分解尿素的細菌的分離與計數(shù)

1、糅釋 夠 -10 g 土壤樣品ft選細荊 迭擇圖甲課題：土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù) 學號姓名：編寫人：審核人：審批人：使用時間：【考綱要求及解讀】考綱要求考綱解讀達成情況微生物的 利用n1. 微生物的分離和培養(yǎng)2. 某種微生物數(shù)量的測定3. 培養(yǎng)基對微生物的選擇作用【閱讀教材，基礎檢測】1.培養(yǎng)基根據(jù)功能可分為培養(yǎng)基和培養(yǎng)基。類型實例選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入用于分離得到酵母菌和霉菌培養(yǎng)基中加入用于分離得到金黃色葡萄球菌以作為唯一氮源的培養(yǎng)基用于分離分解尿素的細菌不添加的培養(yǎng)基用于分離固氮微生物是唯一碳源時，可以抑制不能利用石油的微生物的生長，使能夠 利用石油的微生物生存，達到分離能消除石油

2、污染的微生物的目的鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌（菌落呈）;在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入，培養(yǎng)某種細菌后，如果pH升咼，指示劑將變。2篩選菌株（1）原則：（2）土壤中分解尿素的細菌篩選原理a. 選擇培養(yǎng)基的成分： 作為唯一氮源b. 鑒定方法：在培養(yǎng)基中加入 指示劑，若pH升高，指示劑變紅，說明細菌能分解尿素。3.統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法（1）法（計活菌、間接計數(shù)） 原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。 計算公式：每克樣品中菌株數(shù) =，其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板

3、時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。 操作：設置重復組，增強實驗的說服力與準確性。同時為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在 _的平板進行計數(shù)。 值得注意的是：統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目 。這是因為 （2）顯微鏡直接計數(shù)法（不能區(qū)分死菌和活菌）原理：利用特定細菌計數(shù)板或 ，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生項目詳細內容實驗原理（1） 能合成的細菌才能分解尿素；（2） 配制以為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長的細菌就是能分解尿素的 細菌數(shù)量統(tǒng)計（1）（間接，只統(tǒng)計活菌）（2）（直接，不區(qū)分活菌和死菌）實驗流程土壤取樣t配置土壤溶液和制備培養(yǎng)基tt涂布平板與培養(yǎng)t菌落計數(shù)【提煉精講】1.易混

4、淆選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基（1）選擇培養(yǎng)基：允許特定的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長。土壤中分解尿素 的細菌的分離利用的是選擇培養(yǎng)基。（2）鑒別培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基加入某種特殊的化學物質，某種微生物在培養(yǎng)基中生長后能產生某種代 謝產物，而這種代謝產物可以與培養(yǎng)基中的特殊化學物質發(fā)生特定的化學反應，產生明顯的特征性 變化，根據(jù)這種特征性變化，可將該種微生物與其他微生物區(qū)分開來的培養(yǎng)基。用于篩選纖維素分 解菌的培養(yǎng)基就是鑒別培養(yǎng)基。2微生物的鑒別方法菌落特征鑒別法根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色 等特征進行鑒別指示劑鑒如培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種微

5、生物后，培養(yǎng)基變紅，說明該種微生別法物能夠分解尿素染色鑒別如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈來篩法選分解纖維素的微生物【當堂檢測】物的數(shù)量。（3）實例：土壤中分解尿素的細菌的計數(shù)1kCUG 4GAAAU UUCCL心171（/ 從起始密碼開始算起的礒基序引1. （2016.四川）圖甲是從土壤中篩選產脲酶細菌的過程，圖乙是脲酶基因轉錄的mRNA部分序列。(1) 圖中選擇培養(yǎng)基應以 _為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加_作指示劑，產脲酶細菌在該培養(yǎng)基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成_色。(2) 在5個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液O.ImL

6、,培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過程采取的接種方法是 _，每克土壤樣品中的細菌數(shù)量為 _X 108個；與血細胞計數(shù)板計數(shù)法相比，此計數(shù)方法測得的細菌數(shù)較_。(3) 現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了 70個核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA )。突變基因轉錄的團隊在營養(yǎng)成分相同的含醋酸鹽的培養(yǎng)液中分別接種CV101菌株和CV103菌株，并置于相同且適宜的環(huán)境中培養(yǎng)，每隔一段時間統(tǒng)計兩種菌株的生長狀況。實驗數(shù)據(jù)如下圖所示，回答下列問題：mRNA中，終止密碼為 _

7、，突變基因表達的蛋白質含 個氨基酸。2. ( 2017全國I)某些土壤細菌可將尿素分解成CO2和NH3,供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉栴}：(1)有些細菌能分解尿素，有些細菌則不能，原因是前者能產生 。能分解尿素的細菌不能以尿素的分解產物 CO 2作為碳源，原因是，但可用葡萄糖作為碳源，進入細菌體內的葡萄糖的主要作用是(答出兩點即可)。(2)為了篩選可分解尿素的細菌，在配制培養(yǎng)基時，應選擇 (填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是 (1) 醋酸鹽培養(yǎng)基從物理性質上來看屬于 培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基主要應用是 從功能上來看屬于培養(yǎng)基。(2) 由圖可知:更適應醋酸

8、鹽培養(yǎng)基環(huán)境的菌株是 ，其依據(jù)是 ,原因是。3)若要統(tǒng)計培養(yǎng) 30小時后醋酸鹽培養(yǎng)基中的 CV101活菌數(shù)，可采用 法;為保證能在固體培養(yǎng)基上獲得單個菌落，接種前，需取 1mL該菌液進行 處理。5.(2014鄭州三模)下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方，請根據(jù)表格和所學知識回答下列相關問題。(3)用來篩選分解尿素細菌的培養(yǎng)基含有KH 2PO4和NazHPO 4,其作用有。(答出兩點即可)3. (2018衡水十模)“貴州茅臺”被譽為我國的國酒，雖然工藝并不復雜，但是大家公認其獨特品 質的關鍵是當?shù)氐莫毺貧夂?、水質、以及當?shù)乜諝饣颦h(huán)境中存在獨特的微生物。為了提取當?shù)丨h(huán)境 中的獨特菌

9、種，某研究小組以優(yōu)質高粱、上等小麥為原料，制作培養(yǎng)基，搜集、分離空氣中的微生 物?；卮鹣铝袉栴}：(1) 該培養(yǎng)基按成分分類，屬于 (“天然”必須先進行滅菌。(2) 將上述培養(yǎng)基暴露在空氣中培養(yǎng)一段時間后，取再將樣品溶液稀釋 104倍后，各取樣品溶液 0.1 mL 平板上長出的細菌菌落數(shù)分別為 每克培養(yǎng)基樣品中的細菌數(shù)量為 實際值，原因是(3) 生產酒的主 類型是 產物乙醇與 灰綠色，這一反4. (2018山東荷 CV101菌株和或“合成”)培養(yǎng)基，培養(yǎng)基在接種微生物前,10g該培養(yǎng)基用無菌水制成100ml樣品溶液,在5個細菌培養(yǎng)基平板上接種，培養(yǎng)一段時間后，13、156、462、178和191

10、。該過程采取的接種方法是 個；與血細胞計數(shù)板相比，此計數(shù)方法測得的細菌數(shù)目較6020O qO要微生物是酵母菌，其代謝，其試劑反應呈現(xiàn)應可用于乙醇的檢驗。澤一模)為探究大腸桿菌CV103菌株的營養(yǎng)需求，402間【JK廿肯.1r 10.0 s5.0 ajKrHPQ.星也剤(的£1 *艮藍】I12-Og嶄匕趁物吩番解后”用薦館定容到1仙 mL(1) 大腸桿菌的同化類型為 ，從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看，大腸桿菌屬于 。(2) 在微生物的實驗室培養(yǎng)中，獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是 ，因此需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行 (填“消毒”或“滅菌”)，操作者的雙手需要進行清洗和 _?？諝庵械募毦捎米贤饩€殺滅，其原因是紫外線能使 ，還能破壞DNA的結構。(3)根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于 (填“選擇”或“鑒別”)培養(yǎng)基，若要分離能分解尿素的細菌需將培養(yǎng)基中