標本溶血對ELISA檢測乙肝表面抗原的影響

1、標本溶血對ELISA檢測乙肝表面抗原的影響【關(guān)鍵詞】 乙肝 在臨床檢測中，常常遇到溶血的標本。溶血對ELISA檢測乙肝表面抗原（HBsAg）究竟是否有影響，各文獻報道很不一致，本文對標本溶血的原因及其對ELISA檢測乙肝表面抗原的影響進行簡要的討論。1 標本溶血的原因溶血是臨床檢驗中最常見的一種干擾和影響因素。溶血可分為體內(nèi)溶血和體外溶血 1 。體內(nèi)溶血可由物理因素（如人工心臟瓣膜或大血管手術(shù)后）、化學因素（如惡性瘧）和藥物毒性反應等因素引起。體外溶血可由物理因素（抽血時負壓過大、水浴溫度過高、冰凍、振蕩等機械性破壞）、化學因素（血樣接觸表面活性劑）和代謝因素（如遺傳病引起紅細胞脆性增加）引起

2、。在臨床上常見的引起標本溶血的原因包括 2 :由于病人嚴重脫水、低血容量休克等原因?qū)е麓┐汤щy造成的溶血;由于抽血器具質(zhì)量不合格如真空管負壓不夠或塑料試管質(zhì)量較差導致的溶血;用干燥管采血為了盡快分離血清用竹簽攪拌不當引起的溶血等。2 標本溶血對乙肝表面抗原檢測的影響一些研究沒有發(fā)現(xiàn)標本溶血對HBsAg檢測的影響。李穗芬 3 對20例HBsAg陰性和10例HBsAg陽性病人的溶血和非溶血標本包括10例OD值在臨界值附近的標本進行了對照，結(jié)果非溶血和溶血標本的陰、陽性結(jié)果完全一致。20例HBsAg陰性和10例OD值在臨界值附近的樣本，溶血與對應非溶血標本OD值間差異沒有顯著性;10例HBsAg陽性

3、樣品，溶血標本OD值明顯大于對應非溶血標本OD值。因此得出結(jié)論，標本溶血不影響HBsAg結(jié)果的判定，只是使HBsAg陽性標本的OD值提高。許斌等 4 對HBsAg強陽性樣品的非溶血與溶血（Hb濃度為241g/L）標本的A值作了對照后未發(fā)現(xiàn)兩者有統(tǒng)計學差異，得出結(jié)論:溶血對HBsAg的檢測沒有影響（嚴格意義上應表述為:溶血對HBsAg強陽性標本的檢測沒有影響）。單桂秋等 5 的研究也顯示，HBsAg陽性樣品的非溶血與溶血標本的A值間經(jīng)t檢驗差異無顯著性。其他的一些研究則發(fā)現(xiàn)，溶血對HBsAg的檢測有影響。錢厚明等 6 發(fā)現(xiàn)，在17例溶血標本中，初檢的5例HBsAg陽性標本，經(jīng)重新抽血復檢后有2例

4、仍為陽性，另3例轉(zhuǎn)陰。認為是溶血導致了假陽性的出現(xiàn)。劉玉振等 7 研究發(fā)現(xiàn)，溶血對HBsAg的檢測有影響，當紅細胞濃度>25%造成的溶血可導致假陽性。龍憲和等 8 研究發(fā)現(xiàn)，無論在健康人還是乙肝病毒感染者中，溶血均導致了ELISA一步法檢測HBsAg假陽性結(jié)果的出現(xiàn)，而采用二步法則可以保證結(jié)果判讀無誤。3 標本溶血對乙肝表面抗原檢測影響的可能機制溶血是由于各種原因造成紅細胞破壞，胞內(nèi)血紅蛋白（Hb）等物質(zhì)和細胞內(nèi)液進入血清。溶血對ELISA的影響主要是反應孔對溶血血清中Hb的非特異性吸附和溶血時細胞內(nèi)液對血清的稀釋作用。單桂秋等 5 的實驗也證明了溶 血對血清具有稀釋作用。 在E

5、LISA試驗中，酶標反應板孔包被物的濃度是一個相對定值，抗原抗體反應存在最適比例和后帶現(xiàn)象，因此，HBsAg濃度與A值只是在一定的范圍內(nèi)呈一定的線性關(guān)系;當HBsAg達到一定濃度時A值的變化進入平臺期;當HBsAg濃度太高時，A值反而會降低。因此，溶血可以使HBsAg濃度很高的樣品的A值升高（在一定程度上解決了后帶現(xiàn)象）;當HBsAg濃度與A值呈線性關(guān)系時才會因溶血的稀釋作用使A值下降;當HBsAg濃度近臨界值時，可能造成假陰性。Hb具有類過氧化物酶活性，其作用與辣根過氧化物酶類似，如果反應孔非特異吸附Hb而殘留，則可催化底物顯色，使本底A值升高甚至造成假陽性。如果洗滌質(zhì)量好，則可能大大減少或

6、排除非特異性吸附的干擾。單桂秋等 5 的實驗未體現(xiàn)血中Hb非特異性吸附的影響。龍憲和等 8 采用二步法操作可以排除溶血釋出的Hb對HBsAg檢測的影響也說明洗板質(zhì)量在ELISA檢測中的重要性。總之，溶血對ELISA檢測HBsAg有一定的影響，影響的性質(zhì)及其大小因所使用的試劑、測定方法、標本HBsAg的有無及濃度高低、洗板的質(zhì)量好壞而異。參考文獻1 靳敏.溶血對臨床生化檢驗影響的探討.廣西醫(yī)學，2002，24（9）:1363-1364.2 張小潔，劉建芝.真空采血標本溶血原因分析及預防措施.護士進修雜志，2001，16（3）:180.3 李穗芬.標本溶血對乙肝表面抗原檢測的影響.廣州醫(yī)藥，2001，32（5）:65.4 許斌，朱虎定.ELISA檢測HBsAg影響因素的探討.臨床檢驗雜志，2000，18（4）:232.5 單桂秋，蘇建婷.溶血及脂濁樣品對ELISA檢測乙肝表面抗原的影響.臨床檢驗雜志，1999，17（2）:102-103.6 錢厚明，趙江燕，張燕.應重視ELISA檢測HBsAg灰區(qū)范圍內(nèi)樣品的復檢.上海醫(yī)學檢驗雜志，2002，17（3）:156.7 劉玉振，張淑琴，馬宏偉.溶血對抗-HCV、