腫瘤標(biāo)志物課件課件

1、關(guān)于腫瘤標(biāo)志物課件第一頁，共69頁幻燈片人體癌癥地圖人體癌癥地圖第二頁，共69頁幻燈片在腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細(xì)胞合在腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細(xì)胞合 成、釋放、或者是宿主對(duì)腫瘤反應(yīng)產(chǎn)生的成、釋放、或者是宿主對(duì)腫瘤反應(yīng)產(chǎn)生的 一類生化物質(zhì)一類生化物質(zhì)在血液、體液及組織中腫瘤標(biāo)志物的定量在血液、體液及組織中腫瘤標(biāo)志物的定量 或定性檢測(cè)可以作為腫瘤篩查（僅或定性檢測(cè)可以作為腫瘤篩查（僅AFPAFP與與 PSAPSA用于高危人群）、鑒別診斷、用于高危人群）、鑒別診斷、治療后治療后 病情監(jiān)測(cè)及預(yù)后判斷的標(biāo)志與依據(jù)病情監(jiān)測(cè)及預(yù)后判斷的標(biāo)志與依據(jù)腫瘤標(biāo)志物腫瘤標(biāo)志物 【tumor markers

2、TM】第三頁，共69頁幻燈片腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用的一般準(zhǔn)則腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用的一般準(zhǔn)則是大分子物質(zhì)是大分子物質(zhì)( (多為糖蛋白或脂蛋白成分多為糖蛋白或脂蛋白成分),),其在外周血其在外周血 和和/ /或 其 他 體 液 中 的 表 達(dá) 和 濃 度 變 化 與 惡或 其 他 體 液 中 的 表 達(dá) 和 濃 度 變 化 與 惡 性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切在腫瘤細(xì)胞表面或腫瘤細(xì)胞內(nèi)合成，或通過其它細(xì)胞誘在腫瘤細(xì)胞表面或腫瘤細(xì)胞內(nèi)合成，或通過其它細(xì)胞誘 導(dǎo)而成導(dǎo)而成用 于 診 斷 的用 于 診 斷 的 “理 想 標(biāo) 志 物理 想 標(biāo) 志 物 ” 應(yīng) 具 備 ： 僅 在 細(xì) 胞應(yīng) 具 備

3、 ： 僅 在 細(xì) 胞 惡 變 后 才 產(chǎn) 生 、 分 泌 到 血 中 ， 濃 度 可 達(dá) 被 檢 測(cè)惡 變 后 才 產(chǎn) 生 、 分 泌 到 血 中 ， 濃 度 可 達(dá) 被 檢 測(cè) 到；一經(jīng)檢測(cè)即可知腫瘤發(fā)生的部位到；一經(jīng)檢測(cè)即可知腫瘤發(fā)生的部位第四頁，共69頁幻燈片目前臨床應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物現(xiàn)狀目前臨床應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物現(xiàn)狀理想形式理想形式特異性特異性100%真陰性真陰性100%假陽性假陽性 0%健康人健康人臨界值臨界值敏感性敏感性100%真陽性真陽性100%假陰性假陰性 0%腫瘤患者腫瘤患者實(shí)際狀況實(shí)際狀況假陰性假陰性假陽性假陽性臨界值臨界值敏感性敏感性100%特異性特異性- 60%健康人健康人腫瘤

4、患者腫瘤患者特異性特異性100%敏感性敏感性- 50%敏感性上升敏感性上升特異性上升特異性上升腫瘤標(biāo)志物參數(shù)在健康人和腫瘤患者兩組人群間的區(qū)別腫瘤標(biāo)志物參數(shù)在健康人和腫瘤患者兩組人群間的區(qū)別實(shí)際狀態(tài)：假陰性和假陽性在選擇臨界值中的作用：實(shí)際狀態(tài)：假陰性和假陽性在選擇臨界值中的作用：特異性越高，敏感性越低，反特異性越高，敏感性越低，反之亦然之亦然第五頁，共69頁幻燈片腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) TMTM的診斷數(shù)值取決于其敏感性和特異性的診斷數(shù)值取決于其敏感性和特異性 TMTM的特異性是：在健康人或良性疾病患者的特異性是：在健康人或良性疾病患者 所檢測(cè)到的真陰性結(jié)果發(fā)生率，即所檢

5、測(cè)到的真陰性結(jié)果發(fā)生率，即假陽性假陽性 結(jié)果百分率越低，特異性越好結(jié)果百分率越低，特異性越好 TMTM的敏感率是腫瘤患者檢測(cè)陽性結(jié)果的百分率的敏感率是腫瘤患者檢測(cè)陽性結(jié)果的百分率4第六頁，共69頁幻燈片TM敏感性和特異性在診斷上的意義敏感性和特異性在診斷上的意義關(guān)鍵依賴于腫瘤分期和對(duì)照組的選擇，只有關(guān)鍵依賴于腫瘤分期和對(duì)照組的選擇，只有 腫瘤分期確定后，敏感性的數(shù)據(jù)才是可靠的腫瘤分期確定后，敏感性的數(shù)據(jù)才是可靠的只有對(duì)照組有明確限定特征，其特異性才有只有對(duì)照組有明確限定特征，其特異性才有 意義意義目前研究結(jié)果不僅是特異性和敏感性，還應(yīng)目前研究結(jié)果不僅是特異性和敏感性，還應(yīng) 指出群體研究中的個(gè)體

6、結(jié)果以及普遍的分類指出群體研究中的個(gè)體結(jié)果以及普遍的分類第七頁，共69頁幻燈片TM的臨界值設(shè)定原則的臨界值設(shè)定原則 臨 界 值 是 指 某 一臨 界 值 是 指 某 一T M在 正 常 人 或 良 性 疾 病 患 者 中在 正 常 人 或 良 性 疾 病 患 者 中 的假定上限值的假定上限值臨 界 值 無 固 定 數(shù) 值 ， 可 隨 試 驗(yàn) 的 目 的 而 改 變 ；臨 界 值 無 固 定 數(shù) 值 ， 可 隨 試 驗(yàn) 的 目 的 而 改 變 ； 鑒鑒 定 盡 可 能 多 的 腫 瘤 患 者 ， 降 低 臨 界 值 以 增 加 其 敏定 盡 可 能 多 的 腫 瘤 患 者 ， 降 低 臨 界 值

7、 以 增 加 其 敏 感性（假陽性感性（假陽性 ，特異性，特異性 ）最 大 可 能 地 指 示 出 腫 瘤 發(fā) 生 ， 臨 界 值 可 設(shè) 定 得 高最 大 可 能 地 指 示 出 腫 瘤 發(fā) 生 ， 臨 界 值 可 設(shè) 定 得 高 些 ， 以 增 加 其 特 異 性 （ 假 陰 性些 ， 以 增 加 其 特 異 性 （ 假 陰 性 ， 敏 感 性， 敏 感 性 ）T M的 診 斷 價(jià) 值 很 大 程 度 上 取 決 于 臨 界 值 的 選 擇 ；的 診 斷 價(jià) 值 很 大 程 度 上 取 決 于 臨 界 值 的 選 擇 ； 在 相 對(duì) 于 健 康 人 和 良 性 疾 病 患 者 特 異 性

8、為在 相 對(duì) 于 健 康 人 和 良 性 疾 病 患 者 特 異 性 為9 5 % 的的 臨 界 值 水 平 上 比 較 其 數(shù) 據(jù) ， 可 提 高 此臨 界 值 水 平 上 比 較 其 數(shù) 據(jù) ， 可 提 高 此T M 的 敏 感 性的 敏 感 性第八頁，共69頁幻燈片特異性、敏感性及陰性和陽性預(yù)期值定義特異性、敏感性及陰性和陽性預(yù)期值定義特異性特異性=真陰性結(jié)果數(shù)真陰性結(jié)果數(shù)真陰性結(jié)果數(shù)真陰性結(jié)果數(shù)+假陽性結(jié)果數(shù)假陽性結(jié)果數(shù)敏感性敏感性=真陰性結(jié)果數(shù)真陰性結(jié)果數(shù)真陽性結(jié)果數(shù)真陽性結(jié)果數(shù)+假陰性結(jié)果數(shù)假陰性結(jié)果數(shù)陽性預(yù)期值陽性預(yù)期值=真陽性結(jié)果數(shù)真陽性結(jié)果數(shù)真陽性結(jié)果數(shù)真陽性結(jié)果數(shù)+假陽性結(jié)

9、果數(shù)假陽性結(jié)果數(shù)陰性預(yù)期值陰性預(yù)期值=真陰性結(jié)果數(shù)真陰性結(jié)果數(shù)真陰性結(jié)果數(shù)真陰性結(jié)果數(shù)+假陰性結(jié)果數(shù)假陰性結(jié)果數(shù)第九頁，共69頁幻燈片臨床實(shí)驗(yàn)室選用腫瘤標(biāo)志物試驗(yàn)的要求臨床實(shí)驗(yàn)室選用腫瘤標(biāo)志物試驗(yàn)的要求可靠性和重復(fù)性可靠性和重復(fù)性批內(nèi)變異批內(nèi)變異 5%批間變異批間變異10%寬分析范圍寬分析范圍合理收費(fèi)和減輕工作人員負(fù)擔(dān)合理收費(fèi)和減輕工作人員負(fù)擔(dān)高特異性高特異性95%高敏感性高敏感性50%最佳陽性和陰性預(yù)期值（最佳陽性和陰性預(yù)期值（PV）與腫瘤大小的相關(guān)性與腫瘤大小的相關(guān)性本地區(qū)適合的試劑和批號(hào)本地區(qū)適合的試劑和批號(hào)敏感性（敏感性（%）特異性（特異性（%）10080-60-40-20-0100

10、80 60 40 20 0標(biāo)志標(biāo)志A標(biāo)志標(biāo)志B兩條兩條ROC（接受器工作特性）曲線，（接受器工作特性）曲線，A在對(duì)照組和惡性腫瘤之間分布好，在對(duì)照組和惡性腫瘤之間分布好，B不能進(jìn)行分布不能進(jìn)行分布第十頁，共69頁幻燈片腫瘤胚胎性抗原腫瘤胚胎性抗原 甲胎蛋白（甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（）、癌胚抗原（CEA）異位激素異位激素 絨毛膜促性腺激素（絨毛膜促性腺激素（HCG）、促腎上腺皮質(zhì)激素）、促腎上腺皮質(zhì)激素 （ACTH）、降鈣素）、降鈣素酶和同工酶酶和同工酶 乳酸脫氫酶（乳酸脫氫酶（LDH） 神經(jīng)元特異性烯醇化酶（神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE） 前列腺酸性磷酸酶（前列腺酸性磷酸酶（PAP）血漿

11、蛋白血漿蛋白 2巨球蛋白（巨球蛋白（PsM）細(xì)胞代謝產(chǎn)物細(xì)胞代謝產(chǎn)物 脂質(zhì)相關(guān)涎酸脂質(zhì)相關(guān)涎酸腫瘤抗原腫瘤抗原 CAl99、CAl25癌基因和抑癌基因蛋白產(chǎn)物癌基因和抑癌基因蛋白產(chǎn)物 cmyc、ras、p53、Rb微量元素微量元素 砷、銅、鐵、硒、鋅砷、銅、鐵、硒、鋅腫瘤標(biāo)志物分類腫瘤標(biāo)志物分類第十一頁，共69頁幻燈片生化特性：生化特性： 糖蛋白，糖蛋白，4560%糖，電泳糖，電泳遷移率，遷移率，6個(gè)個(gè) 抗原決定基抗原決定基分子量：分子量： 180,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 胚胎及胎兒腸黏膜胚胎及胎兒腸黏膜參考值范圍：參考值范圍：3ng/ml臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 監(jiān)測(cè)結(jié)直腸癌、胃癌、乳腺癌和

12、支氣管監(jiān)測(cè)結(jié)直腸癌、胃癌、乳腺癌和支氣管 癌病程及療效癌病程及療效影響因素：影響因素： 5%吸煙者檢測(cè)值可至吸煙者檢測(cè)值可至2.55ng/ml， 1%至至1020ng/ml；肝炎疾病可使；肝炎疾病可使CEA 水平短暫升高水平短暫升高癌胚抗原癌胚抗原 【CEA】99mTc(鍀）標(biāo)記抗癌胚抗原單抗C50片段Fab第十二頁，共69頁幻燈片生化特性：生化特性： 糖蛋白，糖蛋白，4%糖，電泳糖，電泳-1-遷移率遷移率分子量：分子量： 70，000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 卵黃囊、胚胎肝卵黃囊、胚胎肝參考值范圍：參考值范圍：15ng/ml臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝細(xì)胞癌發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝細(xì)胞癌,監(jiān)測(cè)治療效果

13、監(jiān)測(cè)治療效果;用用 于診斷生殖細(xì)胞腫瘤于診斷生殖細(xì)胞腫瘤影響因素：影響因素： 肝炎疾病可使肝炎疾病可使AFP水平短暫升高水平短暫升高;AFP可通過胎盤可通過胎盤,妊娠妊娠3236周可達(dá)高峰周可達(dá)高峰；羊水中；羊水中AFP濃度與胎兒身長與孕周呈負(fù)相關(guān)（其濃度與胎兒身長與孕周呈負(fù)相關(guān)（其95%參考上限參考上限5500200ng/ml，2441孕周），于正常提示胎兒畸形、死胎、無腦兒和開放性神經(jīng)缺損等孕周），于正常提示胎兒畸形、死胎、無腦兒和開放性神經(jīng)缺損等甲胎蛋白甲胎蛋白【AFP】肝癌細(xì)胞AFP+HCC患者外周血AFP mRNA RT-PCR （反轉(zhuǎn)錄）產(chǎn)物電泳圖譜第十三頁，共69頁幻燈片生化特性

14、：生化特性： 單鏈糖蛋白，前列腺分泌產(chǎn)物單鏈糖蛋白，前列腺分泌產(chǎn)物分子量：分子量： 36，000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 前列腺分泌腺管前列腺分泌腺管參考值范圍：參考值范圍：3.7ng/ml臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 監(jiān)測(cè)前列腺癌監(jiān)測(cè)前列腺癌影響因素：影響因素： 具有組織特異性，但不是腫瘤所特異具有組織特異性，但不是腫瘤所特異 的，注意：應(yīng)在的，注意：應(yīng)在直腸癌指診前取血直腸癌指診前取血， 前列腺癌患者多高于前列腺癌患者多高于10ng/ml前列腺特異抗原前列腺特異抗原 【 t-PSA】P C R及 重 疊 延 伸 產(chǎn) 物 的 瓊 脂 糖 凝 膠 電 泳 構(gòu)建抗前列腺特異抗原(PSA)單 鏈 抗 體（sc

15、Fv）/人羧肽酶A（hCPA） 融合 基因 總PSA（t-PSA）中80%以結(jié)合形式存在，稱復(fù)合PSA（c-PSA）；20%以游離形式存在，稱游離PSA（f-PSA）；t-PSA及f-PSA升高，而f-PSA/t-PSA比值降低，提示前列腺癌當(dāng)總PSA在3.010.0ng/ml時(shí)，f-PSA/t-PSA比值低于0.190.10時(shí)，前列腺癌的可能性較大第十四頁，共69頁幻燈片生化特性生化特性： 糖蛋白，由兩個(gè)單克隆抗體：糖蛋白，由兩個(gè)單克隆抗體： 1.115D8抗乳脂膜及抗乳脂膜及2.DF3抗乳腺癌抗乳腺癌 細(xì)胞系所證實(shí)細(xì)胞系所證實(shí)分子量：分子量： 115D8： 400，000；DF3290，0

16、00發(fā)生部位：發(fā)生部位： 乳腺癌細(xì)胞和某些上皮細(xì)胞乳腺癌細(xì)胞和某些上皮細(xì)胞參考值范圍：參考值范圍：28U/ml臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 監(jiān)測(cè)乳腺癌療效監(jiān)測(cè)乳腺癌療效影響因素：影響因素： 與與CEA聯(lián)合檢測(cè)聯(lián)合檢測(cè)癌抗原癌抗原15-3 【CA15-3】糖與多肽連接的兩種方式 ？是是1984年由年由Kufer和和Hilkens發(fā)現(xiàn)，是由鼠抗人乳腺癌肝細(xì)胞轉(zhuǎn)移發(fā)現(xiàn)，是由鼠抗人乳腺癌肝細(xì)胞轉(zhuǎn)移株的膜的單克隆抗體株的膜的單克隆抗體DF3制備的制備的第十五頁，共69頁幻燈片生化特性：生化特性： 糖脂糖脂,Lewis()血型決定基半抗原血型決定基半抗原分子量：分子量： 抗原抗原:36,000;粘蛋白粘蛋白:10

17、6D發(fā)生部位：發(fā)生部位： 各種腫瘤各種腫瘤,在胎兒胃腸道上皮細(xì)胞在胎兒胃腸道上皮細(xì)胞,許多許多 粘膜細(xì)胞粘膜細(xì)胞參考值范圍：參考值范圍：37U/ml臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 監(jiān)測(cè)胰腺癌療效監(jiān)測(cè)胰腺癌療效影響因素：影響因素： 結(jié)直腸結(jié)直腸TM的第二選擇的第二選擇糖類抗原糖類抗原19-9 【CA19-9】是是1981年由年由Koprowski從大腸腺癌細(xì)胞系和免疫鼠從大腸腺癌細(xì)胞系和免疫鼠雜交瘤產(chǎn)物分離而成雜交瘤產(chǎn)物分離而成第十六頁，共69頁幻燈片生化特性：生化特性： 糖蛋白糖蛋白,以卵巢癌細(xì)胞系免疫所獲以卵巢癌細(xì)胞系免疫所獲 單克隆抗體所證實(shí)單克隆抗體所證實(shí)分子量：分子量： 200,000發(fā)生部位：

18、發(fā)生部位： 卵巢癌卵巢癌(膜結(jié)合物膜結(jié)合物),胎兒和成人支氣胎兒和成人支氣 管正常上皮細(xì)胞管正常上皮細(xì)胞參考值范圍：參考值范圍：35U/ml (65U/ml)臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 監(jiān)測(cè)卵巢癌病程及療效，透明細(xì)胞癌，子宮內(nèi)膜癌、輸卵監(jiān)測(cè)卵巢癌病程及療效，透明細(xì)胞癌，子宮內(nèi)膜癌、輸卵 管埃及未分化卵巢癌明顯升高管埃及未分化卵巢癌明顯升高影響因素：影響因素： 來源于體腔上皮細(xì)胞衍生物的分化抗原來源于體腔上皮細(xì)胞衍生物的分化抗原(Mller管上皮管上皮),特特 異性低；血清濃度輕微升高正常婦女，以及良性卵巢疾患，異性低；血清濃度輕微升高正常婦女，以及良性卵巢疾患， 懷孕前懷孕前3個(gè)月、行經(jīng)期、肝硬化、

19、子宮纖維變性、急性輸卵個(gè)月、行經(jīng)期、肝硬化、子宮纖維變性、急性輸卵 管炎、胸膜炎和心包感染等也稍高。管炎、胸膜炎和心包感染等也稍高。 糖類抗原糖類抗原125 【 CA125】1981年由年由Bast發(fā)現(xiàn)的由鼠抗人乳頭狀囊性卵巢上皮細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)的由鼠抗人乳頭狀囊性卵巢上皮細(xì)胞系OC125制備而成制備而成第十七頁，共69頁幻燈片生化特性：生化特性： 烯醇化酶二聚體烯醇化酶二聚體分子量：分子量： 87,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞,紅細(xì)胞紅細(xì)胞,血小板血小板參考值范圍：參考值范圍：12.5ng/ml 臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 神經(jīng)元特異性烯醇

20、化酶是小細(xì)胞肺癌神經(jīng)元特異性烯醇化酶是小細(xì)胞肺癌(SCLC)和神經(jīng)母細(xì)胞瘤的腫瘤標(biāo)志物和神經(jīng)母細(xì)胞瘤的腫瘤標(biāo)志物，可用于鑒別診斷、病情監(jiān)測(cè)、療效評(píng)價(jià)和復(fù)發(fā)預(yù)報(bào)。用神經(jīng)元特異性烯醇化酶監(jiān)測(cè)小細(xì)胞肺癌的，可用于鑒別診斷、病情監(jiān)測(cè)、療效評(píng)價(jià)和復(fù)發(fā)預(yù)報(bào)。用神經(jīng)元特異性烯醇化酶監(jiān)測(cè)小細(xì)胞肺癌的復(fù)發(fā)，比臨床確定復(fù)發(fā)要早復(fù)發(fā)，比臨床確定復(fù)發(fā)要早412周。神經(jīng)元特異性烯醇化酶還可用于神經(jīng)母細(xì)胞瘤和周。神經(jīng)元特異性烯醇化酶還可用于神經(jīng)母細(xì)胞瘤和腎母細(xì)胞瘤的鑒別診斷，前者神經(jīng)元特異腎母細(xì)胞瘤的鑒別診斷，前者神經(jīng)元特異性烯醇化酶異常增高而后者增高不明顯。性烯醇化酶異常增高而后者增高不明顯。增高：見于小細(xì)胞肺癌（最敏

21、感最特異的腫瘤標(biāo)增高：見于小細(xì)胞肺癌（最敏感最特異的腫瘤標(biāo)志 物 之 一 ）志 物 之 一 ） 、 神 經(jīng) 母 細(xì) 胞 瘤 、 神 經(jīng) 內(nèi) 分 泌 細(xì) 胞 腫 瘤 （ 如 嗜 鉻 細(xì) 胞、 神 經(jīng) 母 細(xì) 胞 瘤 、 神 經(jīng) 內(nèi) 分 泌 細(xì) 胞 腫 瘤 （ 如 嗜 鉻 細(xì) 胞瘤、胰島細(xì)胞瘤、黑色素瘤）等瘤、胰島細(xì)胞瘤、黑色素瘤）等影響因素：影響因素： 不要將血放置太久，否則將出現(xiàn)假高值；一不要將血放置太久，否則將出現(xiàn)假高值；一 小時(shí)內(nèi)離心；檢測(cè)小時(shí)內(nèi)離心；檢測(cè)SCLC時(shí)，與時(shí)，與CEA聯(lián)合應(yīng)用聯(lián)合應(yīng)用神經(jīng)特異性烯醇化酶神經(jīng)特異性烯醇化酶 【 NSE】第十八頁，共69頁幻燈片生化特性：生化特性：

22、 糖蛋白激素，由兩個(gè)非共價(jià)結(jié)合的亞單糖蛋白激素，由兩個(gè)非共價(jià)結(jié)合的亞單 位組成，位組成，a a ，分子量：分子量： a a：14,000；：24,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 胎盤合體滋養(yǎng)層胎盤合體滋養(yǎng)層,滋養(yǎng)層組織中的胚細(xì)胞滋養(yǎng)層組織中的胚細(xì)胞 腫瘤腫瘤,合體滋養(yǎng)層巨細(xì)胞合體滋養(yǎng)層巨細(xì)胞(精原細(xì)胞來源精原細(xì)胞來源 許多中空器官的上皮細(xì)胞成分許多中空器官的上皮細(xì)胞成分)參考值范圍：參考值范圍：男性男性:05mU/ml 臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 非精原細(xì)胞瘤胚芽細(xì)胞瘤非精原細(xì)胞瘤胚芽細(xì)胞瘤(4886%),睪睪 丸或胎盤絨毛膜腫瘤丸或胎盤絨毛膜腫瘤(100%),胞蟲囊狀胞蟲囊狀 痣痣(97%),精原細(xì)胞

23、瘤精原細(xì)胞瘤(合并腫瘤合并腫瘤)(714%)人絨毛膜促性腺激素人絨毛膜促性腺激素【HCG】RNA的甲醛變性膠電泳結(jié)果，可見清晰的18S、28S兩條帶及其距加樣孔的距離 PCR擴(kuò)增后進(jìn)行PAGE電泳及放射自顯影結(jié)果箭頭所示條帶T26只在絨癌中顯示，在正常絨毛中不顯示 第十九頁，共69頁幻燈片生化特性：生化特性： 增生性抗原增生性抗原,多肽，由多肽，由B1、B2和和C三個(gè)亞基組成，其三個(gè)亞基組成，其 活性主要在活性主要在B1分子量：分子量： 17,00043,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 卵黃囊卵黃囊,胚胎肝胚胎肝參考值范圍：參考值范圍：80U/L臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 膀胱癌？膀胱癌？正常人陽性率正

24、常人陽性率4.7%。但有相當(dāng)一部分非惡性腫瘤患者血清。但有相當(dāng)一部分非惡性腫瘤患者血清中有中有TPA存在，其陽性率約為存在，其陽性率約為14%35%，以下呼吸道、肝及尿路感染者多見，故，以下呼吸道、肝及尿路感染者多見，故TPA亦非腫瘤所特有的標(biāo)志。但亦非腫瘤所特有的標(biāo)志。但在惡性腫瘤者中，在惡性腫瘤者中，TPA的增高往往是持續(xù)性的的增高往往是持續(xù)性的，因此，若進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測(cè)，常常有利于惡性，因此，若進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測(cè)，常常有利于惡性腫瘤與非惡性病變的鑒別腫瘤與非惡性病變的鑒別 影響因素：影響因素： 測(cè)定值測(cè)定值80:膀胱、支氣管、卵巢、胃癌，可能為肝，腎，肺等疾病膀胱、支氣管、卵巢、胃癌，可能為肝，腎

25、，肺等疾病；特異性低；特異性低組織多肽抗原組織多肽抗原【TPA】第二十頁，共69頁幻燈片生化特性：生化特性： 多肽（多肽（32個(gè)氨基酸）個(gè)氨基酸）分子量：分子量： 3,500發(fā)生部位：發(fā)生部位： C細(xì)胞，胸腺也有分泌降鈣素的機(jī)能細(xì)胞，胸腺也有分泌降鈣素的機(jī)能 參考值范圍：參考值范圍： 100pg/ml臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 甲狀腺髓樣癌甲狀腺髓樣癌：此種癌起源于：此種癌起源于甲狀腺甲狀腺濾泡旁細(xì)胞（濾泡旁細(xì)胞（C細(xì)胞），可細(xì)胞），可產(chǎn)生多種生物活性物質(zhì)，其中以降鈣素為主?；颊哐褰碘}素水平高于正常數(shù)十到產(chǎn)生多種生物活性物質(zhì)，其中以降鈣素為主。患者血清降鈣素水平高于正常數(shù)十到數(shù)百倍。如經(jīng)手術(shù)治療，

26、則降鈣素水平恢復(fù)正常數(shù)百倍。如經(jīng)手術(shù)治療，則降鈣素水平恢復(fù)正常影響因素：影響因素： 適用于危險(xiǎn)人群篩查和輔助診斷；適用于危險(xiǎn)人群篩查和輔助診斷；肺小細(xì)胞癌可產(chǎn)生多種激素肺小細(xì)胞癌可產(chǎn)生多種激素，其中包括降鈣素，其中包括降鈣素 降鈣素降鈣素第二十一頁，共69頁幻燈片生化特性：生化特性： 糖蛋白糖蛋白,即由兩個(gè)單克隆抗體所識(shí)別的即由兩個(gè)單克隆抗體所識(shí)別的 TAG72:1:CC49,2:B72-3分子量：分子量： 400,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 上皮細(xì)胞上皮細(xì)胞參考值范圍：參考值范圍： 3U/ml臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 胃癌胃癌,卵巢粘液癌卵巢粘液癌影響因素影響因素: 與與CEA聯(lián)合檢測(cè)胃癌聯(lián)合檢

27、測(cè)胃癌,卵巢癌的卵巢癌的 第二選擇標(biāo)志物第二選擇標(biāo)志物癌抗原癌抗原72-4 【 CA72-4】1989年由年由Gero首先測(cè)定首先測(cè)定第二十二頁，共69頁幻燈片生化特性：生化特性： 與與IgG分子的重鏈和輕鏈的分子的重鏈和輕鏈的C片段同型片段同型,與與 HLA共同片段的部分相同共同片段的部分相同分子量：分子量： 11,800發(fā)生部位：發(fā)生部位： 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞,巨嗜細(xì)胞和一些上皮細(xì)胞表面巨嗜細(xì)胞和一些上皮細(xì)胞表面參考值范圍：參考值范圍：1.22.5mg/l臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 多發(fā)性骨髓瘤多發(fā)性骨髓瘤,非何杰金氏淋巴瘤（非何杰金氏淋巴瘤（NHL）影響因素：影響因素： 在腎臟疾病診斷中也有重要

28、意義在腎臟疾病診斷中也有重要意義 -2-微球蛋白微球蛋白 【 -2-m】第二十三頁，共69頁幻燈片生化特性生化特性： 糖蛋白糖蛋白,腫瘤抗原腫瘤抗原T4分子量：分子量： 48,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 主要存在于子宮頸鱗狀細(xì)胞癌主要存在于子宮頸鱗狀細(xì)胞癌,正常正常 鱗狀上皮鱗狀上皮參考值范圍：參考值范圍：2.5ng/ml臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 監(jiān)測(cè)宮頸、耳、鼻、喉、肺和食管鱗監(jiān)測(cè)宮頸、耳、鼻、喉、肺和食管鱗 狀細(xì)胞癌病程及治療狀細(xì)胞癌病程及治療影響因素：影響因素： 被皮膚或唾液污染后可導(dǎo)致假性高值被皮膚或唾液污染后可導(dǎo)致假性高值鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原 【 SCC】第二十四頁，共6

29、9頁幻燈片生化特性：生化特性： 細(xì)胞角蛋白片段細(xì)胞角蛋白片段19分子量：分子量： 30,000發(fā)生部位：發(fā)生部位： 存在于許多組織中，特別是肺中存在于許多組織中，特別是肺中參考值范圍：參考值范圍： 3.3ng/ml臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 非小細(xì)胞肺癌非小細(xì)胞肺癌影響因素：影響因素： 被唾液污染后可導(dǎo)致假性高值被唾液污染后可導(dǎo)致假性高值細(xì)胞角蛋白組分細(xì)胞角蛋白組分19 【 CYFRA21-1】細(xì)胞角蛋白陽性細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移第二十五頁，共69頁幻燈片糖類抗原糖類抗原50 【CA50】生化特性：生化特性：糖類抗原糖類抗原CA50是一種以唾液酸酯和唾液酸糖蛋白為主是一種以唾液酸酯和唾液酸糖蛋白為主 的腫瘤

30、標(biāo)志物的腫瘤標(biāo)志物參考范圍：參考范圍： 23U/ml臨床意義：臨床意義：糖類抗原糖類抗原CA50是一種非特異性的廣譜腫瘤標(biāo)志物，與癌抗原是一種非特異性的廣譜腫瘤標(biāo)志物，與癌抗原19-9有一定的交叉抗原性，主要用于胰腺癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌的輔助診斷有一定的交叉抗原性，主要用于胰腺癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌的輔助診斷，其中胰腺癌病人增高最明顯。增高：見于胰腺癌（陽性率可達(dá)，其中胰腺癌病人增高最明顯。增高：見于胰腺癌（陽性率可達(dá)87）、結(jié)腸）、結(jié)腸直腸癌、胃癌、肺癌。肝癌。卵巢癌、乳腺癌等惡性腫瘤；潰瘍性結(jié)直腸癌、胃癌、肺癌。肝癌。卵巢癌、乳腺癌等惡性腫瘤；潰瘍性結(jié)腸炎、肝硬化、黑色素瘤、淋巴瘤、自身免疫

31、性疾病等也增高腸炎、肝硬化、黑色素瘤、淋巴瘤、自身免疫性疾病等也增高第二十六頁，共69頁幻燈片糖類抗原糖類抗原242 【 CA242】CA242是一種唾液酸化的新型粘蛋白類糖類腫瘤抗原是一種唾液酸化的新型粘蛋白類糖類腫瘤抗原1993年年P(guān)ujol等采用遲緩銪鑭熒光分析技術(shù)測(cè)定等采用遲緩銪鑭熒光分析技術(shù)測(cè)定102例例NSCLC患者血清患者血清CA242濃度，濃度，CA242血清濃度閾值為血清濃度閾值為20.0U/ml，結(jié)果其敏感性及特異性分，結(jié)果其敏感性及特異性分別為別為28.5%和和95.6%。肺鱗癌患者血清。肺鱗癌患者血清CA242水平顯著低于非鱗癌水平顯著低于非鱗癌(腺癌和腺癌和大細(xì)胞肺癌

32、大細(xì)胞肺癌)患者，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者的患者，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者的CA242濃度高于未轉(zhuǎn)移者，且濃度高于未轉(zhuǎn)移者，且期濃度逐漸增加。從整體角度看，期濃度逐漸增加。從整體角度看，CA242水平與生存不相關(guān)，但是，在水平與生存不相關(guān)，但是，在不能手術(shù)切除的不能手術(shù)切除的NSCLC患者中，患者中，CA242濃度升高患者的生存期較濃度濃度升高患者的生存期較濃度低于低于20U/ml患者顯著短。由于患者顯著短。由于CA242敏感性較低，對(duì)敏感性較低，對(duì)NSCLC的診斷無意的診斷無意義義CA242可作為胰腺癌和結(jié)腸癌校好的腫瘤標(biāo)志物，其靈敏度與可作為胰腺癌和結(jié)腸癌校好的腫瘤標(biāo)志物，其靈敏度與CA19-9相仿相仿，但特

33、異性、診斷效率則優(yōu)于，但特異性、診斷效率則優(yōu)于CA19-9參考值：參考值： 25U/ml第二十七頁，共69頁幻燈片CA549也是乳腺癌的標(biāo)志物，它是一種酸性也是乳腺癌的標(biāo)志物，它是一種酸性 糖蛋白糖蛋白大部分健康女性大部分健康女性11 UmL異常升高者比例并不高，可見于異常升高者比例并不高，可見于50%乳腺乳腺 癌、卵巢癌、癌、卵巢癌、40%前列腺癌、前列腺癌、33%肺癌患肺癌患 者。由此，作為乳腺癌的早期診斷，者。由此，作為乳腺癌的早期診斷，CA則則 還較欠缺，應(yīng)聯(lián)合應(yīng)用其它還較欠缺，應(yīng)聯(lián)合應(yīng)用其它TM糖類抗原糖類抗原594【CA549】第二十八頁，共69頁幻燈片血清堿性磷酸酶血清堿性磷酸酶

34、【ALP 或AKP 】是一組底物特異性較低，在堿性環(huán)境中能水解很多磷酸單酯化合物的酶是一組底物特異性較低，在堿性環(huán)境中能水解很多磷酸單酯化合物的酶AFP在器官組織的含量：在器官組織的含量：肝腎胎盤小腸骨磷酸對(duì)硝基酚磷酸對(duì)硝基酚（底物）2-氨基氨基-2-甲基甲基-1-丙酮丙酮（受體）+ALP對(duì)硝基酚對(duì)硝基酚+堿性溶液堿性溶液405nm變黃色，連續(xù)監(jiān)測(cè)法參考值：女性：參考值：女性：112歲歲500U/L；15歲，歲，40150U/L 男性：男性：112歲歲500U/L；1215歲，歲，750U/L 15歲，歲，40150U/LAFP活力測(cè)定常作為肝膽疾病和骨骼疾病的臨床輔助診斷指標(biāo)。活力測(cè)定常作為

35、肝膽疾病和骨骼疾病的臨床輔助診斷指標(biāo)。升高：骨升高：骨Paget病、膽道梗阻、病、膽道梗阻、惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移或肝轉(zhuǎn)移惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移或肝轉(zhuǎn)移、佝僂病、骨軟化、佝僂病、骨軟化、成骨細(xì)胞成骨細(xì)胞瘤瘤、甲狀旁腺功能亢進(jìn)及骨折愈合期、甲狀旁腺功能亢進(jìn)及骨折愈合期降低：少見，呆小癥、磷酸酶過少癥、維生素降低：少見，呆小癥、磷酸酶過少癥、維生素C缺乏癥。甲功低下、惡性貧血缺乏癥。甲功低下、惡性貧血臨床意義臨床意義第二十九頁，共69頁幻燈片阻塞性黃疸、肝硬化、肝壞死，堿性磷酸酶明顯升高（肝細(xì)胞性黃疸則升高阻塞性黃疸、肝硬化、肝壞死，堿性磷酸酶明顯升高（肝細(xì)胞性黃疸則升高不明顯）不明顯） 原發(fā)性和繼發(fā)性肝癌時(shí)堿性

36、磷酸酶亦明顯升高，與癌組織中或癌腫周原發(fā)性和繼發(fā)性肝癌時(shí)堿性磷酸酶亦明顯升高，與癌組織中或癌腫周圍肝細(xì)胞合成堿性磷酸酶增加有關(guān)圍肝細(xì)胞合成堿性磷酸酶增加有關(guān)其他腫瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨細(xì)胞瘤、骨肉瘤等，堿性磷酸酶增高時(shí)，其他腫瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨細(xì)胞瘤、骨肉瘤等，堿性磷酸酶增高時(shí)，提示可能有肝臟轉(zhuǎn)移提示可能有肝臟轉(zhuǎn)移 變形性骨炎、成骨細(xì)胞癌、佝僂病、骨軟化、甲狀腺及甲狀旁腺功能亢進(jìn)、腎小變形性骨炎、成骨細(xì)胞癌、佝僂病、骨軟化、甲狀腺及甲狀旁腺功能亢進(jìn)、腎小管性酸中毒、遺傳性磷酸酶過多癥管性酸中毒、遺傳性磷酸酶過多癥 很多藥物可使堿性磷酸酶增高，如巴比妥類、抗生素（紅霉素、慶大霉素

37、、氯霉很多藥物可使堿性磷酸酶增高，如巴比妥類、抗生素（紅霉素、慶大霉素、氯霉素、卡那霉素、氨芐青霉素等素、卡那霉素、氨芐青霉素等 常見于重癥慢性腎炎、乳糜瀉、貧血、惡病質(zhì)、兒童甲狀腺功能不全或減退、維常見于重癥慢性腎炎、乳糜瀉、貧血、惡病質(zhì)、兒童甲狀腺功能不全或減退、維生素生素C缺乏癥壞血病）。營養(yǎng)不良、呆小癥、遺傳性低磷酸酶血癥。缺乏癥壞血?。I養(yǎng)不良、呆小癥、遺傳性低磷酸酶血癥。 增增 高高減減 低低血清堿性磷酸酶血清堿性磷酸酶【ALP 或AKP 】第三十頁，共69頁幻燈片酸性磷酸酶測(cè)定酸性磷酸酶測(cè)定【ACP】磷酸麝香草酚酞（YMP）ACP麝香草酚酞 + 無機(jī)磷堿液終止反應(yīng)麝香草酚酞 呈

38、藍(lán)色595nm-磷酸萘胺磷酸萘胺 ACP 酸性條件-萘胺萘胺 + 磷酸磷酸固紅TR鹽重氮化合物重氮化合物總酸性磷酸酶活性總酸性磷酸酶活性非前列腺酸性磷酸酶活性非前列腺酸性磷酸酶活性=前列腺酸性磷酸酶活性前列腺酸性磷酸酶活性酒石酸抑制405nm參考值：成人總酶活性為參考值：成人總酶活性為09U/L，前列腺酸性磷酸酶活性為，前列腺酸性磷酸酶活性為03U/LACP含量無性別差異，新生兒出生后含量無性別差異，新生兒出生后1個(gè)月血清酶活性甚高，隨年齡增長而逐漸下降；個(gè)月血清酶活性甚高，隨年齡增長而逐漸下降；青春期又可出現(xiàn)一活性峰值，至青春期又可出現(xiàn)一活性峰值，至20歲降至成人水平歲降至成人水平ACP主要

39、用于前列腺癌的輔助診斷及療效觀察指標(biāo)，特別是轉(zhuǎn)移時(shí)，血清主要用于前列腺癌的輔助診斷及療效觀察指標(biāo)，特別是轉(zhuǎn)移時(shí)，血清ACP可明可明顯增高顯增高溶血性疾病、變形性骨炎、急性尿潴留及近期做過直腸檢查者，此酶也可增高溶血性疾病、變形性骨炎、急性尿潴留及近期做過直腸檢查者，此酶也可增高臨床意義臨床意義第三十一頁，共69頁幻燈片P53蛋白是一種由蛋白是一種由393個(gè)氨基酸組成的含磷蛋白，位于細(xì)胞核。研個(gè)氨基酸組成的含磷蛋白，位于細(xì)胞核。研究發(fā)現(xiàn)在癌旁正常和鱗狀化生的支氣管上皮未見究發(fā)現(xiàn)在癌旁正常和鱗狀化生的支氣管上皮未見P53蛋白表達(dá)，蛋白表達(dá)，在在輕輕中中重度不典型增生、原位癌、浸潤癌中，重度不典型增

40、生、原位癌、浸潤癌中，P53蛋白表達(dá)的陽性蛋白表達(dá)的陽性率逐漸升高，表明率逐漸升高，表明P53基因與肺癌發(fā)基因與肺癌發(fā)生有關(guān)生有關(guān)對(duì)對(duì)P53基因的不同類型腫瘤中突變頻率檢測(cè)結(jié)果，鱗癌為基因的不同類型腫瘤中突變頻率檢測(cè)結(jié)果，鱗癌為63.6%，腺癌，腺癌為為65%，發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)P53蛋白在不同分化程度肺癌組織之間無顯著性差異，但蛋白在不同分化程度肺癌組織之間無顯著性差異，但在肺鱗癌組織中隨分化程度降低在肺鱗癌組織中隨分化程度降低P53表達(dá)卻增強(qiáng)，認(rèn)為表達(dá)卻增強(qiáng)，認(rèn)為P53蛋白與肺蛋白與肺鱗癌的關(guān)系可能較肺腺癌更為密切鱗癌的關(guān)系可能較肺腺癌更為密切。而且在肺鱗癌伴有和不伴。而且在肺鱗癌伴有和不伴有淋巴

41、結(jié)轉(zhuǎn)移病例中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例中，P53表達(dá)無顯著性差異，而肺腺癌中伴有表達(dá)無顯著性差異，而肺腺癌中伴有與不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者與不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者P53表達(dá)具有顯著性差異，提示表達(dá)具有顯著性差異，提示P53過度表過度表達(dá)與肺腺癌淋達(dá)與肺腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)P53蛋白蛋白鱗癌鱗癌P53細(xì)胞核陽性細(xì)胞核陽性第三十二頁，共69頁幻燈片bcl-2蛋白是原癌基因蛋白是原癌基因bcl-2編碼的一種能調(diào)節(jié)細(xì)胞死亡而不影響細(xì)編碼的一種能調(diào)節(jié)細(xì)胞死亡而不影響細(xì)胞增殖的蛋白質(zhì)，胞增殖的蛋白質(zhì)，1993年年P(guān)ezzella等研究等研究bcl-2在在NSCLC患者中的患者中的表達(dá)與預(yù)后之間的關(guān)系。該實(shí)驗(yàn)采用表

42、達(dá)與預(yù)后之間的關(guān)系。該實(shí)驗(yàn)采用bcl-2特異性單克隆抗體及免疫特異性單克隆抗體及免疫組化染色測(cè)定組化染色測(cè)定80例肺鱗癌及例肺鱗癌及42例肺腺癌患者腫瘤組織中例肺腺癌患者腫瘤組織中bcl-2蛋白。蛋白。結(jié)果結(jié)果25%(20/80)的鱗癌患者及的鱗癌患者及12%(5/42)的腺癌患者的腺癌患者bcl-2蛋白陽性蛋白陽性，在鄰近的正常呼吸道上皮中，在鄰近的正常呼吸道上皮中，bcl-2蛋白僅存在于基底細(xì)胞。蛋白僅存在于基底細(xì)胞。bcl-2蛋白蛋白陽性患者的陽性患者的5年生存率高于陰性患者年生存率高于陰性患者(P0.1)，年齡為，年齡為60歲或歲或60歲以上歲以上bcl-2蛋白陽性患者的預(yù)后最好蛋白陽

43、性患者的預(yù)后最好(P0.02)。該研究表明，原癌基因。該研究表明，原癌基因bcl-2在肺癌患者中發(fā)生異常表達(dá)，其表達(dá)與預(yù)后有一定關(guān)系在肺癌患者中發(fā)生異常表達(dá)，其表達(dá)與預(yù)后有一定關(guān)系原癌基因原癌基因bcl-2蛋白蛋白第三十三頁，共69頁幻燈片腫瘤標(biāo)志物的組合應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物的組合應(yīng)用-標(biāo)志標(biāo)志 CEA ARP CA19-9 CA72-4 CA125 CA15-3 SCC HCG 腫瘤腫瘤結(jié)腸結(jié)腸 胰腺胰腺 胃胃 食道食道 肝臟肝臟 膽囊膽囊 乳腺乳腺 卵巢卵巢 子宮頸子宮頸 絨毛膜絨毛膜 第三十四頁，共69頁幻燈片腫瘤標(biāo)志物的組合應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物的組合應(yīng)用-標(biāo)志標(biāo)志 CEA ARP NSE SCC

44、CYFRA21-1 HCG PSA TPA Calcitonin HTG 腫瘤腫瘤肺（肺（SCLC） 肺（肺（NSCLS） 胚胎細(xì)胞胚胎細(xì)胞 前列腺前列腺 膀胱膀胱 甲狀腺甲狀腺 C-細(xì)胞細(xì)胞 耳鼻咽喉耳鼻咽喉 第三十五頁，共69頁幻燈片臨床檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物試驗(yàn)方法進(jìn)展臨床檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物試驗(yàn)方法進(jìn)展單相瓊脂擴(kuò)散法單相瓊脂擴(kuò)散法雙相瓊脂擴(kuò)散法雙相瓊脂擴(kuò)散法血凝法血凝法對(duì)流電泳法對(duì)流電泳法火箭電泳法火箭電泳法放射免疫法放射免疫法（RIA）免疫放射法免疫放射法（IRMA） ELISA法法斑點(diǎn)法斑點(diǎn)法金標(biāo)法金標(biāo)法熒光免疫法熒光免疫法化學(xué)發(fā)光法化學(xué)發(fā)光法（CLIA）電化學(xué)發(fā)光法電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）分

45、子生物學(xué)分子生物學(xué)第三十六頁，共69頁幻燈片雙相瓊脂擴(kuò)散法雙相瓊脂擴(kuò)散法單相瓊脂擴(kuò)散法單相瓊脂擴(kuò)散法抗體與凝膠混合抗體與凝膠混合后，裝于小玻璃管中，待凝后，裝于小玻璃管中，待凝固后固后加入抗原加入抗原溶液，使其擴(kuò)散入凝膠與抗體反溶液，使其擴(kuò)散入凝膠與抗體反應(yīng)形成環(huán)狀乳白色沉淀帶應(yīng)形成環(huán)狀乳白色沉淀帶 一種抗原或抗體混合物成分的定性與定量的分析方一種抗原或抗體混合物成分的定性與定量的分析方法法。通常采用。通常采用凝膠作為支持介質(zhì)凝膠作為支持介質(zhì)，讓抗原與，讓抗原與抗體混合物在介質(zhì)中互相擴(kuò)散，相互反應(yīng)抗體混合物在介質(zhì)中互相擴(kuò)散，相互反應(yīng)形 成 沉 淀 弧 線 或 沉 淀 弧 帶形 成 沉 淀 弧

46、線 或 沉 淀 弧 帶 第三十七頁，共69頁幻燈片血凝法血凝法細(xì)菌和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，當(dāng)與細(xì)菌和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，當(dāng)與相應(yīng)抗體特異結(jié)合后，在適量電解相應(yīng)抗體特異結(jié)合后，在適量電解質(zhì)存在的條件下，可逐漸聚集，出質(zhì)存在的條件下，可逐漸聚集，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象稱為凝集反現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象稱為凝集反應(yīng)應(yīng)。反應(yīng)中的抗原稱為凝集原（。反應(yīng)中的抗原稱為凝集原（agglutinogen），抗體稱為凝集素），抗體稱為凝集素（agglutinin）根據(jù)凝集反應(yīng)的原理，以后又發(fā)展建根據(jù)凝集反應(yīng)的原理，以后又發(fā)展建立了，各種間接凝集試驗(yàn)、間接凝集立了，各種間接凝集試驗(yàn)、間接凝集抑制試驗(yàn)以及固相免疫吸附血凝試

47、驗(yàn)抑制試驗(yàn)以及固相免疫吸附血凝試驗(yàn)等新方法等新方法第三十八頁，共69頁幻燈片 膠乳微粒免疫檢測(cè)技術(shù)膠乳微粒免疫檢測(cè)技術(shù)是在膠乳凝集定性試驗(yàn)基礎(chǔ)上發(fā)展是在膠乳凝集定性試驗(yàn)基礎(chǔ)上發(fā)展建立的建立的-種非放射性均相免疫測(cè)定法種非放射性均相免疫測(cè)定法，可以，可以對(duì)各種微量的抗原物質(zhì)和小分子對(duì)各種微量的抗原物質(zhì)和小分子半抗原半抗原(加藥物、團(tuán)體激素等加藥物、團(tuán)體激素等)進(jìn)行精進(jìn)行精確的定量測(cè)定確的定量測(cè)定。根據(jù)特異性抗體致。根據(jù)特異性抗體致敏的膠乳微粒敏的膠乳微粒(一般為一般為直徑約直徑約1m的聚苯乙烯膠乳的聚苯乙烯膠乳)，與待測(cè)標(biāo)本中的，與待測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗原相遇時(shí)發(fā)生凝集反應(yīng)，膠乳相應(yīng)抗原相遇時(shí)發(fā)生凝

48、集反應(yīng)，膠乳凝集程度與被測(cè)物的濃度呈函數(shù)關(guān)系凝集程度與被測(cè)物的濃度呈函數(shù)關(guān)系，由此可測(cè)出標(biāo)本中待測(cè)物的含量。，由此可測(cè)出標(biāo)本中待測(cè)物的含量。測(cè)定方法主要有粒子測(cè)定方法主要有粒子計(jì)數(shù)法和濁度法兩種計(jì)數(shù)法和濁度法兩種 第三十九頁，共69頁幻燈片 對(duì)流免疫電泳對(duì)流免疫電泳(counter immunoelectrophoresis, CIEP) 是將是將雙向免疫擴(kuò)散與電泳相結(jié)合的一種技術(shù)。在雙向免疫擴(kuò)散與電泳相結(jié)合的一種技術(shù)。在pH8.6的緩沖液中，蛋白質(zhì)的緩沖液中，蛋白質(zhì)抗原帶負(fù)電荷向正極抗原帶負(fù)電荷向正極泳動(dòng)泳動(dòng)；而；而抗體抗體大部分屬于大部分屬于Ig，由于分子量大，暴露，由于分子量大，暴露的極

49、性基團(tuán)較少，在離子瓊脂中泳動(dòng)緩慢，同時(shí)的極性基團(tuán)較少，在離子瓊脂中泳動(dòng)緩慢，同時(shí)受電受電滲作用的影響向負(fù)極泳動(dòng)滲作用的影響向負(fù)極泳動(dòng) (電滲是指在電場(chǎng)中液體電滲是指在電場(chǎng)中液體對(duì)于一個(gè)固定固體的相對(duì)移動(dòng)。對(duì)于一個(gè)固定固體的相對(duì)移動(dòng)。瓊脂瓊脂是一種酸性是一種酸性物質(zhì)，在堿性溶液中物質(zhì)，在堿性溶液中帶負(fù)電荷帶負(fù)電荷，而，而與它接觸的溶液與它接觸的溶液帶正電荷，因此液體向負(fù)極泳動(dòng)帶正電荷，因此液體向負(fù)極泳動(dòng)，產(chǎn)生電滲產(chǎn)生電滲) 在在抗原抗體相遇的最適比例處形成乳白色沉抗原抗體相遇的最適比例處形成乳白色沉淀線淀線。由于電場(chǎng)的作用，限制了抗原、抗體的。由于電場(chǎng)的作用，限制了抗原、抗體的自由擴(kuò)散，而使其定

50、向泳動(dòng)，因而增加了試驗(yàn)自由擴(kuò)散，而使其定向泳動(dòng)，因而增加了試驗(yàn)的靈敏度，并縮短反應(yīng)時(shí)間。此法操作簡便，的靈敏度，并縮短反應(yīng)時(shí)間。此法操作簡便，僅需僅需3060分鐘，靈敏度比雙向擴(kuò)散高分鐘，靈敏度比雙向擴(kuò)散高1015倍倍；但缺點(diǎn)是特異性；但缺點(diǎn)是特異性不如雙向瓊脂擴(kuò)散高不如雙向瓊脂擴(kuò)散高 第四十頁，共69頁幻燈片 火箭免疫電泳火箭免疫電泳(rocketimmunoelectrophoresis，RIEP)是將單向免疫擴(kuò)散和電泳相結(jié)合的是將單向免疫擴(kuò)散和電泳相結(jié)合的一種定量檢測(cè)技術(shù)。電泳時(shí)，含于瓊脂凝一種定量檢測(cè)技術(shù)。電泳時(shí)，含于瓊脂凝膠中的抗體不發(fā)生移動(dòng)，而在電場(chǎng)的作用膠中的抗體不發(fā)生移動(dòng)，而在

51、電場(chǎng)的作用下促使樣品中的抗原向正極泳動(dòng)。當(dāng)下促使樣品中的抗原向正極泳動(dòng)。當(dāng)抗原抗原與抗體分子達(dá)到適當(dāng)比例時(shí)，形成一個(gè)與抗體分子達(dá)到適當(dāng)比例時(shí)，形成一個(gè)形狀如火箭的不溶性免疫復(fù)合物沉淀峰形狀如火箭的不溶性免疫復(fù)合物沉淀峰，峰的高度與撿樣中的抗原濃度呈正相關(guān)峰的高度與撿樣中的抗原濃度呈正相關(guān)。因此，當(dāng)瓊脂中抗體濃度固定時(shí)，以不同因此，當(dāng)瓊脂中抗體濃度固定時(shí)，以不同稀釋度標(biāo)準(zhǔn)抗原泳動(dòng)后形成的沉淀峰為縱稀釋度標(biāo)準(zhǔn)抗原泳動(dòng)后形成的沉淀峰為縱坐標(biāo)，抗原濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線坐標(biāo)，抗原濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的沉淀峰長度即可計(jì)算出待測(cè)。根據(jù)樣品的沉淀峰長度即可計(jì)算出待測(cè)抗原的含量；反之，當(dāng)瓊

52、脂中抗原濃度固抗原的含量；反之，當(dāng)瓊脂中抗原濃度固定時(shí)，便可測(cè)定待測(cè)抗體的含量定時(shí)，便可測(cè)定待測(cè)抗體的含量(即反向即反向火箭免疫電泳火箭免疫電泳) 第四十一頁，共69頁幻燈片競爭法競爭法雙抗體夾心法雙抗體夾心法間接法間接法 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)1971年瑞典學(xué)者年瑞典學(xué)者Engvail和和Perlmannn,荷蘭學(xué)者荷蘭學(xué)者Van Weerman和和Schuurs分別報(bào)道將免疫技術(shù)發(fā)展分別報(bào)道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測(cè)體液中微量物質(zhì)的固相免疫測(cè)定方法，稱為檢測(cè)體液中微量物質(zhì)的固相免疫測(cè)定方法，稱為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))。最初發(fā)展的免疫酶測(cè)定方。最初發(fā)展的免疫酶測(cè)定方法。是使

53、酶與抗體或抗原結(jié)合，用以檢查組織中法。是使酶與抗體或抗原結(jié)合，用以檢查組織中相應(yīng)的抗原或抗體的存在。后來發(fā)展為相應(yīng)的抗原或抗體的存在。后來發(fā)展為將抗原或?qū)⒖乖蚩贵w吸附于固相載體，在載體上進(jìn)行免疫酶染色抗體吸附于固相載體，在載體上進(jìn)行免疫酶染色，底物顯色后用肉眼或分光光度計(jì)判定結(jié)果，底物顯色后用肉眼或分光光度計(jì)判定結(jié)果。這種。這種技 術(shù) 就 是 目 前 應(yīng) 用 最 廣 的 酶 聯(lián) 免 疫 吸技 術(shù) 就 是 目 前 應(yīng) 用 最 廣 的 酶 聯(lián) 免 疫 吸附試驗(yàn)，俗稱附試驗(yàn)，俗稱ELISA (enzyme linked immunosorbant assay) 第四十二頁，共69頁幻燈片 免疫印跡

54、技術(shù)免疫印跡技術(shù)免疫印跡免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)又稱蛋白質(zhì)印跡印跡(Western blotting)，是一種，是一種借借助特異性抗體鑒定抗原的有效方法助特異性抗體鑒定抗原的有效方法。該。該法是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)法是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。將含有目標(biāo)蛋白技術(shù)。將含有目標(biāo)蛋白(抗原抗原)的樣品的樣品首先用首先用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)或非變性電泳或非變性電泳(Native-PAGE)等分離后，通過轉(zhuǎn)移電泳原位轉(zhuǎn)印等分離后，通過轉(zhuǎn)移電泳原位轉(zhuǎn)印至硝酸

55、纖維素膜或其它膜的表面，然后將至硝酸纖維素膜或其它膜的表面，然后將膜 表 面 的 蛋 白 質(zhì) 再 用 抗 原 抗 體 反 應(yīng)膜 表 面 的 蛋 白 質(zhì) 再 用 抗 原 抗 體 反 應(yīng)進(jìn)行特異性檢測(cè)進(jìn)行特異性檢測(cè)第四十三頁，共69頁幻燈片 免疫微粒技術(shù)免疫微粒技術(shù)是利用高分子材料合成一定粒度大小的固相微粒作為是利用高分子材料合成一定粒度大小的固相微粒作為載體，包被上具有特異性親和力的各種免疫活性物質(zhì)載體，包被上具有特異性親和力的各種免疫活性物質(zhì)(抗原或抗體抗原或抗體)，使其致敏為免疫微粒，用于免疫，使其致敏為免疫微粒，用于免疫學(xué)及其他生物學(xué)檢測(cè)與分離的一項(xiàng)技術(shù)。作學(xué)及其他生物學(xué)檢測(cè)與分離的一項(xiàng)技

56、術(shù)。作為載體的微粒通常是以某種高分子有機(jī)單體為載體的微粒通常是以某種高分子有機(jī)單體為原料，經(jīng)過乳液聚合、懸浮聚合及輻照聚為原料，經(jīng)過乳液聚合、懸浮聚合及輻照聚合等高分子聚合方法制備而成。由于制備材合等高分子聚合方法制備而成。由于制備材料及工藝不同，微粒的種類繁多，現(xiàn)已制成料及工藝不同，微粒的種類繁多，現(xiàn)已制成惰性微粒惰性微粒如聚苯乙烯膠乳微粒、如聚苯乙烯膠乳微粒、活性微粒活性微粒如羧化聚如羧化聚苯乙烯微粒、苯乙烯微粒、磁性微粒磁性微粒及及標(biāo)記微粒標(biāo)記微粒(用同位素、熒用同位素、熒光素或酶標(biāo)記光素或酶標(biāo)記)等四大類微粒，數(shù)量多達(dá)幾十種。將等四大類微粒，數(shù)量多達(dá)幾十種。將制備好的微粒與抗原制備好的

57、微粒與抗原(或抗體或抗體)經(jīng)物理吸附、化學(xué)偶經(jīng)物理吸附、化學(xué)偶聯(lián)及生物素親合親橋聯(lián)法等致敏方法形成免疫微粒聯(lián)及生物素親合親橋聯(lián)法等致敏方法形成免疫微粒。廣泛。廣泛應(yīng)用于各種可溶性大分子物質(zhì)的檢測(cè)、分離應(yīng)用于各種可溶性大分子物質(zhì)的檢測(cè)、分離與純化、細(xì)胞標(biāo)記與識(shí)別與純化、細(xì)胞標(biāo)記與識(shí)別等。近年來，等。近年來，微粒技術(shù)微粒技術(shù)在核酸分子雜交、在核酸分子雜交、DNA與與RNA的分離及的分離及PCR等研等研究領(lǐng)域究領(lǐng)域亦顯示出廣闊的應(yīng)用前景亦顯示出廣闊的應(yīng)用前景 第四十四頁，共69頁幻燈片 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)是是采用熒光素標(biāo)記的已知抗體采用熒光素標(biāo)記的已知抗體(或或抗原抗原)作為探

58、針，檢測(cè)待測(cè)組織、細(xì)作為探針，檢測(cè)待測(cè)組織、細(xì)胞標(biāo)本中的靶抗原胞標(biāo)本中的靶抗原(或抗體或抗體)，形，形成的抗原抗體復(fù)合物帶有熒光成的抗原抗體復(fù)合物帶有熒光素，在熒光顯微鏡下，由于受素，在熒光顯微鏡下，由于受高壓汞燈光源的紫外光照射，高壓汞燈光源的紫外光照射，熒光素發(fā)出明亮的熒光，這樣熒光素發(fā)出明亮的熒光，這樣就可以分辨出抗原就可以分辨出抗原(或抗體或抗體)的所的所在位置及其性質(zhì)，并可利用熒光在位置及其性質(zhì)，并可利用熒光定量技術(shù)計(jì)算抗原的含量，以達(dá)定量技術(shù)計(jì)算抗原的含量，以達(dá)到對(duì)抗原物質(zhì)定位、定性和定量到對(duì)抗原物質(zhì)定位、定性和定量測(cè)定的目的測(cè)定的目的第四十五頁，共69頁幻燈片 免疫組織化學(xué)技術(shù)免

59、疫組織化學(xué)技術(shù)又稱免疫細(xì)胞化學(xué)，是指帶顯色劑標(biāo)記的特又稱免疫細(xì)胞化學(xué)，是指帶顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反應(yīng)異性抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位、定量測(cè)定的一項(xiàng)新技術(shù)性、定位、定量測(cè)定的一項(xiàng)新技術(shù)。把免。把免疫反應(yīng)的特異性、組織化學(xué)的可見性巧妙疫反應(yīng)的特異性、組織化學(xué)的可見性巧妙地結(jié)合起來，借助顯微鏡地結(jié)合起來，借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像和放大作用，在細(xì)胞、亞的顯像和放大作用，在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平檢測(cè)各種抗原物質(zhì)細(xì)胞水平檢測(cè)各種抗原物質(zhì)(如蛋白質(zhì)

60、、多肽如蛋白質(zhì)、多肽、酶、激素、病原體以及受體等、酶、激素、病原體以及受體等) 。全過。全過程包括：程包括：抗原的提取與純化；抗原的提取與純化； 免疫動(dòng)物免疫動(dòng)物或細(xì)胞融合，制備特異性抗體以及抗體的純化或細(xì)胞融合，制備特異性抗體以及抗體的純化； 將顯色劑與抗體結(jié)合形成標(biāo)記抗體；將顯色劑與抗體結(jié)合形成標(biāo)記抗體； 標(biāo)標(biāo)本的制備；本的制備； 免疫細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)以及呈色反免疫細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)以及呈色反應(yīng)；應(yīng)； 觀察結(jié)果觀察結(jié)果 第四十六頁，共69頁幻燈片 免疫電鏡技術(shù)免疫電鏡技術(shù)( I m m u n e e l e c t r o n microscopy，IEM)是將抗原是將抗原抗體反應(yīng)的特異性與電子顯