海水增養(yǎng)殖區(qū)監(jiān)測技術規(guī)程

1、海水增養(yǎng)殖區(qū)監(jiān)測技術規(guī)程（國家海洋局2002年4月）目 次1 范圍 2 規(guī)范性引用文件3 術語4 監(jiān)測方案設計4.1 測站布設4.2 監(jiān)測頻率4.3 采樣層次4.4 監(jiān)測項目5 質量控制與保證6 分析方法6.1 水質監(jiān)測6.2 沉積物監(jiān)測7 監(jiān)測資料匯總8 監(jiān)測海域水質與沉積物環(huán)境質量評價8.1 評價參數8.2 評價標準8.3 評價方法與評價模式8.4 評價指標9 監(jiān)測報告編寫附錄A （規(guī)范性附錄） 弧菌數量平板計數法A.1 培養(yǎng)基A.2 檢測步驟附錄B （規(guī)范性附錄） 水中總氮測定堿性過硫酸鉀氧化法B.1 方法概述B.2 采樣和貯存B.3 器具B.4 試劑B.5 繪制工作曲線附錄C （規(guī)范性

2、附錄） 水中總磷測定過硫酸鉀氧化法C.1 方法概述C.2 采樣和貯存C.3 器具C.4 試劑C.5 繪制工作曲線附錄D （規(guī)范性附錄） 沉積物總氮測定次溴酸鹽氧化法D.1 方法原理D.2 分析方法D.3 測定步驟附錄E （規(guī)范性附錄） 沉積物總磷測定LivingstoneBoykin法附錄F （規(guī)范性附錄） 沉積物糞大腸桿菌發(fā)酵法F.1 樣品預處理F.2 分離方法 附錄G （規(guī)范性附錄） 沉積物異養(yǎng)細菌總數平板計數法G.1 樣品預處理G.2 分離方法附錄H （規(guī)范性附錄） 海水增養(yǎng)殖區(qū)水質監(jiān)測結果報表附錄I （規(guī)范性附錄） 海水增養(yǎng)殖區(qū)沉積物監(jiān)測結果報表附錄J （規(guī)范性附錄） 浮游植物細胞數量

3、計數記錄表附錄K （規(guī)范性附錄） 水質、沉積物質量評價報表K.1 水質污染指數K.2 沉積物污染指數K.3 水質營養(yǎng)指數K.4 水質有機污染評價指數K.5 水質營養(yǎng)狀態(tài)質量指數附錄L （資料性附錄） 異養(yǎng)細菌總數評價等級附錄M （規(guī)范性附錄） 海水增養(yǎng)殖區(qū)監(jiān)測報告內容與格式M.1 文本格式M.2 海水增養(yǎng)殖區(qū)監(jiān)測報告章節(jié)內容海水增養(yǎng)殖區(qū)監(jiān)測技術規(guī)程1范圍本規(guī)程規(guī)定了海水增養(yǎng)殖區(qū)環(huán)境質量監(jiān)測內容、技術要求和方法。本規(guī)程適用于中華人民共和國管轄海域內的海水增養(yǎng)殖區(qū)環(huán)境質量監(jiān)測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本規(guī)程的引用而成為本規(guī)程的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的

4、內容）或修訂版均不適用于本規(guī)程，然而，鼓勵根據本規(guī)程達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本規(guī)程。GB3097 海水水質標準GB1160791 漁業(yè)水質標準GB17378.1 海洋監(jiān)測規(guī)范1：總則GB17378.3 海洋監(jiān)測規(guī)范3：樣品采集、貯存與運輸GB17378.4 海洋監(jiān)測規(guī)范4：海水分析GB17378.5 海洋監(jiān)測規(guī)范5：沉積物分析GB17378.7 海洋監(jiān)測規(guī)范7：近海污染生態(tài)調查和生物監(jiān)測GBXXXXX 海洋沉積物質量3術語下列術語適用于本規(guī)程。3.1重點監(jiān)測增養(yǎng)殖區(qū) Important culturing region指為了解增養(yǎng)

5、殖區(qū)環(huán)境質量而選擇的用于監(jiān)測的代表性增養(yǎng)殖區(qū)。3.2應急監(jiān)測 Emergency monitoring在增養(yǎng)殖區(qū)發(fā)生有毒有害物質污染、養(yǎng)殖對象發(fā)生大面積死亡或赤潮等災害緊急事件時組織反應快速的現(xiàn)場觀測。3.3跟蹤監(jiān)測 Tracking monitoring指對已發(fā)生的有毒有害物質污染、養(yǎng)殖對象發(fā)生大面積死亡或赤潮等全過程的跟蹤、取樣、分析工作。4監(jiān)測方案設計4.1測站布設4.1.1布設原則 選擇重點監(jiān)測增養(yǎng)殖區(qū)，在重點監(jiān)測增養(yǎng)殖區(qū)內，測站可適當加密；在重點監(jiān)測增養(yǎng)殖區(qū)外，測站可適當減少； 重點監(jiān)測增養(yǎng)殖區(qū)面積小于50km2，測站不能少于6個；重點監(jiān)測增養(yǎng)殖區(qū)面積等于或大于50km2，測站不能少

6、于12個； 盡可能沿用歷史測站，以便于進行比較； 4.1.2布設方法以重點監(jiān)測增養(yǎng)殖區(qū)為中心，設立若干斷面，每斷面至少設三個站位。4.2監(jiān)測頻率4.2.1常規(guī)監(jiān)測水質監(jiān)測每月一次；沉積物監(jiān)測每季度一次。4.2.2應急監(jiān)測在接到緊急事件（發(fā)生有毒有害物質污染、養(yǎng)殖對象發(fā)生大面積死亡或赤潮等）報告時，立即前往監(jiān)測。視具體情況，可選擇適當的監(jiān)測頻率和監(jiān)測項目。 4.3采樣層次 水深5m以內，采集表層水樣， 5m及5m以上采集表、底層水樣；油類分析采1.0m層水樣。 沉積物采集表層沉積物樣。4.4監(jiān)測項目4.4.1水質監(jiān)測 必測項目：水溫、透明度、化學需氧量（COD）、pH、溶解氧（DO）、鹽度、無機

7、氮（氨鹽、硝酸鹽、亞硝酸鹽）、活性磷酸鹽、油類、葉綠素-a； 選測項目：總氮、總磷、汞、鎘、鉛、銅、砷、硅酸鹽、弧菌數量、異養(yǎng)細菌總數、浮游植物、揮發(fā)酚。4.4.2沉積物監(jiān)測 必測項目：總汞、鎘、鉛、銅、砷、油類、DDT、多氯聯(lián)苯、硫化物、有機質、糞大腸桿菌； 選測項目：異養(yǎng)細菌總數、總磷、總氮、底棲生物。注 1：若遇赤潮發(fā)生，在赤潮發(fā)生期間，則應按“海洋赤潮監(jiān)測技術規(guī)程”中的相關規(guī)定執(zhí)行。5質量控制與保證本規(guī)程實施過程中所有質量控制與保證體系應滿足GB17378.1總則、GB17378.2樣品采集、運輸和保存以及GB17378.3樣品預處理和實驗分析、數據分析與處理中的相關規(guī)定和要求。6分析

8、方法6.1水質監(jiān)測水質監(jiān)測項目分析方法和標準見表1。表1水質監(jiān)測項目分析方法監(jiān)測項目分析方法引用標準水溫水溫表法GB17387.4鹽度鹽度計法GB17387.4透明度目視法GB17387.4溶解氧碘量法GB17387.4化學需氧量堿性高錳酸鉀法GB17387.4pH值pH計法GB17387.4氨氮次溴酸鹽氧化法GB17387.4硝酸鹽鎘柱法或鋅鎘還原法GB17387.4亞硝酸鹽鹽酸萘乙二胺分光光度法GB17387.4活性磷酸鹽磷鉬藍分光光度法GB17387.4硅酸鹽硅鉬黃法GB17387.4汞（Hg）原子熒光光度法GB17387.4鎘（Cd）無火焰原子吸收分光光度法GB17387.4鉛（Pb）

9、無火焰原子吸收分光光度法GB17387.4銅（Cu）火焰原子吸收分光光度法GB17387.4砷（As）原子熒光光度法GB17387.4油類紫外分光光度法GB17387.4糞大腸桿菌發(fā)酵法GB17387.7弧菌數量平板計數法參見附錄A異養(yǎng)細菌總數平板計數法GB17387.7葉綠素a分光光度法或熒光法GB17387.7浮游植物計數法GB17387.7總氮堿性過硫酸鉀氧化法參見附錄B總磷過硫酸鉀氧化法參見附錄C揮發(fā)酚4-氨基安替比林分光光度法GB17387.46.2沉積物監(jiān)測沉積物監(jiān)測項目分析方法和標準見表2。表2沉積物監(jiān)測項目分析方法監(jiān)測項目分析方法引用標準汞（Hg）原子熒光光度法GB17387.

10、5鎘（Cd）無火焰原子吸收分光光度法GB17387.5鉛（Pb）無火焰原子吸收分光光度法GB17387.5銅（Cu）火焰原子吸收分光光度法GB17387.5砷（As）原子熒光光度法GB17387.5油類紫外分光光度法GB17387.5滴滴涕（DDT）氣相色譜法GB17387.5多氯聯(lián)苯（PCBs）氣相色譜法GB17387.5硫化物亞甲基藍分光光度法GB17387.5有機質重鉻酸鉀氧化還原容量法GB17387.5總氮次溴酸鹽氧化法參見附錄D總磷LivingstoneBoykin法參見附錄E糞大腸桿菌發(fā)酵法參見附錄F異養(yǎng)細菌總數平板計數法參見附錄G底棲生物計數法GB17387.77監(jiān)測資料匯總 水

11、質監(jiān)測結果以附錄H規(guī)定的格式匯總資料； 沉積物檢測結果以附錄I規(guī)定的格式匯總資料； 浮游植物監(jiān)測結果以附錄J規(guī)定的格式匯總資料。8監(jiān)測海域水質與沉積物環(huán)境質量評價8.1評價參數水質評價參數為：溶解氧、化學需氧量、總無機氮（NO3-N、NO2-N和NH3-N之和）、磷酸鹽、總氮、總磷、油類、pH、汞、鎘、鉛、鋅、砷；糞大腸桿菌、弧菌數量、異養(yǎng)細菌總數、葉綠素a和浮游植物。沉積物評價參數為：有機質、硫化物、油類、汞、鎘、鉛、鋅、砷；糞大腸桿菌、總磷、總氮、異養(yǎng)細菌總數。8.2評價標準水質評價采用GB3097的第二類海水水質標準。各評價參數的標準值見表3。表3水質評價參數的引用標準值參數DOmg/L

12、CODmg/LHgmg/LCdmg/LPbmg/LCumg/LAsmg/L油類mg/L無機氮mg/L活性磷酸鹽mg/L糞大腸桿菌個/L標準值5.03.00.00020.0050.0050.0100.0300.050.300.030140沉積物評價采用海洋沉積物質量標準GBXXXXX。各評價參數的標準值見表4。表4沉積物評價參數的引用標準值參數Hg10-6Cd10-6Pb10-6Zn10-6As10-6有機質%油類10-6硫化物10-6糞大腸桿菌個/g 濕重標準值0.20.560.0150.020.02.0500.0300.03注：異養(yǎng)細菌總數建議按附錄L的評價等級進行評估。8.3評價方法與評價

13、模式8.3.1單因子評價模式式中：Pi某污染因子的污染指數即單因子污染指數；Ci某污染因子的實測濃度*；Cio某污染因子的評價標準；注： 若采表底層樣，注： 帶*為表、底層平均濃度。根據溶解氧的特點，采用萘墨羅（N.L.Nemerow）的指數公式計算溶解氧污染指數。式中：Pi溶解氧的污染指數；Ci溶解氧的實測值*；Cio溶解氧的評價標準；Cim本次調查中溶解氧的最大值。注： 若采表底層樣，注： 帶*為表、底層平均值根據pH的特點，pH的評價模式如下：其中：式中：SpHpH的污染指數；pH本次調查實測值*；pHsu海水pH標準的上限值；pHsd海水pH標準的下限值。注： 若采表底層樣，注： 帶*

14、為表、底層平均值8.3.2生物多樣性指數（H/）法生物多樣性指數（H/）（Shannon-Weiver種類多樣性指數）按下式計算：式中：H/站位或海域浮游植物的種類多樣性指數；S站位或海域浮游植物種類數；Pi第i種的細胞個數與總細胞數的比值。8.3.3營養(yǎng)指數（E）法營養(yǎng)指數（E）按下式計算：ECOD無機氮活性磷酸鹽106/4500（5）上式單位以mg/dm3表示。8.3.4有機污染評價指數（A）法有機污染評價指數（A）按下式計算：ACOD/COD0 + DIN/DIN0 DO/DO0(6)式中： COD水體的化學需氧量的實測濃度DIN溶解態(tài)無機氮的實測濃度DIP溶解態(tài)活性磷酸鹽的實測濃度DO

15、溶解氧的實測濃度；COD0、DIN0、DIP0、DO0分別為水體的上述各項指標的評價標準，其中： COD03.0mg/L；DIN00.10mg/L；DIP00.015mg/L；DO05.0mg/L。8.3.5營養(yǎng)狀態(tài)質量指數(NQI)法營養(yǎng)狀態(tài)質量指數(NQI)按下式計算：NQICCOD/C/COD + CT-N/C/T-N + CT-P/C/T-P (7)式中： CCOD水體的化學需氧量的測量濃度；CT-N總氮的測量濃度；CT-P總磷的測量濃度；C/COD、C/T-N、C/T-P分別為水體的化學需氧量、總氮和總磷的評價標準。其中： C/COD3.0mg/L；C/T-N0.6mg/L； C/T

16、-P0.03mg/L；注 1：單因子評價模式用于水質和沉積物環(huán)境化學要素評價。注 2：8.3.18.3.5項分析結果以附錄K的規(guī)定匯總。8.4評價指標8.4.1污染指數8.4.1.1單因子污染指數以單因子污染指數1.0作為該因子是否對環(huán)境產生污染的基本分界線，小于0.5為水域或沉積物未受該因子沾污；介于0.51.0之間為水域或沉積物受到該因子沾污；大于1.0表明水域或沉積物已受到該因子污染。8.4.2營養(yǎng)指數（E）如E1,則水體呈富營養(yǎng)化狀態(tài)。8.4.3有機污染評價指數（A）用有機污染評價指數評價海域質量狀況參見表5評價。表5海域有機污染評價分級表A值0011223344污染程度分級01234

17、5水質評價良好較好開始受到污染輕度污染中度污染嚴重污染8.4.4生物多樣性指數（H/）H/值在34為清潔區(qū)域，23為輕度污染，12為中度污染，1為重污染。8.4.5營養(yǎng)狀態(tài)質量指數(NQI)根據NQI值將海域營養(yǎng)水平分為三級:NQI3 富營養(yǎng)水平；NQI23 中營養(yǎng)水平；NQI2 貧營養(yǎng)水平。8.4.6病原微生物指標根據已有的標準，判斷病原微生物是否超標。9監(jiān)測報告編寫海水增養(yǎng)殖區(qū)監(jiān)測報告的格式和內容應滿足附錄M的要求。附錄A（規(guī)范性附錄）弧菌數量平板計數法A.1培養(yǎng)基 計數培養(yǎng)基BTB：牛肉膏3.0g， 蛋白胨10.0g，蔗糖15.0g，氯化鈉20.0g，Teepol 1.0g， 溴麝香草酚

18、藍0.06mg，蒸餾水1000mL。配制方法：將上述數量的牛肉膏、蛋白胨、蔗糖、氯化鈉和Teepol加熱溶解于1000mL蒸餾水中， 用16%的氫氧化鈉調整pH為7.8，再將溴麝香草酚藍按上述量溶解其中。分裝于試管（每管5mL）中，塞棉塞，包裝后于115高壓蒸氣滅菌20min， 然后于冰箱中冷藏備用。 平板分離培養(yǎng)基TCBS：蛋白胨10.0g， 酵母膏5.0g，檸檬酸鈉10.0g，硫代硫酸鈉10.0g， 蔗糖20.0g，膽鹽8.0g， 氯化鈉10.0g，檸檬酸鐵1.0g， 溴麝香草酚藍0.04g，麝香草酚藍0.04g，瓊脂15g，蒸餾水1000mL。配制方法：將上述數量的蛋白胨、酵母膏、檸檬酸

19、鈉、硫代硫酸鈉、蔗糖、膽鹽、氯化鈉、檸檬酸鐵、溴麝香草酚藍和麝香草酚藍加熱溶解于1000mL蒸餾水中，調節(jié)pH為8.6，在加熱至沸騰。然后冷卻至55， 傾注無菌培養(yǎng)皿即可。該培養(yǎng)基不需要高壓滅菌。 PAC斜面培養(yǎng)基：蛋白棟5.0g，酵母膏2.5g， 葡萄糖1.0g，氯化鈉10.0g， 瓊脂15.0g，蒸餾水1000mL。配制方法：將上述量蛋白棟、酵母膏、葡萄糖、氯化鈉和瓊脂加熱溶解于1000mL蒸餾水中， 調節(jié)pH為7.0，分裝于試管（每管5mL）中， 塞棉塞，包裝后于高壓蒸汽滅菌鍋中115滅菌20min。滅菌后立即取出裝有上述培養(yǎng)基的試管，傾斜放置于實驗臺面上，使其冷卻后培養(yǎng)基在試管內形成斜

20、面。放置冰箱中冷藏備用。A.2檢測步驟 弧菌的分離和計數：采用9管“MPN”法以3個不同稀釋度（原水樣、10-1和10-2）的水樣接種于BTB培養(yǎng)液的試管中， 37培養(yǎng)18h， 把陽性管中的菌液于TCBS平板上劃線分離， 平板放進培養(yǎng)箱里， 于37培養(yǎng)18h，將出現(xiàn)的綠色、藍綠色和黃色菌種接種于PCA斜面上保存。分離菌株首先經革蘭氏染色、氧化酶、運動性和0/129弧菌素敏感實驗等，符合弧菌特征的菌株，視其來源的“MPN”管數， 查“MPN”表進行計數。 弧菌種的鑒定：從TCBS平板上分離的菌株經上述4個弧菌屬基本特征鑒別后，采用API20E系統(tǒng)進行生理生化特征鑒定， 并做耐鹽性試驗（鹽度為0、

21、3%、6%、8%和10%）， 根據API20E反應結果， 查API20E檢索表， 即可得到種名 。注： 除有特殊需要外，注： 可不注： 做第二步。附錄B（規(guī)范性附錄）水中總氮測定堿性過硫酸鉀氧化法B.1方法概述在堿性介質的氧化作用下，樣品中（包括有機氮含量很高的污水）各種有機氮化合物被氧化成硝酸鹽。氧化后樣品中的硝酸鹽含量，通過轉化為亞硝酸鹽后測定。B.2采樣和貯存水樣采集后存于具塞玻璃瓶或聚乙烯瓶中，要蓋嚴瓶塞，以防周圍空氣中氨的污染。水樣在暗處冷貯存，可保存1d。若需要貯存更長時間，必須快速深度冷凍（-20）。B.3器具若干50mL具塞玻璃瓶用作反應瓶。高壓滅菌鍋。B.4試劑 重蒸餾水：在

22、一合適的蒸餾水瓶中加入普通蒸餾水，每升加入0.5g左右過硫酸鉀（分析純）和50mL 0.12mol/L氫氧化鈉。敞口煮沸數分鐘， 然后連接冷凝器進行蒸餾，直至剩余150mL時為止（最好采用密封蒸餾系統(tǒng)）。將其保存于密封良好的玻璃瓶中。所有試劑的制備和整個操作中的稀釋處理均用此蒸餾水。 0.12mol/L氫氧化鈉溶液：溶解4.8g氫氧化鈉（分析純）于1L重蒸餾水中，保存于密封的玻璃瓶中。 過硫酸鉀：本方法中使用的過硫酸鉀中含氮量不 應超過0.00045%。普通分析純的產品要在（7080）下溶解20g于1000mL重蒸餾水中， 將清澈的溶液冷卻至接近0，過濾。由于過硫酸鉀在0時的溶解度僅為1.75

23、g：100mL，因此試劑的損失很少。將已重結晶的過硫酸鉀置于放有濃硫酸的干燥器中干燥，經過12次重結晶后方能達到指標。 氧化溶液：將10g純化后的過硫酸鉀溶解于1L（0.12mol/L）氫氧化鈉溶液中， 置于密閉良好的棕色玻璃瓶中， 于冷暗處避光保存。此溶液可穩(wěn)定7d。 0.45mol/L的硫酸：用蒸餾水將5mL濃硫酸（分析純）稀釋至200mL。在密閉的玻璃瓶中保存。 5mol/L氯化銨溶液：將134g氯化銨（分析純）溶解于500mL重蒸餾水中， 在具塑料塞的玻璃瓶中保存。 0.05%酚酞指 示劑溶液：將0.05g酚酞溶解于100mL（50%）的乙醇中。 硝酸鉀標準貯備液：將101.2mg硝酸

24、鉀（優(yōu)級純）溶解于100mL重蒸餾水中。該溶液在玻璃瓶中貯存時是很穩(wěn)定的。此標準液的含氮量為10mol/mL。 有機氮標準貯備液：將186.2mg二水乙二銨四乙酸二鈉溶于100mL重蒸餾水中。在玻璃瓶中貯存于冷暗處能穩(wěn)定數月。此標準液中的含氮量為10mol/mL。 對氨基苯磺酰胺溶液：加72mL濃硫酸（分析純）于重蒸餾水中， 稀釋至500mL。將5g對氨基苯磺酰胺溶解其中。在具玻璃塞的玻璃瓶中保存能穩(wěn)定數月。 芳香胺溶液：將0.35gN-（1-萘基）-乙二胺二鹽酸鹽溶解于500mL重蒸餾水中，在棕色玻璃瓶中，于冷暗處保存可穩(wěn)定數月。B.5繪制工作曲線配制有機氮標準溶液系列：移取10.0mL有機

25、氮標準貯備液注入氧化瓶中，然后加入10mL氧化溶液。蓋緊瓶子，置于高壓滅菌鍋內，壓熱（115120）處理30min。冷至室溫后檢查塞子是否密封（若不密封棄掉）。然后打開瓶蓋，加入1mL（0.45mol/L）硫酸，再加入數滴酚酞指示劑，用氫氧化鈉溶液（通常為35mL）中和至第一次出現(xiàn)穩(wěn)定的淺紅色。將此溶液轉移入50mL標線的具塞量桶中稀釋至50mL。氧化后所得到的硝酸鹽按GB17378.4“硝酸鹽的檢測”分析步驟進行分析。注： 由于過硫酸鉀含有微量的氨，氧化劑帶來的空白是不能忽視的， 因此，自始至終必須使用特制的重蒸餾水， 用1mL比色皿測其吸光值， 吸光值小于0.030為宜。附錄C（規(guī)范性附錄

26、）水中總磷測定過硫酸鉀氧化法C.1方法概述將酸化的樣品放于密封瓶中，用過硫酸鹽熱處理0.5h。實驗表明如果樣品是預先酸化處理的，氧化劑的用量可以從1%減少到0.3%。只簡單地以相反順序加磷酸鹽試劑，所形成的游離氯被抗壞血酸還原。C.2采樣和貯存采樣后盡快進行分析，最好在0.5h之內進行，不要超過2h。若不能立即進行分析，應在每100mL樣品中加入1mL（4.5mol/L）硫酸酸化，放入聚乙烯瓶中在暗處冷貯存不超過24h。C.3器具氧化反應在50mL硼硅玻璃瓶中進行，這種瓶具有金屬夾固緊的玻璃塞?；蛴脦菪w的50mL瓶或錐形瓶。瓶子在使用之前用蒸餾水洗滌若干次。高壓滅菌鍋。C.4試劑除GB17

27、378.4中磷酸鹽測定所列的試劑之外，還需要一種氧化溶液。 過硫酸鉀溶液：取15mL（4.5mol/L）硫酸，將5g過硫酸鉀（分析純）溶于此液中。將此飽和溶液在室溫下貯存于聚乙烯瓶中，避免陽光直接照射。該溶液可穩(wěn)定7d。 過硫酸鉀溶液：將5g過硫酸鉀溶解于100mL蒸餾水中。貯存方法同溶液。此溶液可穩(wěn)定7d。C.5繪制工作曲線按GB17378.4中磷酸鹽測定方法中相關要求配制磷酸鹽標準溶液系列，注入氧化瓶中，加入2mL過硫酸鉀溶液。蓋緊瓶子，將其置于高壓滅菌鍋內，壓熱（120）處理30min。冷至室溫后檢查塞子是否密封（若不密封棄掉）。然后打開瓶蓋，將溶液轉入磷酸鹽反應瓶中。其它分析步驟按制作

28、磷酸鹽工作曲線步驟進行。附錄D（規(guī)范性附錄）沉積物總氮測定次溴酸鹽氧化法D.1方法原理樣品在催化劑的作用下用濃硫酸消煮分解，使其中所含的氮轉化成氨并與硫酸結合形成硫酸銨，在堿性介質中用次溴酸鹽將其氧化為亞硝酸鹽，然后以重氮偶氮分光光度法測定。D.2分析方法D.2.1儀器 50mL凱氏燒瓶若干； 具塞50mL錐形瓶； 分光光度計； 小漏斗； 1000mL容量瓶。D.2.2試劑及配制 無氨蒸餾水； 濃硫酸； 混合催化劑：硫酸鉀與硫酸銅按10：1比例混合， 研細過80目篩，貯存于瓶中，消煮時每1mL濃硫酸加混合催化劑0.37g。 銨標準貯備液 100mg/L-N稱取0.4716g硫酸銨（預先在110

29、下干燥1h）溶于少量水中，移入1000mL容量瓶中，加水至標線，混勻。再加1mL氯仿。貯存于棕色瓶中，冰箱中冷藏保存。此溶液1.00mL含氨-氮100.0g，有效期為半年。 銨標準使用液 10.0mg/L-N移取10.0mL銨標準溶液于100mL容量瓶中，加水至標線，混勻。此溶液1.00mL含氨-氮10.0g，每次使用前配制。 氫氧化鈉溶液 400mg/L稱取200g氫氧化鈉（優(yōu)級純）于1000mL水中，加熱蒸發(fā)至500mL，盛于聚乙烯瓶中。 鹽酸溶液 1+1500mL鹽酸（密度1.19g/mL）與同體積水混合而成。 溴酸鉀-溴化鉀貯備溶液稱取2.8g溴酸鉀和20g溴化鉀溶于1000mL水中，

30、貯存于1000mL棕色瓶中。 次溴酸鈉溶液量取1.0mL溴酸鉀-溴化鉀貯備溶液于250mL聚乙烯瓶中，加49mL蒸餾水和3.0mL鹽酸溶液，蓋緊搖勻，置于暗處5min后加入50mL氫氧化鈉溶液，混勻。每次使用前配置。磺胺溶液 2g/L稱取2.0g磺胺（NH2SO2C6H4NH2）溶于1000mL（1+1）鹽酸溶液中，貯存于1000mL棕色瓶中。有效期為兩個月。鹽酸萘乙二胺溶液 1.0g/L稱取0.50g鹽酸萘乙二胺（C10H7NHCH2CH2NH2.2HCL）溶于500mL純水中，貯存于棕色瓶中。冰箱中冷藏保存。有效期為一個月。D.3測定步驟D.3.1繪制工作曲線a)取6個100mL容量瓶分別

31、加入0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL銨標準溶液，加水至標線，混勻。此時濃度分別為0.000、0.010、0.020、0.040、0.060、0.080、0.1000mg/L-N。b)各取25.0mL上述溶液分別置于50mL具塞錐形瓶中。c)分別加入2.5mL次溴酸鈉溶液，混勻，放置30min。再各加入2.5mL磺胺溶液，混勻，放置5min。最后各加入0.5mL鹽酸萘乙二胺溶液混勻，放置15min。d)在543nm波長下，使用5cm比色皿，以無氨蒸餾水做參比測標準系列液的吸光度值Ai，其中0.00 mg/L-N濃度標準液所測吸光度值為Ao。e)以吸光度Ai

32、-Ao為縱坐標，相應的濃度為橫坐標，繪制工作曲線。 D.3.2樣品測定 稱取1g待分析樣品置于50mL凱氏燒瓶中，加1.85g混合催化劑和5mL濃硫酸， 加蓋小漏斗。開始用文火加熱，待氣泡發(fā)生后用大火，并不斷搖動（硫酸在瓶內回流程度以高達瓶頸1/3處為好， 否則表示加熱溫度過高或過低），待溶液呈淡綠色后繼續(xù)煮沸0.5h即可。稍冷后用蒸餾水將小漏斗內外洗凈， 用約10mL蒸餾水溶解殘渣（必要時可溫熱）。 將溶液定量轉移到50mL錐形瓶中，依照D.3.1中a)e)步驟測Aw。 不加樣品而用25mL蒸餾水重復上兩步驟測得空白吸光度值Ab。以Aw-Ab在工作曲線上查的樣品中N的濃度。附錄E（規(guī)范性附錄

33、）沉積物總磷測定LivingstoneBoykin法E.1樣品預處理 取適量沉積物樣品于馬弗爐中在450下焙燒6h； 稱取焙燒沉積物樣品0.10.5g于10mL聚四氟乙烯離心管中，加入H2SO4/HCLO4（V/V 為1/4）混合液4mL， 在往復振蕩器上振蕩2h； 上述萃取樣品置于離心機中離心20min ， 轉速為3000rpm； 取離心后的上清液2mL移入50mL具塞比色管中， 用重蒸餾水稀釋至50mL。E.2樣品測定按GB17387.4海水中磷酸鹽的測定方法，測量稀釋液中的磷含量。附錄F（規(guī)范性附錄）沉積物糞大腸桿菌發(fā)酵法F.1樣品預處理用無菌培養(yǎng)皿無菌稱取1.0g（若沉積物是沙質，則樣

34、品量加倍，視具體情況而定）沉積物樣品，然后無菌加入9.0mL（或加倍增加）無菌海水制備成10-1稀釋樣；再用無菌移液管將10-1稀釋樣連續(xù)稀釋，制備成10-2、10-3、10-4稀釋樣。F.2分離方法按17387.9中規(guī)定的糞大腸桿菌檢測方法進行檢測。附錄G（規(guī)范性附錄）沉積物異養(yǎng)細菌總數平板計數法G.1樣品預處理用無菌培養(yǎng)皿無菌稱取1.0g（若沉積物是沙質，則樣品量加倍，視具體情況而定）沉積物樣品，然后無菌加入9.0mL（或加倍增加）無菌海水制備成10-1稀釋樣；再用無菌移液管將10-1稀釋樣連續(xù)稀釋，制備成10-2、10-3、10-4稀釋樣。G.2分離方法按GB17387.7中規(guī)定的異養(yǎng)細

35、菌總數檢測方法進行檢測。附錄H（規(guī)范性附錄）海水增養(yǎng)殖區(qū)水質監(jiān)測結果報表海水增養(yǎng)殖區(qū)水質監(jiān)測結果應按照表H1的內容計算、填報。表H1 海水增養(yǎng)殖區(qū)水質監(jiān)測結果報表（1）養(yǎng)殖區(qū)名稱： 采樣日期： 分析日期：地理位置： 分析單位： 報告日期：站位溫 度（）鹽 度透明度（m）pH溶解氧（mg/L）COD（mg/L）銨 鹽（g/L）硝酸鹽（g/L）亞硝酸鹽（g/L）磷酸鹽（g/L）硅酸鹽（g/L）表層底層平均表層底層平均表層底層平均表層底層平均表層底層平均表層底層平均表層底層平均表層底層平均表層底層平均最大值最小值總均值注： 本表欄目視具體情況可增減報表人： 校對人： 審核人： 表H.1(續(xù))海水增養(yǎng)

36、殖區(qū)水質監(jiān)測結果報表（2）站位Hg(g/L)Cd(g/L)Pb(g/L)Zn(g/L)As(g/L)油類(g/L)糞大腸桿菌(個/L)異養(yǎng)細菌總數(cfu/mL)弧菌數量(cfu/mL)葉綠素a(g/L)總氮(g/L)總磷(g/L)表層底層平均表層底層平均表層底層平均表層底層平均表層底層平均表層底層平均表層底層平均表層底層平均表層底層平均表層底層平均表層底層平均最大值最小值總均值報表人： 校對人： 審核人： 附錄I（規(guī)范性附錄）海水增養(yǎng)殖區(qū)沉積物監(jiān)測結果報表海水增養(yǎng)殖區(qū)沉積物監(jiān)測結果應按照表I1的內容計算、填報。表I1 海水增養(yǎng)殖區(qū)沉積物監(jiān)測結果報表養(yǎng)殖區(qū)名稱： 采樣日期： 分析日期：地理位置： 分析單位： 報告日期：站位Hg10-6Cd10-6Pb10-6Zn10-6As10-6油類10-6硫化物10-6有機質%DDT10-6PCBs10-6糞大腸桿菌個/g 濕重異養(yǎng)細菌總