流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用

1、流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用2 流式細(xì)胞儀就是進(jìn)行流式細(xì)胞分析的儀器，它集電子技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù)、流體理論于一體，是一種非常先進(jìn)的檢測(cè)儀器。流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用3流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用4流式細(xì)胞儀的原理流式細(xì)胞儀的應(yīng)用流式細(xì)胞儀的數(shù)據(jù)處理流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用5流式細(xì)胞儀的工作原理流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用6工作原理工作原理流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用7流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用8Injector TipSheath fluid流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用9 細(xì)胞被戴上特殊的標(biāo)記。所用的標(biāo)記細(xì)細(xì)胞被戴上特殊的標(biāo)記。所用的標(biāo)記細(xì)胞的探針

2、是能夠同待分選細(xì)胞表面特征性胞的探針是能夠同待分選細(xì)胞表面特征性蛋白蛋白(抗原抗原)結(jié)合的抗體，而這種抗體又能結(jié)合的抗體，而這種抗體又能夠同某種熒光染料結(jié)合。被結(jié)合的細(xì)胞帶夠同某種熒光染料結(jié)合。被結(jié)合的細(xì)胞帶上了熒光標(biāo)記。當(dāng)稀釋的細(xì)胞進(jìn)入超聲波上了熒光標(biāo)記。當(dāng)稀釋的細(xì)胞進(jìn)入超聲波振蕩器時(shí)，極稀的細(xì)胞懸浮液形成很小的振蕩器時(shí)，極稀的細(xì)胞懸浮液形成很小的液滴，一個(gè)液滴中只含有一個(gè)細(xì)胞。液滴液滴，一個(gè)液滴中只含有一個(gè)細(xì)胞。液滴一旦形成并通過(guò)激光束時(shí)，激光束激發(fā)結(jié)一旦形成并通過(guò)激光束時(shí)，激光束激發(fā)結(jié)合在細(xì)胞表面抗體分子。合在細(xì)胞表面抗體分子。流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用10流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用

3、11流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用12流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用13流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用14流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用15流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用16FALS SensorLaser流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用17FALS Sensor90LS SensorLaser流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用18Dichroic Filter/MirrorFilter placed at 45oReflected lightTransmitted LightLight Source流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用19LaserFreqFluorescenceFALS SensorFluoresce

4、nce detector(PMT3, PMT4 etc.)Purdue University Cytometry Laboratories流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用20流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用21 流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過(guò)流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過(guò)聚焦整形后的光束，垂直照射在樣品流上，聚焦整形后的光束，垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下，產(chǎn)生被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下，產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。這兩種信號(hào)同時(shí)被前向散射光和激發(fā)熒光。這兩種信號(hào)同時(shí)被前向光電二極管和光電二極管和90方向的光電倍增管接收。方向的光電倍增管接收。光散射信號(hào)在前向小角度進(jìn)

5、行檢測(cè)，這種信光散射信號(hào)在前向小角度進(jìn)行檢測(cè)，這種信號(hào)基本上反映了細(xì)胞體積的大?。粺晒庑盘?hào)號(hào)基本上反映了細(xì)胞體積的大?。粺晒庑盘?hào)的接受方向與激光束垂直，經(jīng)過(guò)一系列雙色的接受方向與激光束垂直，經(jīng)過(guò)一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個(gè)不性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個(gè)不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用22流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用23流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用24流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用25流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用26 當(dāng)含細(xì)胞的液滴逐個(gè)通過(guò)激光束時(shí)，當(dāng)含細(xì)胞的液滴逐個(gè)通過(guò)激光束時(shí)，受到兩種檢測(cè)器的檢測(cè)受到兩種檢測(cè)器的檢測(cè):如果液滴中含有如

6、果液滴中含有細(xì)胞就會(huì)激活干涉檢測(cè)器細(xì)胞就會(huì)激活干涉檢測(cè)器(interference detector)，只有帶有熒光標(biāo)記細(xì)胞的液滴，只有帶有熒光標(biāo)記細(xì)胞的液滴才會(huì)激活熒光檢測(cè)器才會(huì)激活熒光檢測(cè)器(fluorescence detector)。當(dāng)帶有熒光標(biāo)記的液滴通過(guò)激。當(dāng)帶有熒光標(biāo)記的液滴通過(guò)激光束時(shí)，將兩種檢測(cè)器同時(shí)激活，引起液光束時(shí)，將兩種檢測(cè)器同時(shí)激活，引起液滴充電信號(hào)使鞘液帶上負(fù)電荷。由于液滴滴充電信號(hào)使鞘液帶上負(fù)電荷。由于液滴帶有負(fù)電荷，移動(dòng)時(shí)就會(huì)向正極移動(dòng)，進(jìn)帶有負(fù)電荷，移動(dòng)時(shí)就會(huì)向正極移動(dòng)，進(jìn)入到熒光標(biāo)記細(xì)胞收集器中。入到熒光標(biāo)記細(xì)胞收集器中。細(xì)胞分選的原理流式細(xì)胞儀基本原理和臨

7、床應(yīng)用27488 nm laser+-Charged PlatesSingle cells sortedinto test tubesFALS SensorFluorescence detector流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用28流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用29流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用30流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用31+Antigen (cytokines)Fluorescence Detector antibodyCapture beads Capture antibodyBeads流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用32Shades of a colorAntibody coupled be

8、ads, emitting at distinct FL3 intensitiesVarious analytesAntibody coupled PE label, emitting at FL2 intensity proportional to analyte conc.流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用33Multiple sizesBeads provide an expandable assay platform for use with a flow cytometerDifferent intensitiesDifferent colors with different intens

9、ities流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用34IL-8IL-1bIL-6IL-10TNFIL-12Capture BeadsLysate or SupernatantSampleDetector AntibodiesWashAnalyze on flow cytometer流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用35CBA Standard curves流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用36流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用37流式細(xì)胞儀的數(shù)據(jù)處理流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用38數(shù)據(jù)處理 檢測(cè)數(shù)據(jù)的顯示視測(cè)量參數(shù)的不同檢測(cè)數(shù)據(jù)的顯示視測(cè)量參數(shù)的不同由多種形式可供選擇。單參數(shù)數(shù)據(jù)以由多種形式可供選擇。單參數(shù)數(shù)據(jù)以直方圖的形

10、式表達(dá)，其直方圖的形式表達(dá)，其X軸為測(cè)量強(qiáng)軸為測(cè)量強(qiáng)度，度，Y軸為細(xì)胞數(shù)目。對(duì)于雙參數(shù)或軸為細(xì)胞數(shù)目。對(duì)于雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù)，既可以單獨(dú)顯示每個(gè)參多參數(shù)數(shù)據(jù)，既可以單獨(dú)顯示每個(gè)參數(shù)的直方圖，也可以選擇二維的三點(diǎn)數(shù)的直方圖，也可以選擇二維的三點(diǎn)圖、等高線圖、灰度圖或三維立體視圖、等高線圖、灰度圖或三維立體視圖。圖。流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用39流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用40流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用41流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用42Gating流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用43Compensation流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用44compensation流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用45流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用46G0-G1SG2-MFluorescence Intensity# of EventsA typical DNA Histogram of cell proliferation流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用47流式細(xì)胞儀基本原理和臨床應(yīng)用481 熒光信號(hào)的面積：對(duì)熒光光通量進(jìn)行積分 2 DNA指數(shù)(DI)：相對(duì)DNA含量3異倍體：非二倍體，包括近二倍體，四