無水葡萄糖檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、 China Gateway Biologics (Shanghai) Co., LTD 凱惠睿智生物科技(上海)有限公司標(biāo)題Title :無水葡萄糖檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程Standard Operating Procedure for Anhydrous Glucose Inspection文件編號(hào)/Document Number:CGB-SOP-XXX生效日期/Effective Date: 2015-11-XX版本/Version:00目的PURPOSE 本操作規(guī)程目的在于建立規(guī)范的無水葡萄糖質(zhì)量檢測(cè)方法，為操作人員提供規(guī)范的操作依據(jù)，保證無水葡萄糖質(zhì)量的檢驗(yàn)準(zhǔn)確，數(shù)據(jù)可靠。范圍SCOPE本標(biāo)

2、準(zhǔn)操作規(guī)程適用于凱惠睿智生物科技（上海）有限公司GMP工廠QC 部。職責(zé)RESPONSIBILITY QC負(fù)責(zé)檢驗(yàn)儀器及器具INSTRUMENT AND APPLIANCE 分析天平、旋光度測(cè)定儀、紅外分光光度計(jì)、恒溫干燥箱、恒溫水浴箱、三角瓶、比色管、試管、酒精燈、吸管、移液管、容量瓶、蒸發(fā)皿、坩堝、酸式滴定管、馬弗爐、稱量瓶等。試劑及其配制方法REAGENT AND PREPARATION試劑：乙醇、硝酸、比色用氯化鈷液、比色用重鉻酸鉀液、比色用硫酸銅液、硫酸試劑配制方法： 氨試液：取濃氨溶液400ml，加水使成1000ml，即得。 堿性酒石酸銅試液（甲液）：取硫酸銅結(jié)晶6.93g，加水使

3、溶解成100ml。 堿性酒石酸銅試液（乙液）：取酒石酸鉀鈉結(jié)晶34.6 g與氫氧化鈉10g，加水使溶解成100ml。 堿性酒石酸銅試液：臨用時(shí)，將堿性酒石酸銅甲、乙液等量混合，即得。 酚酞指示液：取酚酞1g，加乙醇100ml使溶解，即得。 氫氧化鈉飽和水溶液：取氫氧化鈉適量，加水振搖使溶解成飽和溶液，冷卻后，置聚乙烯塑料瓶中，靜置數(shù)日，澄清后備用。 氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）：取澄清的氫氧化鈉飽和溶液5.6ml，加新沸過的冷水使成1000ml，搖勻。 氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L)：取氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）加新沸過的冷水稀釋制成。 稀硝酸：取硝酸105ml，加水稀釋至

4、1000ml，即得。本液含HNO3應(yīng)為9.510.5。 標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液（貯備液）：稱取氯化鈉0.165g，置1000ml量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液，（每1ml相當(dāng)于100g的氯）。 標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液（使用液）：臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于10g的氯）。 硝酸銀試液：取硝酸銀1.75g，加水100ml溶解即得。 稀鹽酸：取鹽酸234ml，加水稀釋至1000ml，即得。本液含HCl應(yīng)為9.5%10.5%。 標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液：稱取硫酸鉀0.181g，置1000ml量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。（

5、每1ml相當(dāng)于100g的SO4）。 25%氯化鋇溶液：取25g氯化鋇，加水100ml溶解即得。 碘試液：可取用碘滴定液（0.05mol/L）。 碘滴定液（0.05mol/L）：取碘13.0g，加碘化鉀36g與水50ml溶解后，加鹽酸3滴與水適量使成1000ml，搖勻，用垂熔玻璃濾器濾過。置玻璃塞的棕色玻瓶中，密閉，在涼處保存。 磺基水楊酸溶液（15）：取磺基水楊酸1g， 加水使溶解成5ml，即得。 稀硫酸：取硫酸57ml，加水稀釋成1000ml，即得。本液含H2SO4應(yīng)為9.5%10.5%。 草酸銨試液：取草酸銨3.5g，加水使溶解成100ml， 即得。 標(biāo)準(zhǔn)鈣溶液：精密稱取碳酸鈣0.1250

6、g，置500ml量瓶中，加水5ml與鹽酸0.5ml使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻。每1m l相當(dāng)于0.1m g的鈣（Ca）。 標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液（貯備液）：稱取硫酸鐵銨FeNH4(SO4)212H2O0.863g，置1000ml量瓶中,加水溶解后，加硫酸2.5ml，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液（每1ml相當(dāng)于100g的Fe）。 標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液（使用液）：臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于10g的Fe）。 30%硫氰酸銨溶液：取硫氰酸銨30 g，加水使溶解成100ml，即得。 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（貯備液）：稱取硝酸鉛0.1599g，置1000ml量瓶中，

7、加硝酸5ml與水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液（每1ml相當(dāng)于0.1mg的Pb）。 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（使用液）：臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于10g的Pb）。 7mol/L鹽酸溶液：取鹽酸63ml，加水適量使成100ml，搖勻。 2mol/L鹽酸溶液：取鹽酸18ml，加水適量使成100ml，搖勻。 5mol/L氨溶液：取濃氨溶液33.5ml，加水適量使成100ml，即得。 醋酸鹽緩沖液（pH3.5）：取醋酸銨25g，加水25ml溶解后，加7mol/L鹽酸溶液38ml，用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準(zhǔn)確調(diào)節(jié)p

8、H值至3.5(電位法指示)，用水稀釋至100ml，即得。 1mol/L氫氧化鈉溶液：取4g氫氧化鈉加水使溶解成100ml，即得。 硫代乙酰胺試液（甲液）：取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100ml，置冰箱中保存。 硫代乙酰胺試液（乙液）：由1mol/L氫氧化鈉溶液15ml、水5.0ml及甘油20ml混勻即得。 硫代乙酰胺試液：臨用前取硫代乙酰胺試液（甲液）1.0ml與硫代乙酰胺試液（乙液）5.0ml，置水浴上加熱20秒鐘，冷卻，立即使用。 醋酸鉛試液：取醋酸鉛10g，加新沸過的冷水溶解后，滴加醋酸使溶液澄清，再加新沸過的冷水使成100ml，即得。 醋酸鉛棉花：取脫脂棉花1.0g，浸入醋酸鉛試液與

9、水的等體積混合液12ml中,浸透后，擠壓除去過多的溶液，并使之疏松，在100以下干燥后，貯于玻璃塞瓶中備用。 乙醇制溴化汞試液：取溴化汞2.5g,加乙醇50ml,微熱使溶解,即得。本液應(yīng)置玻璃瓶?jī)?nèi)，在暗處保存。 溴化汞試紙：取濾紙條浸入乙醇制溴化汞試液中，1小時(shí)后取出，在暗處干燥，即得。 溴化鉀溴試液：取溴30g與溴化鉀30g，加水使溶解成100ml，即得。 20%氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉20g，加水溶解成100ml，混勻即得。 標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（貯備液）：稱取三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20%氫氧化鈉溶液5ml溶解后，用適量的稀硫酸溶液中和，再加稀硫酸溶液10ml，用水稀釋至刻

10、度,搖勻，作為貯備液（每1ml相當(dāng)于100g的As）。 標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（使用液）：臨用前，精密量取貯備液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸溶液10ml，用水稀釋至刻度,搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于1g的As）。 碘化鉀試液：取碘化鉀16.5g，加水使溶解成100ml，即得。本液應(yīng)臨用新制。 酸性氯化亞錫試液：取氯化亞錫20g，加鹽酸使溶解成50ml，濾過，即得。本液配成后三個(gè)月即不適用。程序PROCEDURE1. 性狀1.1 外觀1.1.1操作方法：取供試品適量，于光亮處觀察色澤，嗅其氣味，嘗其味道，記錄結(jié)果。1.1.2 結(jié)果判斷：供試品為無色結(jié)晶或白色結(jié)晶性或顆粒性粉末，無臭，味甜，則判符合

11、規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。1.2 溶解性1.2.1 操作方法：稱量供試品1g，于252加入9.9ml水，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒鐘，觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，記錄結(jié)果；稱量供試品0.01g，于252加入9.9ml乙醇，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒鐘，觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，記錄結(jié)果。1.2.2 結(jié)果判斷：在水中易溶，在乙醇中微溶，則判符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。2. 比旋度2.1 操作方法：取供試品約10g，精密稱定，置50ml量瓶中，加水適量與氨試液2.0ml，溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，放置60分鐘，在25時(shí)，測(cè)定其比旋度。2.2 結(jié)果判斷：按上述規(guī)程操作，若比旋度為+52.6至+53.2，

12、則判為符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。3. 鑒別3.1.1操作方法：取供試品約0.2g，加水5ml溶解后，緩緩滴入微溫的堿性酒石酸銅試液中，觀察現(xiàn)象。3.1.2結(jié)果判斷：若生成氧化亞銅的紅色沉淀，則判符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。3.2.1操作方法：取本品適量，依法測(cè)定紅外光吸收?qǐng)D譜。3.2.2結(jié)果判斷：若本品的紅外光吸收?qǐng)D譜與對(duì)照的圖譜一致，則判符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。4. 酸度4.1操作方法：取供試品2.0g，加水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴與氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L)0.20ml。4.2 結(jié)果判斷：若顯粉紅色，則判為符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。5. 溶液的澄清度與顏色5.1

13、操作方法：取供試品5.0g，加熱水溶解后，放冷，用水稀釋至10ml；如顯渾濁，與1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液比較；如顯色，與對(duì)照液（取比色用氯化鈷液3.0ml、比色用重鉻酸鉀液3.0ml與比色用硫酸銅液6.0ml，加水稀釋成50ml）1.0ml加水稀釋至10ml比較。5.2 結(jié)果判斷：若溶液澄清；若顯渾濁，與1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液比較不得更濃；若顯色，與對(duì)照液比較不得更深，則判為符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。6. 乙醇溶液的澄清度6.1操作方法：取供試品1.0g，加乙醇20ml，置水浴上加熱回流約40分鐘。6.2結(jié)果判斷：若溶液澄清，則判符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。7. 氯化物7.1操作方法：取供試品 0.60g，加

14、水溶解使成約25ml，置50ml納氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成約40ml，搖勻，即得供試品溶液。取標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液6.0ml置50ml納氏比色管中，搖勻，加稀硝酸10ml，加水使成約40ml，搖勻，即得對(duì)照溶液。分別向供試品溶液、對(duì)照溶液中加入硝酸銀試液1.0ml，用水稀釋使成50ml，搖勻，在暗處放置5分鐘。同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察、比較，并記錄結(jié)果。7.2結(jié)果判斷：若供試品管中溶液與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液比較，顏色淺則判為符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。8. 硫酸鹽8.1 操作方法：取供試品 2.0g，加水溶解使成約40ml，置50ml納氏比色管中，加稀鹽酸2ml，搖勻，即得供試溶液

15、。取標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液2.0ml置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml，加稀鹽酸2ml，搖勻，即得對(duì)照溶液。分別向供試溶液、對(duì)照溶液中加入25%氯化鋇溶液5ml，加水稀釋使成50ml，充分搖勻，放置10分鐘。同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察、比較，并記錄結(jié)果。8.2 結(jié)果判斷：若供試品管中溶液與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液比較，顏色淺則判為符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。9. 亞硫酸鹽與可溶性淀粉9.1 操作方法：取供試品1.0 g，加水10ml溶解后，加碘試液1滴，觀察現(xiàn)象。9.2 結(jié)果判斷：若顯黃色，則判符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。10. 干燥失重10.1 操作方法：取供試品約1g，精密稱定置105干燥至

16、恒重的稱量瓶中，在105干燥至橫重，由減失的重量和取樣量算供試品的干燥失重，記錄恒重時(shí)的溫度、恒重時(shí)間，稱量數(shù)據(jù)及結(jié)果等。計(jì)算公式：減失重量率100 m2 =M- m式中：m1：為供試品重量（g） M：為恒重稱量瓶+恒重供試品重量（g） m：為恒重稱量瓶重量（g） m2：為干燥至恒重的供試品重量（g） 供試品干燥時(shí)，應(yīng)平鋪在扁形稱瓶中，厚度不可超過5mm，如為疏松物質(zhì)，厚度不可超過10mm。放入烘箱或干燥器進(jìn)行干燥時(shí)，應(yīng)將瓶蓋取下，置稱量瓶旁，或?qū)⑵可w半開進(jìn)行干燥；取出時(shí)，須將稱量瓶蓋好。置烘箱內(nèi)干燥的供試品，應(yīng)在干燥后取出置干燥器中放冷，然后稱定重量。10.2 結(jié)果判斷：供試品按上述操作檢驗(yàn)

17、，減失重量不得過1.0%，則判符合規(guī)定，否則應(yīng)判為不符合規(guī)定。11. 熾灼殘?jiān)?1.1操作方法：取供試品1.0g， 置已熾灼至恒重的坩堝中，精密稱定，緩緩熾灼至完全炭化，放冷；加硫酸0.51ml使?jié)駶櫍蜏丶訜嶂亮蛩嵴魵獬M后，在700800C熾灼使完全灰化，移置干燥器內(nèi)，放冷，精密稱定后，再在700800C熾灼至恒重，即得。計(jì)算公式：遺留殘?jiān)剩ǎ﹎1100 式中：m1：為供試品重量（g） M：為恒重坩堝+恒重遺留殘?jiān)╣） m：為恒重坩堝重量（g）11.2結(jié)果判斷：若遺留殘?jiān)?.1%，則判符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。12. 蛋白質(zhì)12.1操作方法：取供試品1.0g，加水10ml溶解后，加

18、磺基水楊酸溶液（15）3ml，觀察現(xiàn)象。12.2結(jié)果判斷：若沒有發(fā)生渾濁或沉淀，則判符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。13. 鋇鹽13.1操作方法：取供試品2.0g，加水20ml溶解后，溶液分成兩等份，一份中加稀硫酸1ml，另一份中加水1ml，搖勻，放置15分鐘。13.2結(jié)果判斷：若兩液均澄清，則判符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。14. 鈣鹽14.1操作方法：取供試品1.0g，加水10ml溶解后，加氨試液1ml與草酸銨試液5ml，搖勻，放置1小時(shí)，如發(fā)生渾濁，與標(biāo)準(zhǔn)鈣溶液1.0ml制成的對(duì)照液比較。14.2 結(jié)果判斷：若供試品管中溶液與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液比較，顏色淺則判為符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。15. 鐵

19、鹽15.1操作方法：取供試品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，緩慢煮沸5 分鐘，放冷，用水稀釋制成45ml，加30%硫氰酸銨溶液3.0ml，搖勻，如顯色，與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液2.0ml用同一方法制成的對(duì)照液比較。15.2 結(jié)果判斷：若供試品管中溶液與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液比較，顏色淺則判為符合規(guī)定，否則判不符合規(guī)定。16. 重金屬16.1 操作方法：取50ml納氏比色管三支，甲管中加入標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2ml，醋酸鹽緩沖液 (pH3.5) 2ml后，加水使成25ml；乙管中取供試品5.0g，加水23ml溶解后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml；丙管取供試品5.0g，加入標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2ml與醋酸鹽緩沖液 (pH3

20、.5) 2ml，加水使成25ml。在甲、乙、丙三管中分別加硫代乙酰胺試液各2ml，搖勻，放置2 分鐘，同置白紙上，自上向下透視，觀察現(xiàn)象。16.2 結(jié)果判斷：供試品按上述操作檢驗(yàn)，當(dāng)丙管中顯出的顏色不淺于甲管時(shí)，乙管中顯示的顏色與甲管比較，未見更深（0.0004%），則判為符合規(guī)定；否則判為不符合規(guī)定。17. 砷鹽17.1 儀器裝置：如圖1：A為100ml標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶；B為中空的標(biāo)準(zhǔn)磨口塞，上連導(dǎo)氣管C(外徑8.0mm，內(nèi)徑6.0mm)，全長(zhǎng)約180mm；D為具孔的有機(jī)玻璃旋塞，其上部為圓形平面，中央有一圓孔，孔徑與導(dǎo)氣管C的內(nèi)徑一致，其下部孔徑與導(dǎo)氣管C的外徑相適應(yīng)，將導(dǎo)氣管C的頂端套人旋

21、塞下部孔內(nèi)，并使管壁與旋塞的圓孔相吻合，黏合固定；E為中央具有圓孔（孔徑6.0mm）的有機(jī)玻璃旋塞蓋，與D緊密吻合。17.2 操作方法17.2.1 定砷裝置的準(zhǔn)備：測(cè)試時(shí)，于導(dǎo)氣管中裝入醋酸鉛棉花60mg（裝管高度為60-80mm），再于旋塞的頂端平面上放一片溴化汞試紙（試紙大小以能覆蓋孔徑而不露出平面外為宜），蓋上旋塞蓋并旋緊，即得。17.2.2 標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備：精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml，置標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，立即將照上法裝妥的導(dǎo)氣管C密塞于標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶A上，并將標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶A置25-4

22、0水浴中，反應(yīng)45分鐘，取出溴化汞試紙，即得。17.2.3 供試品砷斑的制備：取供試品2.0g，加水5ml溶解后，加稀硫酸5ml與溴化鉀溴試液0.5ml，置水浴上加熱約20分鐘，使保持稍過量的溴存在，必要時(shí)，再補(bǔ)加溴化鉀溴試液適量，并隨時(shí)補(bǔ)充蒸散的水分，放冷，加鹽酸5ml與水適量使成28ml，自“再加碘化鉀試液5ml”起，依法操作，即得。17.3 結(jié)果判斷：供試品形成砷斑的顏色不得深于標(biāo)準(zhǔn)砷斑的顏色，即為符合規(guī)定，否則為不符合規(guī)定。18. 微生物限度18.1 微生物限度檢查中所使用的培養(yǎng)基按“CGB-QC-SOP-004 培養(yǎng)基管理操作規(guī)程”中相關(guān)規(guī)定制備，且應(yīng)進(jìn)行適用性檢查合格后使用。18.

23、2 需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)18.2.1 供試液制備：取供試品10g，加入pH7.0無菌-氯化鈉蛋白胨緩沖液溶解稀釋至100ml，混勻，作為1：10供試液；取1：10供試液1ml加入9ml pH7.0無菌-氯化鈉蛋白胨緩沖液中，混勻，作為1：100供試液；取1：100供試液1ml加入9ml pH7.0無菌-氯化鈉蛋白胨緩沖液中，混勻，作為1：1000供試液。18.2.2 需氧菌總數(shù)：在超凈臺(tái)內(nèi)拆去S60微生物限度培養(yǎng)器的無菌外包裝，將培養(yǎng)器安裝到微生物限度檢驗(yàn)儀泵頭上，用少量pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤濕濾膜，取1:10供試液1ml過濾，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，沖

24、洗量為100ml。沖洗后，取下培養(yǎng)器，在膜反面澆注溫度不超過45胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，3035下培養(yǎng)35天，觀察菌落生長(zhǎng)情況，點(diǎn)計(jì)平板上生長(zhǎng)的所有菌落數(shù)，計(jì)數(shù)并報(bào)告。平行制備2個(gè)平板。同法操作1：100、1：1000供試液。每個(gè)稀釋級(jí)各制備兩個(gè)平板。18.2.3 霉菌和酵母菌總數(shù)檢查：在超凈臺(tái)內(nèi)拆去S60微生物限度培養(yǎng)器的無菌外包裝，將培養(yǎng)器安裝到微生物限度檢驗(yàn)儀泵頭上，用少量pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤濕濾膜，取1:10供試液1ml過濾，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，沖洗量為100ml。沖洗后，取下培養(yǎng)器，在膜反面澆注溫度不超過45沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，2025下培養(yǎng)57天，觀察菌落生長(zhǎng)情況，點(diǎn)計(jì)平板上生長(zhǎng)的所有菌落數(shù)，計(jì)數(shù)并報(bào)告。平行制備2個(gè)平板。同法操作1：100供試液。每個(gè)