安捷倫高效液相色譜儀(HPLC)的日常維護

1、安捷倫高效液相色譜儀（HPLC）的日常維護1、為什么溶劑和樣品要過濾? 溶劑和樣品過濾非常重要，它會對色譜柱、儀器起 到保護作用，消除由于污染對分析結(jié)果的影響。 色譜柱：由于填料顆粒很細，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑 和樣品中的細小顆粒會使色譜柱和毛細管容易堵塞。 儀器：溶劑和樣品中的細小顆粒會增加進樣閥的堵塞 和磨損，同時也會增加泵頭內(nèi)的藍寶石活塞桿和活塞 的磨損。 樣品過濾頭的類型： 30mm內(nèi)徑：適用于大進樣量的過濾，由0.2m和 0.45m兩種規(guī)格,材料有纖維素,醋酸纖維,聚四氟乙烯。 處理樣品體積少于50l。 13mm內(nèi)徑：適用于范圍廣的過濾，由0.2m和0.45m 兩種規(guī)格,材料為纖維素。

2、 3mm內(nèi)徑：適用于小進樣量的過濾，由0.2m和 0.45m兩種規(guī)格。處理樣品體積為7l。 濾膜類型：聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和 濾膜類型 鹽，并無任何可溶物。 醋酸纖維濾膜：不適用于有機溶劑，特別適用于水基 溶液，推薦用于蛋白質(zhì)和其相關(guān)樣品。 尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機溶劑和水溶液，可 用于強酸，70%乙醇、二氯甲烷、不適用于二甲基甲 酰胺。 再生纖維素濾膜：具有蛋白吸收低，同樣適用水溶性 樣品和有機溶劑。 2、為什么HPLC用緩沖鹽時要加在線Seal-wash選項？ HPLC用緩沖鹽時,由于泵頭內(nèi)的緩沖鹽溶液存在高 壓析鹽現(xiàn)象,析出的細小鹽粒非常堅硬,它附著在藍寶石 活塞桿

3、上,隨著藍寶石活塞桿的往復運動,容易產(chǎn)生劃痕, 并磨損密封墊,造成漏液等故障現(xiàn)象。在線Seal-wash選 項能有效的帶走可能存在的緩沖鹽結(jié)晶。緩沖鹽的濃 度在0.1mol或大于0.1mol時,必須使用該在線沖洗選項。 清洗液配制: 90%水+10%異丙醇.該混合液可抑制菌類 生長和減小水的表面張力。以2-3滴/min的速度虹吸流 下，不能干涸。 3、為什么Agilent 1200LC的流動相管路非常細 、為什么 的流動相管路非常細? 的流動相管路非常細 在使用HPLC時,應特別注意”柱外效應”對分析結(jié) 果的影響，由于樣品分子在液體流動相中的擴散系數(shù) 比在氣體中小45個數(shù)量級，液體流動相的流速

4、也比 1-2 氣相慢1-2個數(shù)量級。因此，樣品進入色譜柱后，在柱 子以外的任何死體積（進樣器、柱接頭、連接管、檢 測器）中，樣品分子的擴散和滯留，都會引起色譜峰 的展寬，而使柱效降低 。為使柱外效應減之最小，獲 得理想的分析結(jié)果，Agilent 1200LC 使用加工工藝難 度高的毛細管線作為流動相管路。 毛細管線分類：0.17mm內(nèi)徑綠色 ;0.12mm內(nèi)徑紅 色。 PEEK 管線：內(nèi)徑 0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。 毛細管線優(yōu)點: 柔韌性好. Agilent 公司同時備有1/16in 的粗外徑毛細管線,適用于 不同習慣的用戶 ,優(yōu)點是剛性好,但柔韌性差一些。 4、

5、流動相使用前為什么要脫氣？ 、流動相使用前為什么要脫氣？ 流動相使用前必須進行脫氣處理 ，以除去其中溶解 的氣體（如O2），以防止在洗脫過程中當流動相由色 譜柱流至檢測器時，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣泡會 增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無法分析。 溶解的氧氣還會導致樣品中某些組份被氧化，柱中固 定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用FLD，可能 會造成熒光猝滅。 常用的脫氣方法比較： 常用的脫氣方法比較： 氦氣脫氣法： 氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連 續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。 加熱回流法： 加熱回流法：效果較好，但操作復雜，且有毒性揮發(fā) 污染。 抽真空脫氣法：易抽走有

6、機相。 抽真空脫氣法： 超聲脫氣法： 超聲脫氣法：流動相放在超聲波容器中，用超聲波振 蕩10-15min，此法效果最差。 在線真空脫氣法：Agilent1100LC真空脫機利用膜滲透 技術(shù), 在線脫氣,智能控制,無需額外操作,成本低,脫氣效 果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。 5、如何防止溶劑瓶內(nèi)溶劑過濾器的堵塞，以及堵塞后 的處理？ 溶劑的質(zhì)量或污染以及藻類的生長會堵塞溶劑過濾 器，從而影響泵的運行，尤其水溶液或磷酸鹽緩沖液 （PH=47）。以下幾種方法可以有效防止溶劑瓶內(nèi) 溶劑過濾器的堵塞。 A：請嚴格執(zhí)行溶劑過濾。 B：請勿使用多日存放的蒸餾水及磷酸鹽緩沖液 。 C:在溶劑瓶

7、內(nèi)溶劑的上方小流量連續(xù)吹氬氣,以隔絕空 氣。 D:避免使溶劑瓶暴露在直射陽光下，盡量使用琥珀色 的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液。 堵塞后的處理法方法： 將過濾頭從組件中取下，在濃硝酸（35%）中浸泡1h， 然后用二次蒸餾水沖洗干凈并超聲處理。 6、Agilent 1200LC泵如何維護？ Agilent 1200LC泵給色譜柱提供穩(wěn)定、無脈動、流量 準確的流動相,及時合理的維護非常重要。 A：流動相使用前請必須脫氣、過濾。 B：使用緩沖鹽時，要加在線Seal-wash選項。 C：關(guān)機前，用 100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用 有機溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘（如甲醇），然后關(guān)泵， （適于反相色譜柱

8、）。正相色譜柱用適當?shù)娜軇_洗 D：及時更換Purge Valve內(nèi)的過濾芯。（當打開Purge Valve時，壓力高于10bar，表明過濾芯已堵）。E：使 用合適的密封圈。 7、如何選擇合適的泵頭活塞密封圈？ 、如何選擇合適的泵頭活塞密封圈？ 泵頭活塞的標準密封圈能適合于大多數(shù)應用，但使 用正相溶劑（如正己烷），不適合使用標準活塞密封 圈，特別是長時間使用時，需更換另一種不同的密封 圈，我們建議使用聚四氟乙烯密封圈。*注意：聚四 氟乙烯密封圈的壓力范圍為：0200bar；建議在泵的 壓力限制中，將最大壓力設為200bar。 8、使用梯度比例發(fā)時要注意那些事項？ 、使用梯度比例發(fā)時要注意那些事

9、項？ 當鹽溶液與有機溶劑溶液混合時，鹽溶液能與有機 溶劑溶液完全混溶，而不會出現(xiàn)沉淀。但是在比例閥 的混合點，重力作用使鹽顆粒沉淀下來，通常，閥A 接水相/鹽溶液，D接有機溶劑，此法連接可有效使鹽 回落到鹽溶液中，并被溶解。若顛倒過來，鹽可能落 在有機溶劑中，出現(xiàn)問題。 強烈建議： 強烈建議：當使用緩沖鹽溶液和有機溶劑時，推薦將 緩沖鹽通道接在A通道上，有機溶劑通道直接接在A通 道的上方D通道上；定期用水沖洗所有的通道，以除 去閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。 9、在線真空脫氣機使用要注意那些事項？ 、在線真空脫氣機使用要注意那些事項？ 一般來說，Agilent 1100LC 的真空脫氣機無需過多 維

10、護，只需注意幾個注意事項就可以了。 A：第一次使用，要用隨儀器附帶的注射器抽滿脫氣 機腔體；更換不同類型的溶劑時，要先抽空，再抽滿。 B：不用的通道要充滿溶劑或密閉起來。 10、更換色譜柱時要注意什么事項 、更換色譜柱時要注意什么事項? 在使用HPLC時,應特別注意”柱外效應 柱外效應”對分析結(jié)果 柱外效應 的影響，由于樣品分子在液體流動相中的擴散系數(shù)比 在氣體中小45個數(shù)量級，液體流動相的流速也比氣 相慢1-2個數(shù)量級。因此，樣品進入色譜柱后，在柱子 以外的任何死體積 死體積（進樣器、柱接頭 柱接頭、連接管、檢測 死體積 柱接頭 器）中，樣品分子的擴散和滯留，都會引起色譜峰的 展寬，而使柱效

11、降低 。為使柱外效應減之最小，獲得 理想的分析結(jié)果，儀器的流動相管路連接非常重要,一 般 Agilent 1200LC 在第一次安裝時,均有受過專業(yè)培訓的 安裝工程師負責安裝,各種接頭會處理的非常完美?？?戶只需在更換色譜柱時注意接頭處理就可以了，一般 柱子入口接頭為不銹鋼卡套接頭，柱子出口為不銹鋼 卡套接頭或PEEK管線手擰街頭，當完成第一次安張后， 不銹鋼卡套已固定死，當接不同的柱子時，要注意柱 子接頭處的形狀和長度，否則會產(chǎn)生一個非常大的死 體積。 11、手動進樣閥需做那些維護，使用時要注意什么？ 、手動進樣閥需做那些維護，使用時要注意什么？ 對于手動進樣器，當使用緩沖溶液后，或者進濃度

12、差 異比較大的樣品時要用專用工具而不是用帶針頭的注 射器沖洗進樣口，同時搬動進樣閥數(shù)次，每次數(shù)毫升。 注意事項： 注意事項： 安裝時六通閥的5，6出口要與注射器在同一水平線上， 以防止虹吸現(xiàn)象的發(fā)生，導致進樣量的重復性變異。 進樣量的多少要根據(jù)定量管的LOOP體積決定。 當樣品量少時： 進樣體積由注射器的進樣體積決定， 但最大進樣體積 要小于1/2loop體積。 當樣品量較多時：進樣體積由定量管的體積決定，為 保證樣品完全把定量管的流動相置換干凈，需注射5 6倍的LOOP體積。 C：要使用專用的液相注射器進樣，絕對不可以用氣 相的注射器。 結(jié)束語 這次培訓講課的是一位年輕的工程師，叫 尹怡，她的授課方式是每講一個內(nèi)容，講完后 作個小結(jié)，每天作個總結(jié)，第二天講新內(nèi)容前 都要回顧一下前天的內(nèi)容，這種講課方式讓所 學內(nèi)容印象深刻，加上每個內(nèi)容都留點時間為 大家答疑，有什么理