生物生長的溫度低限約在-30，可是，在水溶液中能進(jìn)行酶促反應(yīng)的溫度低限則在-140左右。這或

2、許就是為什么在有水分的條件下，即使把微生物保藏在較低的溫度下，還是難以較長期地保藏它們的一個(gè)主要原因。 在低溫保藏中，細(xì)胞體積較大者一般要比較小者對(duì)低溫更為敏感，而無細(xì)胞壁者則比有細(xì)胞壁者敏感。其原因同低溫會(huì)使細(xì)胞內(nèi)的水分形成冰晶，從而引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)尤其是細(xì)胞膜的損傷有關(guān)。如果放到低溫（不是一般冰箱）下進(jìn)行冷凍時(shí)，適當(dāng)采用速凍的方法，可因產(chǎn)生的冰晶小而可減少對(duì)細(xì)胞的損傷。當(dāng)從低溫下移出并開始升溫時(shí)，冰晶又會(huì)長大，故快速升溫也可減少對(duì)細(xì)胞的損傷。當(dāng)然，不同微生物的最適冷凍速度和升溫速度也是不同的。 在實(shí)踐中，發(fā)現(xiàn)用較低的溫度進(jìn)行保藏時(shí)效果更為理想，如液氮溫度（-195）比干冰溫度（-70）好，-7

3、0又比-20好，而-20則比4好。 一種良好的保藏方法，首先應(yīng)能保持原菌的優(yōu)良性狀不變，同時(shí)還須考慮方法的通用性和操作的簡便性。具體的菌種保藏方法很多，其原理和應(yīng)用范圍各有側(cè)重，優(yōu)缺點(diǎn)也有所差別。菌種主要保存方法1、傳代培養(yǎng)保藏法；又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細(xì)菌用），培養(yǎng)后于46冰箱內(nèi)保存。,一般要保存在5度,但因類而異,如霍亂,淋球,腦膜炎,厭氧菌,鉤體等要保存于37度為宜.2、液體石蠟覆蓋保藏法；是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以

4、減弱代謝作用。主要適用于霉菌,酵母菌,放線菌,需氧性細(xì)菌等的保存3、載體保藏法；是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法。1)土壤保存法:主要用于形成孢子回孢囊的微生物的保存,特別適用于真菌和放線菌不改變性狀的長期保存.(2)砂土保存法:常用于梭狀芽孢桿菌和一部分霉菌的保存,可保存數(shù)年.(3)硅膠保存法:本法對(duì)保存鏈孢霉菌較有效,對(duì)酵母菌的保存也較有效(4)磁珠保存法:用本法保存根瘤菌在室溫下至少可保存2年半(5)濾紙保存法:適用于對(duì)干燥抵抗力較強(qiáng)的微生物,如油芽孢細(xì)菌和葡萄球菌.另外噬菌體,放線菌和絲狀菌也可用本法.4、寄主保藏法；用于目前尚不能在人工培養(yǎng)

5、基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。 5、冷凍保藏法：液氮冷凍保藏法；可分低溫冰箱（-20-30，-50-80）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70）和液氮（-196）等保藏法。 1)低溫冰箱保存法:多數(shù)微生物在-20度保存效果良好,(2)干冰保存法:-70度保存,(3)液氮保存法:保存溫度克達(dá)到-196度,本法可說是使用范圍最廣的微生物保存法.6、冷凍干燥保藏法：使微生物在冷凍狀態(tài)下,在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水份（真空干燥）,使細(xì)胞的生理活動(dòng)事實(shí)上停止,從而長期維持生活狀態(tài),本法適用于大多數(shù)細(xì)菌和放線菌,另外病毒,噬菌體,立克次氏體,霉菌和酵母菌在多數(shù)情況下用本法保存。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來制備細(xì)胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。保護(hù)性溶質(zhì)可通過氫和離子鍵對(duì)水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親和力來穩(wěn)定細(xì)胞成分的構(gòu)型。保護(hù)劑有牛乳、血清、糖類、甘油、二甲亞砜等。7.懸液保存法 1)蒸溜水保存法:霉菌,酵母菌和放線菌的大部分,使其懸浮于蒸餾水中,可