分子生物學實驗 心得體會

1、關(guān)于分子生物學實驗的體會梁慧媛（生技01級） 不知不覺間，一年的時間就這樣流逝了，與分子生物實驗相伴，對我而言，的確不同尋常。并不僅僅是學習生物學實驗技術(shù)和方法的寶貴經(jīng)歷，它意味著更多。 首先是實驗條件、實驗過程、實驗設計的完備性，從這里可以初步感受到生物學研究的科學性與嚴肅性，自己可以得到寶貴的機會，親身體會生物學研究的苦辣酸甜。 一直一直喜歡，得到正確實驗結(jié)果時刻的暢快感，那是無法言明的欣慰感，一次身心徹底地放松，可以將所有一整天來積累的疲勞拋之身后，即使僅僅是小小的成功，也會讓我們興奮不已。在整理資料，將一年來保存的記錄一遍一遍的翻看，重溫其中的特別滋味，我，輕輕地笑了。我，喜歡這里，喜

2、歡生物學。 失誤是常有的，經(jīng)歷過吃驚、后悔、無奈，檢討分析，最后重新開始。一波三折的記憶清晰的印在腦海中，這種深深的挫折感，再試一次的勇氣，我會一生記取的。一年間，隨著對生物學實驗知識和技能的進一步學習，我更堅定了自己學習生物學的志向，感謝分子生物學實驗的"試煉"。 分子生物學實驗心得體會劉東強（生科01級） 分子生物學實驗室本科生第一次接觸到了真正培養(yǎng)實驗能力的實驗課，它不同于我們在大二開的植物、動物、微生物等實驗課。在這些課上，主要以制備樣品并觀察樣品的形態(tài)、結(jié)構(gòu)特征為主，這是由于我們當時正值大二，專業(yè)知識還遠不夠。 隨著以后理論課學習的深入，我們開始了分子生

3、物學實驗的學習，這無疑對于深刻鞏固我們理論課上學到的知識是有幫助的，也進一步加深了對原有知識的理解，如啟動子的概念、類型、PCR的原理等。另外，在實驗課中，我們掌握并學會如何運用分子生物學研究中的一些基本實驗技術(shù)，如質(zhì)粒的提取、總RNA的制備、PCR技術(shù)等。 我們的實驗動手能力通過親身接觸實驗過程并親自設計一些實驗得到了提高，使我們不再象剛開始做分子生物學實驗的時候照搬實驗指導上的實驗步驟，而是通過我們自己的思考，根據(jù)現(xiàn)有的實驗條件，對原有的步驟作必要的改進。 此外，通過這門實驗課的學習，我們形成了嚴謹?shù)膽B(tài)度，如有時得出的實驗結(jié)果與理論不符，我們漸漸養(yǎng)成了仔細分析實驗結(jié)果的習慣，查找在實驗設計

4、或操作過程中出現(xiàn)的問題，同時對理論知識認識得更清楚。 總之，我認為，分子生物學實驗課，是稱得上實用、精彩、有意思的好實驗，對于今后我的研究或工作很有價值。 劉佳凝（生技01級） 一學期的分子生物學實驗對我來說很重要，同時通過一學期的實踐讓我給分子生物學有了較深入地體會：1、很感謝由我系生化組老師們編寫的這本實驗指導。里面的實驗原理與操作步驟都清晰易懂，有助于我們在學習操作。 2、實驗老師的耐心指導對我們幫助很大。他們要求嚴格，待人和藹可親，實驗要求嚴且對實驗技術(shù)的知識的深刻掌握與理解給我們留下了很深刻的印象。在老師們的帶領下我們都很認真完成了每一次的實驗與之后的總結(jié)與報告。 3、由于

5、分子生物學實驗是我們上大學后接觸的第一個大型實驗課，所以這對我們來說是一個磨練的過程。從不熟練當熟練，從不耐煩到耐心認真，每個人在一學期后都有一種"脫胎換骨"的感覺。同時這個實驗幫助我們從分認識到生物學的不可知性、變化多樣性及創(chuàng)新空間的廣博性。在學期后的設計實驗中，每組同學都努力開動腦筋，搜集資料，查閱文獻，提出了很多好的實驗方案。這種設計與創(chuàng)新調(diào)動了同學的同學們的積極性，使得大家在實驗過程中都更加認真、仔細、一絲不茍，并在獲得到好的實驗結(jié)果后體會到了前所未有的成就感。所以我們都很感謝分子生物學實驗的老師及設計這門課的老師們。這個實驗讓我們受益非淺。 實驗心得體會

6、張鑫蕊（生科01級） 通過分子生物學實驗課的學習，我們首先了解了分子生物學常用的載體，即質(zhì)粒載體的制備及宿主細胞的感受態(tài)的制備。這些都讓我們在學過書本狀的知識以后有了一個親手操作，更深一步所學的知識的機會。 生物學以及分子生物學本身就是一門實驗性的學科，如果只有單純的理論課上的講解而沒有與之相配套的實驗操作，跟的無法使我們深刻體會到我們所學的那些如轉(zhuǎn)導轉(zhuǎn)化之類究竟是怎樣操縱的。 至于PCR基因擴增、RT-PCR、蛋白質(zhì)印跡這些實驗操作技術(shù)的學習對我們以后生物化學大實驗、生化技術(shù)原理、基因工程、蛋白質(zhì)工程的學習都奠定了一個很堅實的基礎，幫助我們對這一系列等分子生物學技術(shù)有了很好的了解和掌握的。

7、相配套的理論課的學習與實驗操作上是非常必要，我覺得分子實驗課的時間安排就相當合理，在我們學理論課的同時就進行實驗課的操作，這樣相輔相承的學習，才能促進我們的進一步提高。 實驗心得劉娟（生科01級）一、實驗操作：同樣的樣品，同樣的步驟，不同的人可以作出不同的結(jié)果。 當然分子生物學實驗本身的結(jié)果就有一定的偶然性，因為所操作的材料是極其微小的，肉眼無法看見的，所以用理論來預見可行的實驗，結(jié)果往往有些出乎意料。而每個人操作上的細微差別對RNA、DNA而言就是一場地震。 有人說做生物實驗和學數(shù)學不一樣，數(shù)學只要用靈活的思維，嚴禁的邏輯就行，而生物實驗要求的往往不止這些，不只要心靈還要手巧肯干，

8、而分子實驗又比其他實驗要求嚴格，每一步都須三思而后行，而且必須有極大的耐心去重復一些枯燥的步驟。 二、關(guān)于設計實驗：想總比做起來容易，當初覺得mRNA差異顯示原理簡單，操作應該不成問題。結(jié)果第一天的實驗便給了個下馬威，不僅結(jié)果等于沒有，而且對接下來的步驟更是一無所知，無從下手。而最終自己的實驗結(jié)果只不過是mRNA差異顯示地預實驗，由于該方法的假陽性率極高，正常的科研實驗是需要反復重復實驗，并將最后的結(jié)果測序分析，并進一步分析是否為新基因，當然我們不可能接著做，只完成了該實驗的一小步，也已經(jīng)學到了很多書上沒有的東西。 三、還存在的問題：自己在做的過程中，有時會有"照方抓藥"的

9、情況出現(xiàn)，并不完全明白自己所做的步驟有什么作用便做了，事前事后缺乏思考。實驗過程中，儀器、試劑的收集，總只有幾個人在做，其他人只是張口就問在哪，說明擺放無秩序，做實驗時依賴心理太強，（看完其他國外的幾個實驗室照片后，覺得我們實驗室已經(jīng)不錯了。） 每一步驟最好都有記錄，特別是樣品多時，要有據(jù)可查。一門好實驗課中國協(xié)和醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院 2003級研究生 陸璐 我是生物科學專業(yè)99級的學生，在大三的時候選修了分子生物學實驗這門課。在半年的學習和實踐中，我學會了很多基礎的分子生物學實驗方法，掌握了一定的實驗技能，這些都為現(xiàn)階段的實驗工作提供了很大的幫助，這使我避免了剛剛進入實驗室工作時要一切從頭學起

10、的忙亂，節(jié)省了大量時間。 分子生物學實驗課上所講授的質(zhì)粒提取、藍白斑篩選、RNA提取及鑒定、基因組DNA提取、western blot、瓊脂糖凝膠電泳、PCR技術(shù)等都是我現(xiàn)在常用的技術(shù)。在實驗課的訓練中，我也逐步養(yǎng)成了良好的實驗習慣。分子生物學實驗課程讓我受益很多，老師們認真負責的態(tài)度也必然讓更多的師弟師妹們從中獲益。       我是北京師范大學生命科學學院生物化學與分子生物學專業(yè)2002級的碩士研究生，在研一第一學期參加了分子生物學實驗課程。這門課程將分子生物學實驗操作的理論與實踐相結(jié)合，不僅使我在分子生物學實驗技能方面

11、得到系統(tǒng)的訓練，而且讓我對具體實驗操作的原理有了清晰地認識。尤為難得的是，作為一門實驗課，它還鍛煉了我運用已學到的理論知識和已掌握的實驗技能綜合解決科學問題的能力。這些都為我之后研究生階段的工作做了必要的準備，打下了良好的基礎。 這門課程開設的實驗以綜合性為主，涵蓋面廣，幾乎包括一般分子生物學研究會涉及的所有內(nèi)容：最基本實驗技術(shù)，如瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA；基因克隆所要用到的技術(shù)，如質(zhì)粒提取、DNA重組及重組子篩選、細菌感受態(tài)的制備及轉(zhuǎn)化、外源基因的誘導表達等；還有一些其他的常用技術(shù)，如動、植物基因組DNA的提取、植物總RNA的提取、PCR擴增、蛋白質(zhì)印跡、Southern雜交等。 我研究生階

12、段的一部分工作是要將外源基因通過農(nóng)桿菌介導的方法轉(zhuǎn)入植物中，并鑒定轉(zhuǎn)化是否成功。首先要用到質(zhì)粒提取、DNA重組等技術(shù)來構(gòu)建插入有外源基因的表達載體。轉(zhuǎn)化植物成功后，就需要提取植物基因組DNA及總RNA，利用PCR擴增、Southern雜交、RT-PCR、蛋白質(zhì)印跡等技術(shù)，對外源基因進行不同水平的鑒定。 正是因為分子生物學實驗課對基本原理的詳細講解、對實驗技能的系統(tǒng)訓練，使我在工作中比較容易上手，工作進度也有了保證。另外，通過在這門課上系統(tǒng)地、全面的學習，也使我在工作需要學習新的實驗技術(shù)時，觸類旁通，比較容易理解消化。 分子生物學課程對我的科研工作的幫助胡麗婭進入實驗室做課題已經(jīng)一年多

13、了，在日常的科研工作中，分子生物學實驗課中學到的知識和技術(shù)給了我很大的幫助，例如"外源基因在大腸桿菌中的誘導表達"和"SDSPAGE檢測蛋白"等等。 我的課題主要是研究鈣調(diào)磷酸酶的折疊機制，而整個研究的基礎就是要拿到純的、具有完整的生物活性的酶。這是整個工作的第一步，也是非常關(guān)鍵的一步。剛開始參與科研工作時，我遇到了蛋白表達為包含體的問題，因為拿不到蛋白，實驗無法進行下去。于是我運用在分子生物學實驗課中學到的知識，對表達條件進行了摸索，最終解決了表達的問題。順利的進行了后續(xù)的實驗工作。      

14、0;隨著課題的深入，我需要構(gòu)建一個點突變體來觀察這一位點對于鈣調(diào)磷酸酶的結(jié)構(gòu)和折疊的作用。由于有在分子生物學實驗課中打下的基礎，我利用Primer premier設計了點突變的引物，運用PCR技術(shù)對鈣調(diào)磷酸酶進行點突變：質(zhì)粒DNA的提取和酶切、E.coli感受態(tài)細胞的制備，轉(zhuǎn)化。每一步實驗都能夠得到理想的結(jié)果。我想正是以前學到的知識和經(jīng)驗使我能夠順利的完成設計的實驗。      通過一年多來的實驗工作，我更加深切的體會到堅實的理論基礎和良好的實驗技能對于科研工作的重要性。在我本科的課程中，分子生物學實驗課是一門尤其重要的課程，在這門課

15、程的學習過程中，我和我的同學們都打下了很好的基礎。整個課程的安排十分合理，給我們許多親自動手實踐的機會；在遇到問題時，老師鼓勵我們積極思考，和我們一起討論，幫助我們解決問題。每一個小實驗的成功，對于我們這些"初生之犢"來說，都是一種莫大的鼓勵，鼓勵我們在科學研究中前進。 與此同時，我們在這門實驗課的學習中還培養(yǎng)了良好的合作意識和團隊精神。同學們齊心協(xié)力，一起動腦筋解決實驗中的問題。在今天的科研工作中，這些品質(zhì)讓我們能夠更好的融入到課題組這一個大家庭中，大家互相幫助，誰遇到了問題，大家一起討論，出謀劃策。同時，在討論的過程中，大家也能學到更多的知識。 生命科學學院

16、2002碩 細胞生物學專業(yè)王利敏 作為一名細胞所的二年級研究生，一年級所選修的分子生物學實驗課程對我的幫助是不可忽視的。在這個課程上，讓我初次接觸到了許多進行生物研究時必須具備的實驗技術(shù)以及一些基本技能，象電泳，蛋白質(zhì)印跡，PCR等等，這些實驗在幾乎每個人以后的工作中都會用到，我也不例外。而且這些實驗又不同于本科時，它不但是更復雜，還給了更多我們自己動手的空間和時間，一來能鍛煉大家的思考能力，比如我們自己設計引物來合成目的基因；還能鍛煉我們自己安排時間和一個實驗進度的能力，分子實驗一般周期比較長，學習如何合理地安排時間使之更有效的確對于今后自己實驗地安排大有裨益。總之，分子生物學實驗課程的確是

17、一門對今后實驗很有幫助地課程。 分子生物學實驗課程學習隨感陳暉時光荏苒，不知不覺中研究生生活已過去一年，進入實驗室也有快一年的時間了。大學時專業(yè)課的學習為我的科研工作打下的堅實基礎，而實驗課程尤其是分子生物學實驗的學習更讓我獲益匪淺。  分子生物學課程的學習讓我們初步建立了分子的概念，但核酸到底是什么樣子的，什么是PCR，什么是質(zhì)粒，什么是轉(zhuǎn)化，這些概念對于我們始終很抽象。是分子生物學試驗讓我們真正接觸了分子生物學，將那些抽象的概念變得具體，而不再是紙上談兵。在分子生物學試驗中我們學習到了分子生物學最基本的實驗技能，如感受態(tài)細胞的制備及轉(zhuǎn)化，質(zhì)粒DNA的提取及酶切

18、，植物總RNA的提取等等。這些技能的學習讓我在科研工作中很快能進入角色。在開始進入實驗室時，常會有種手足無措的感覺。但當看到那些熟悉的儀器，如微量移液器，培養(yǎng)箱，PCR儀等時，真有他鄉(xiāng)遇故知的感覺。而不需別人指導，運用實驗課上學到的知識成功地完成實驗，那種滿足感更是無法形容。至今還記得獨立提出要用的質(zhì)粒時的情形，師兄在夸獎之余將更多的工作放心地交給我，讓我們實驗的進展順利很多。不過最重要的是在分子生物學實驗學習的過程中，我們建立了整體大實驗的概念，這是在以往的實驗訓練中沒有的。以往的實驗如無機化學，有機化學等等，所涉及的通常只是某個數(shù)據(jù)的測定或某種物質(zhì)的提取，實驗持續(xù)的時間通常也就兩三個小時;

19、而分子生物學實驗，每次會持續(xù)一天時間。實驗設計得與科研比較相似，毫不夸張的講 ，每個實驗都可以直接用于科研。在這里我們學到了實驗設計的概念，不是單純的實驗技術(shù)的堆砌，而是根據(jù)自己的目的，有機的將各種方法組合起來。所有這些都是我們進入科研工作所必須的素質(zhì)。而老師的講解不會局限于某種技術(shù)，而是更偏重開拓思路，引導我們思考，從而達到舉一反三的目的。如在講解植物總RNA的提取時，采用的是白化的玉米葉子，所含糖類脂類比較少，此時老師會提出問題如果糖類多時又該如何改進提取的方法;書上所講的只是其中一種提取方法，是否還有其他的方法可以提純RNA。老師并不會直接給出這些問題的答案，而是要我們在課后自己查閱資料

20、。這一方面鍛煉了我們查閱文獻的能力，另一方面這些資料的積累成為科研工作時寶貴的一手材料，可以直接應用于科研。"授人以魚不如授人以漁"，老師們精心的講解常會給我們豁然開朗的感覺，學習到的不是單純的技術(shù)而是一種思路。感謝分子生物學實驗，感謝給予我們悉心教導的老師，是他們的工作使我們真正接觸到了分子實驗，并為將來進入科研工作打下了良好的基礎。 分子生物學實驗小結(jié)2001級生物科學專業(yè) 張皓彬做完半年的分子生物學實驗，感到它是一門非常好的課，在我們學習生物學的過程中占據(jù)著很大的分量。 首先，分子生物學是一門技術(shù)性很強的實驗，在實驗的過程中，某些小的失誤可能會對結(jié)果產(chǎn)生很大

21、的影響。所以對實驗中的操作是比較嚴格的，特別象無菌操作過程。在實驗中從儀器上來說我們接觸了大量的儀器，而且也學到了一些基本的實驗技術(shù)，這對我們將來從事相關(guān)工作有著非常大的幫助。 其次，分子生物學實驗中所含的知識和技術(shù)與理論知識結(jié)合的比較好，先學習了理論知識再去做實驗，這樣結(jié)合很好，而且我感覺分子生物學實驗是我們所做的實驗中一門設計到比較"高深"知識或新問題的實驗，能激發(fā)出我們對學習分子生物學理論與實踐的興趣。 最后，我認為最重要的是它給了我們學生一次自己設計實驗的機會。這是我們所做的實驗中唯一能給我們自己設計實驗機會的課。第一，整個過程中，我們在做完前面一些基本實驗后，再去

22、設計一個用自己所學到的知識技術(shù)的實驗，有了一個整體的了解，也是對一整套技術(shù)的回顧與應用。從設計中所要用到的試劑、儀器，到實驗中試劑的具體用量，儀器使用的具體參數(shù)，以及引物的設計和整個實驗的時間安排等等都要有明確的概念，可以說是給了我一次科學探究的機會。第二，設計實驗后我們自己去操作檢驗它的可行性，檢驗自己設計的實驗能不能夠成功，更重要的是整個過程對我們以后從事相關(guān)工作有著非常重要的幫助，所以這是非常有意義的。 總的來說，分子生物學實驗是一門非常好的實驗課程。 設計實驗和具體操作的感想生物科學2001級谷波2003.12.22設計階段：我們組原本的想法有點不切實際。我們打算在瑞士的一個

23、酶庫網(wǎng)站上找到一種酶，再從genenbank中找到這種酶的全序列，再自行設計引物。我們甚至下載了引物設計軟件。然而我們輸入某種酶某段功能片段的名稱卻從genebank中得到了成百上千序列，我們放棄了。只是從多篇文獻中找到一種酶的某段基因把它的引物和表達載體進行改造和改換，以符合老師提供的限制性內(nèi)切酶。而PCR的溫度與循環(huán)次數(shù)，及其余的各種步驟，僅僅是把是實驗書上的串聯(lián)在一起，并沒有考慮任何改動，更別提摸索實驗條件的部分了。當我們的老師講評時，我才了解到，我們的設計是多么的不充分，成功率有多低。 操作階段：通過實驗設計，我最大的收獲是有了串起已經(jīng)做過的實驗的思路，也明白了做重組的各個步驟的原理。

24、所以，當我拿到老師給的設計方案時，我的思路很清晰。然而具體的操作又暴漏出許多問題。首先是操作時不能做到提前思考，大家往往只會照方抓藥，不能事先想清楚為何要這樣做。這使我們常常忽略細節(jié)的地方，造成時間的浪費甚至結(jié)果不理想。比如我們把第二次回收時的重要數(shù)據(jù)遺失。特別是寫報告時，更會感覺到中間結(jié)果記錄的不詳細，以至分析原因時沒有具體的可依賴的結(jié)果做支持。還有就是中間各個步驟的現(xiàn)象，如果我們能從最基本的實驗時就觀察現(xiàn)象，之后再做重復或類似的實驗時，就能及時判斷實驗每一步的正確與否，便于及時糾正錯誤。最后是我們實驗時心態(tài)不夠正確，實驗就是要歷經(jīng)失敗和重復，不能面對不良結(jié)果時就急噪起來，不能心平氣和的繼續(xù)

25、下去，甚至失去探索的動力。每當我們進度落后時，大家常常焦急的追趕其它組，往往造成不該出現(xiàn)的錯誤或遺漏。 實際操作不同于理論學習，它要求我們事事親臨，面面俱到，并且積累經(jīng)驗，這樣才能從細微處窺探整個實驗的成敗。這正應了老師所說："我們需要心靈，手巧，兼肯干的學生"心靈有賴于勤思考，手巧還需要多實踐總結(jié)，肯干則要求我們持之以恒，腳踏實地我們會朝這個方向努力的。 生命科學學院2002碩 神經(jīng)生物學專業(yè)馬駿我是神經(jīng)生物學專業(yè)研二的學生。我在研一時選修了分子生物學實驗課，在一個學期的學習中所獲甚多。分子生物學實驗我們主要做的大實驗包括感受態(tài)的制備、質(zhì)粒的提取及鑒定、蛋白在大

26、腸桿菌中的表達。我們在本科和研一的時候?qū)W習了分子生物學的理論知識，但通過大實驗親身實踐后才更深刻的理解了這些理論知識，并且在遇到問題解決問題的過程中，了解了這些知識用于實驗時應注意的細節(jié)。通過系統(tǒng)科學的實驗，我還了解了實驗規(guī)劃和實驗安排的重性。分子生物學大實驗鍛煉了我的實驗操作技能，培養(yǎng)了我耐心細致的實驗習慣，這都有益于我現(xiàn)在所進行的課題研究，避免了走彎路，提高了實驗效率。所以我認為在進行正式的課題研究之前進行分子生物學大實驗的學習是很必要的。師弟師妹們請認真學習：） 實驗心得      我是北京師范大學生命科學學院生物化學

27、與分子生物學專業(yè)2002級的碩士研究生，在研一第一學期參加了分子生物學實驗課程。這門課程將分子生物學實驗操作的理論與實踐相結(jié)合，不僅使我在分子生物學實驗技能方面得到系統(tǒng)的訓練，而且讓我對具體實驗操作的原理有了清晰地認識。尤為難得的是，作為一門實驗課，它還鍛煉了我運用已學到的理論知識和已掌握的實驗技能綜合解決科學問題的能力。這些都為我之后研究生階段的工作做了必要的準備，打下了良好的基礎。 這門課程開設的實驗以綜合性為主，涵蓋面廣，幾乎包括一般分子生物學研究會涉及的所有內(nèi)容：最基本實驗技術(shù)，如瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA；基因克隆所要用到的技術(shù)，如質(zhì)粒提取、DNA重組及重組子篩選、細菌感受態(tài)的制備及轉(zhuǎn)

28、化、外源基因的誘導表達等；還有一些其他的常用技術(shù)，如動、植物基因組DNA的提取、植物總RNA的提取、PCR擴增、蛋白質(zhì)印跡、Southern雜交等。 我研究生階段的一部分工作是要將外源基因通過農(nóng)桿菌介導的方法轉(zhuǎn)入植物中，并鑒定轉(zhuǎn)化是否成功。首先要用到質(zhì)粒提取、DNA重組等技術(shù)來構(gòu)建插入有外源基因的表達載體。轉(zhuǎn)化植物成功后，就需要提取植物基因組DNA及總RNA，利用PCR擴增、Southern雜交、RT-PCR、蛋白質(zhì)印跡等技術(shù)，對外源基因進行不同水平的鑒定。 正是因為分子生物學實驗課對基本原理的詳細講解、對實驗技能的系統(tǒng)訓練，使我在工作中比較容易上手，工作進度也有了保證。另外，通過在這門課上系

29、統(tǒng)地、全面的學習，也使我在工作需要學習新的實驗技術(shù)時，觸類旁通，比較容易理解消化。 分子生物學實驗課程如何應用于科研之我見生命科學學院 生物化學與分子生物學專業(yè) 2003研 李彥杰 作為一名生物化學與分子生物學專業(yè)一年級的研究生，在生命科學領域5年的求知探索中，我深切體會到這期間學習的各門課程，包括生物化學、分子生物學、細胞生物學、遺傳學、生理學，尤其是分子生物學實驗課程，對培養(yǎng)我今后獨立進行科研，及提高科研能力、拓寬科研思路是不可或缺的。由于它所包含的內(nèi)容與科研連接最直接，最緊密，不僅教給我們實驗的技術(shù)方法，還教給我們設計實驗的思路及科研中必不可少的合作精神，可以說是生物科研最重要

30、的基礎課之一。 生物學方面的科研離不開我們在分子生物學實驗課程中學到的技術(shù)和方法，而為了達到同一個實驗目的可用的技術(shù)與方法常常不止一種，如何選擇最合適的方法以取得最佳實驗結(jié)果其實就是靈活應用分子生物學實驗所學于科研的過程。以下是結(jié)合我的課題的一點粗淺體會。我的科研課題是小鼠腦紅蛋白及突變體的設計、融合表達、蛋白純化及結(jié)構(gòu)、性質(zhì)測定，基本的流程是從小鼠腦組織中提取總RNA，設計帶有合適酶切位點的引物，利用RT-PCR技術(shù)獲得雙鏈cDNA，再將雙鏈cDNA雙酶切的產(chǎn)物與同樣經(jīng)雙酶切的GST融合表達載體pGEX-4T-3相連，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21感受態(tài)細胞，在2YT培養(yǎng)基中表達，過GST親和層析柱初

31、純蛋白，凝血酶酶切獲腦紅蛋白和谷胱苷肽硫轉(zhuǎn)酶，再經(jīng)Sephadex-G75分子篩層析柱分離，得到電泳純的腦紅蛋白，冷干保存。 從第一步提取總RNA到轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞，這些步驟全都是分子生物學實驗課上學習過的基本實驗方法，比如核酸電泳、蛋白電泳、PCR、構(gòu)建載體、感受態(tài)制備、轉(zhuǎn)化等，由于這些技術(shù)已經(jīng)在分子生物學實驗課上系統(tǒng)學習并親身操作，因此在科研中使用這些技術(shù)時就能駕輕就熟。 但又不能完全照搬課本，有時需要根據(jù)實驗過程中出現(xiàn)的具體問題對方法進行改良，添加適合的步驟或刪減不需要的步驟。例如分子生物學實驗中檢驗總RNA提取效果采用的是甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳法，甲醛的作用是使RNA酶變性，阻止其降解R

32、NA，電泳結(jié)果能否出現(xiàn)18S和28S的條帶能說明RNA 的主要成分rRNA是否完整，而我的課題中提總RNA的目的是需要其中的mRNA作為模板進行逆轉(zhuǎn)錄PCR，因此電泳檢測只有相對意義，所以只用一般的電泳采用稍高的電壓即可。設計RT-PCR引物過程中，嚴格按照分子生物學實驗課程所學的PCR原理部分進行設計，設計出的引物滿足引物長度1530bp、G+C含量4050、堿基隨機分布和引物3'端與模板嚴格配對這幾個基本要求。但實驗結(jié)果表明用oligodT做第一輪引物能擴增成功，而用特異性引物則擴增失敗，分析原因可能是RNA二級結(jié)構(gòu)嚴重，因此需要消除RNA二級結(jié)構(gòu)，使特異性引物能與模板緊密結(jié)合，采用擴增前將模板在65保溫10分鐘的方法成功解決了這一問題。目前我的課題已經(jīng)進行到蛋白純化步驟，分子生物學實驗課上所學幫助我順利完成實驗的上游即分子生物學階段的初步工作。分子生物學實驗課的收獲及其在實際科研中的應用生命科學學院生物化學與分子生物學專業(yè)03級碩研 白 巍"對一名生物化學與分子生物學專業(yè)的研究