系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血淋巴細胞增殖反應(yīng)與其產(chǎn)生甲硫氨酸腦啡肽的關(guān)系課稿

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血淋巴細胞增殖反應(yīng)與其產(chǎn)生甲硫氨酸腦啡肽的關(guān)系安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報2000 年第 3 期第 35 卷 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究作者：徐星銘戴宏魏偉單位：徐星銘戴宏（安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，合肥230022）；魏偉（安徽醫(yī)科大學(xué)臨床藥理研究所，合肥230032）關(guān)鍵詞：紅斑狼瘡；系統(tǒng)性；血液；淋巴細胞；腦啡肽；甲硫氨酸摘要目的研究系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE) 患者外周血淋巴細胞(PBL) 增殖反應(yīng)與其產(chǎn)生甲硫氨酸腦啡肽(Met-Enk) 的關(guān)系。方法 淋巴細胞增殖法和 Met-Enk 放免測定。結(jié)果 SLE患者 PBL 增殖反應(yīng)異常增高的同時， 其產(chǎn)生的 Met-Enk 亦明顯升高。

2、結(jié)論PBL產(chǎn)生的內(nèi)源性 Met-Enk 可能參與了 SLE患者 PBL增殖反應(yīng)的異常改變。中圖分類號R593.24文獻標識碼 A 文章編號 1000-1492(2000)03-0184-02 Relation between proliferationand methionine-enkephalin production of the peripheral bloodlymphocytefrompatientswithsystemiclupuserythematosusXu Xingming,Dai Hong(The First Affiliated Hospital Wei Wei）（In

3、stitute of ClinicalPharmacology,Anhui Medical University,Hefei 230032)AbstractObjectiveTo observe therelationshipbetweenproliferationandmethionine-enkephalin(Met-Enk)production of the peripheral blood lymphocyte(PBL) frompatients with systemic lupus erythematosus(SLE). MethodsLymphocyteproliferation

4、and Met-Enk radioimmunoassaywere used.ResultsThe abnormalincreaseof PBLproliferation in SLE patients was related to the increaseof Met-Enkproduction.ConclusionEndogenousMet-EnkproducedbyPBLmay participatein theabnormalproliferation with SLE PBL.MeSHlupuserythematosus,systemic;blood,lymphocytes; enke

5、phalin, methionine內(nèi)源性阿片肽 (endogenous opioid,EOP)參與了免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)， - 內(nèi)啡肽 ( -endophin, -End) 對淋巴細胞增殖反應(yīng)的影響不能被納絡(luò)酮(naloxone,Nal)阻斷，此可能是由 -End 特異性的非阿片受體機制所介導(dǎo)1。而甲硫氨酸腦啡肽(methionine-enkephalin,Met-Enk)主要由刀豆蛋白A 或植物血凝素誘導(dǎo) T 淋巴細胞釋放， 通過自分泌、 旁分泌途徑對細胞增殖主要表現(xiàn)為調(diào)節(jié)作用2。然而，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupus erythematosus,SLE)患者外周血淋巴細胞(perip

6、heralblood lymphocyte,PBL)異常增殖反應(yīng)與PBL 產(chǎn)生Met-Enk的關(guān)系尚未見報道。1材料1.1SLE 患者來源安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)科就診患者。均符合1982 年美國風濕病學(xué)會SLE診斷標準確診為SLE。1.2人 PBL 的制備無菌取靜脈血3 ml 放入肝素抗凝管中。取10 ml離心管，預(yù)先加入2.5 ml淋巴細胞分離液，用滴管吸取抗凝血2 ml，離分層液約1 cm處，沿管壁緩慢加入。離心 400×g， 20 min ，吸棄血漿層至淋巴細胞層0.5 cm 處，將淋巴細胞和少許分離液一起移入 10 ml 離心管中，加入 5 倍體積 pH 7.2 無鈣、無

7、鎂的 Hanks 液中混勻，以 760×g 離心 10 min ，棄上清再反復(fù)洗 2 次，計數(shù)后用于實驗。1.3主要儀器與設(shè)備Napco-6100 CO2 培養(yǎng)箱，美國杜邦公司； XSZ倒置顯微鏡，重慶光學(xué)儀器廠；YJ-1450 型醫(yī)用凈化工作臺，蘇州凈化設(shè)備公司；TGL-16c 臺式高速離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠； GL20A全自動高速冷凍離心機，湖南儀器儀表總廠離心機廠； FJ-2011 自動 計數(shù)儀，西安 262 廠；EL301 Strip reader( 酶標儀 ) ，美國 Bio-Tek 公司。 ODS-硅膠柱 (Se08p-Pak) ，美國 Incstar 公司。1.4試

8、劑與藥物RPMI1640培養(yǎng)粉：美國 Gibco 公司產(chǎn)品。完全 RPMI1640培養(yǎng)液加 25 mmol*L-1 Hepes,1 mmol*L-1丙酮酸鈉， 2 mmol*L-1 谷氨酰胺， 50 mol*L-1 二巰基乙醇， 1×105 IU*L-1 青霉素 G，100 mg*L-1 鏈霉素， 10%(體積分數(shù) ) 小牛血清，pH為 7.4 。植物血凝素 (phytohemmaglutinin,PHA) ：美國 Serva 公司產(chǎn)品 ) 。四甲基偶氮唑鹽 (MTT)：美國 Sigma 公司產(chǎn)品，用含5 g*L-1 葡萄糖的磷酸緩沖液 (0.02 mol*L-1 pH 7.2) 配

9、成 5 g*L-1 使用液， 4冰箱避光保存。甲硫氨酸腦啡肽 (125I-Met-Enk) 藥盒：美國 Incstar 公司產(chǎn)品。2 方法2.1人 PBL增殖反應(yīng) 3常規(guī)制備人PBL懸液，用完全RPMI1640 培養(yǎng)液調(diào)成 1× 1010*L-1 。于 96 孔培養(yǎng)板中每孔加入細胞懸液 100 l ，4 mg*L-1 PHA 100 l ，置 0.05 CO2、37培養(yǎng) 48 h。于每孔加入 5 g*L-1 的 MTT液 100 l ，于振蕩器上振蕩 1 min ，再放入 0.05 CO2、37培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 2 h 。培養(yǎng)結(jié)束后以 760×g 離心 10 min ，吸棄

10、上清后每孔加入酸化異丙醇 120 l ，于振蕩器上振蕩 30 s ，在酶標儀上于 570 nm 波長處讀每孔吸光度 (absorbance,A) ，結(jié)果以其 A 的均值表示。2.2PBL的 Met-Enk 放免測定 根據(jù) Incstar 說明書進行。2.3統(tǒng)計分析 本研究數(shù)據(jù)以± s 表示，以組間 t 檢驗進行統(tǒng)計處理。3 結(jié)果圖 1 結(jié)果表明， SLE患者 PBL增殖反應(yīng)異常增高時，其產(chǎn)生Met-Enk 的水平也明顯高于正常人PBL產(chǎn)生 Met-Enk 的水平。圖1 人外周血淋巴細胞增殖反應(yīng)及其產(chǎn)生甲硫氨酸腦啡肽的關(guān)系( ±s,n=5)與正常人比較： *P 0.014 討

11、論淋巴細胞在致分裂原的作用下可產(chǎn)生EOP，這些 EOP在體內(nèi)同樣具有生物活性，也起著類似神經(jīng)內(nèi)分泌信號分子的作用。Met-Enk 可能是主要作用于免疫細胞的2 受體，在免疫調(diào)節(jié)中具有特殊功能 4。SLE的病理機制較復(fù)雜，涉及的研究面廣，目前仍十分不清 5。本研究表明， PHA可誘導(dǎo)正常人 PBL增殖及產(chǎn)生 Met-Enk ，而且發(fā)現(xiàn)， SLE患者 PBL異常增殖的同時，其產(chǎn)生 Met-Enk 的水平亦明顯升高，提示 PBL產(chǎn)生的內(nèi)源性 Met-Enk 可能參與了 SLE患者淋巴細胞功能的異常調(diào)節(jié)，對于進一步研究SLE免疫病理機制尤其是深入探討EOP與疾病的關(guān)系有一定幫助。作者簡介：徐星銘，女，

12、37 歲，碩士，副主任醫(yī)師魏偉，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，副所長，中國藥理學(xué)會抗炎免疫藥理專業(yè)委員會副主任委員參考文獻1，HazumE,Chang KJ,GuatracasasP. Specificnonopiatereceptors for-endorphins. Science,1979;205(6):1 0331 0352LinnerKM,QuistHE,SharpMet-enkephalin-containingpeptidesencodedproenkephalinamRNA expressedinactivedthymocytesinhibitthymocyteproliferation.BM.bymurineJImmunol,1995;154(6):5 0495 0603，陳敏珠，魏偉，張泓等 .免疫抑制藥和增強藥實驗法.見：徐叔云，卞如濂，陳修主編 . 藥理實驗方法學(xué).第 2版，北京：人民衛(wèi)生出版社，1991：1 208 1 2454，吳桐，李曉玉. 免疫細胞