電穿孔SCIENTZ2C說明書

1、SCIENTZ-2C基因?qū)雰x使用說明書寧波新芝生物科技股份有限公司地址：寧波市科技園區(qū)木槿路65號(hào)315013電話：0574-8713480787133995傳真ttp/：SCIENTZ-2C基因?qū)雰x使用說明書一、概述高壓脈沖基因?qū)雰x，廣泛用于植物、動(dòng)物和各種微生物的各類細(xì)胞電穿孔，可以進(jìn)行細(xì)胞雜交、細(xì)胞融合，基因?qū)氲难芯?。本系統(tǒng)結(jié)構(gòu)緊湊，采用電腦(CPU) 控制, 使用方便,安全可靠。注意：1. 本儀器為高壓裝置，使用儀器前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書，必須按說明書方法安裝和使用。 2 .在各項(xiàng)準(zhǔn)備工作完成后再開機(jī)，使用完后須及時(shí)關(guān)機(jī), 避免長(zhǎng)時(shí)間空開；充完電后，應(yīng)

2、及時(shí)進(jìn)行導(dǎo)入操作或者放電，避免長(zhǎng)時(shí)間處于充電狀態(tài)。 3 .防止液體溢出灑在儀器上。二、原理儀器的組成本儀器由SCIENTZ-2C基因?qū)雰x主機(jī)和基因?qū)氡皩Ｓ眠B接線等組成。電路構(gòu)成由控制電源、高壓電源、高壓整流、儲(chǔ)能電容（有高壓電容和低壓電容）、并接電阻、充放電回路、CPU控制、顯示電路以及導(dǎo)入杯（溶池）等部分組成。電子開關(guān)電子開關(guān)如圖： 高壓電源 高壓整流 電子開關(guān) 高壓儲(chǔ)能電容 儲(chǔ)能電路 放電回路 導(dǎo)入杯高壓儲(chǔ)能電容電源 分壓取樣 CPU控制電路 并接電阻選擇 控制電源 CPU控制電路顯示電路 工作原理導(dǎo)入杯（溶池）內(nèi)放置經(jīng)過適當(dāng)處理的細(xì)胞溶液（含基因），接入儀器的高壓脈沖輸出端，選擇適

3、當(dāng)?shù)碾娔芰浚ǎ河蓛?chǔ)能電容和儲(chǔ)能電壓的平方乘積確定），選擇適當(dāng)?shù)姆烹娮杩梗ㄒ訰C放電時(shí)間常數(shù)作參考）以瞬間放電（指數(shù)式衰減）的形式可逆擊穿細(xì)胞壁，達(dá)到基因?qū)爰?xì)胞之目的。 三、技術(shù)參數(shù)1、儲(chǔ)能電容A.高壓儲(chǔ)能電容：1F、5F、25F 以及它們的組合如6F、26F、30F和31F共七檔，自由設(shè)置；B.低壓儲(chǔ)能電容：25F、50F、100F、200F、400F、800F以及它們的組合如125F、150F、175F、200F -直至1575F共63檔自由設(shè)置. 最小25F, 以25F為步長(zhǎng)遞進(jìn)；2、儲(chǔ)能電壓A.使用高壓儲(chǔ)能電容時(shí)，儲(chǔ)能電壓可從401V2500V，自由設(shè)置,精度為1V；B.使

4、用低壓儲(chǔ)能電容時(shí)，儲(chǔ)能電壓可從10V400V，自由設(shè)置，精度為1V；3、放電并接電阻：50(固定)、50、100、200、400、800和以及它們的組合如50、100、150 直至1600共32檔，自由設(shè)置。最小50最大1600, 以50步進(jìn). 另有無窮大檔可供選擇.4、使用電源：?jiǎn)蜗?20V，50HZ，100W。靜態(tài)RC放電時(shí)間常數(shù)（RC理論值，忽略細(xì)胞溶液阻抗）以下測(cè)試條件（低壓：300V，高壓：2000V）RC(ms)R()C(mf)1.05.025.010020040060080010001500 500.050.251.255102030405075 1000.100.502.510

5、20406080100150 2000.201.05.0204080120160200300 3000.301.57.53060120180240300450 4000.402.010.04080160240320400600 5000.502.512.5501002003004005007506000.603.015.0601202403604806009007000.703.517.57014028042056070010508000.804.020.080160320480640800120010001.005.025.01002004006008001000150015001.507.

6、537.5150300600900120015002250 （注：在高壓放電時(shí)，實(shí)際的RC常數(shù)要遠(yuǎn)小于上表的參考值）四、儀器面板、后板結(jié)構(gòu)及功能1.前面板2.后面板電源插座五. 參數(shù)設(shè)置步驟（一）開機(jī)后液晶LCD顯示0，此時(shí)按“C”鍵進(jìn)入設(shè)置界面（如下圖所示）圖5.1 按“C”后進(jìn)入設(shè)置界面（二）參數(shù)設(shè)置、電壓參數(shù)設(shè)定（U） a.進(jìn)入設(shè)置界面后，按電壓設(shè)置鍵“U”，進(jìn)入電壓設(shè)置窗口（如下圖所示）， 可以輸入所需的電壓值。 b.按“PT”鍵確認(rèn)（參數(shù)被確認(rèn)后，電壓數(shù)組中會(huì)出現(xiàn)“.”）。如輸錯(cuò)可按“0”按鈕清除數(shù)據(jù)后，重新輸入再次按“PT”鍵確認(rèn)即可；或者多次按“0”鍵，直至顯示區(qū)域只顯示0；圖5

7、.2_1 設(shè)置電壓第二組參數(shù)200V，按“PT”調(diào)用 c.在電壓設(shè)置界面中，可按“U”鍵來切換預(yù)存參數(shù)（U1到U5共5組參數(shù)），按“PT”鍵即可調(diào)用（參數(shù)被調(diào)用后，電壓數(shù)組中會(huì)出現(xiàn)“.”）； d.被調(diào)用的該組參數(shù)，經(jīng)過導(dǎo)入動(dòng)作后，會(huì)覆蓋原先改組的參數(shù)，下次只需調(diào)用該組參數(shù)，而無需再此輸入、電阻參數(shù)設(shè)置（R） 按“R”鍵進(jìn)入電阻參數(shù)設(shè)置，設(shè)置基本設(shè)置方法，跟電壓設(shè)置方法一樣，設(shè)置范圍為501600歐姆（每50歐步進(jìn)）電阻也R1R5五組參數(shù)，也可保存和調(diào)用預(yù)存參數(shù)；、電容參數(shù)設(shè)置（C） 按“C”鍵進(jìn)入電容參數(shù)設(shè)置，設(shè)置方法同上，電容設(shè)置分為高壓儲(chǔ)能電容和低壓儲(chǔ)能電容兩種（具體設(shè)置方法再下文設(shè)定數(shù)據(jù)

8、的范圍介紹）（三）、設(shè)定數(shù)據(jù)的范圍電壓、電容和電阻三個(gè)參數(shù)的設(shè)定范圍各不相同，下面分別作說明。（四）導(dǎo)入操作、電壓（U）電阻（R）電容（C）設(shè)置完后，就可以按“RD”鍵進(jìn)行儲(chǔ)能(過程如下圖所示) 圖5.2_2 存能過程（從1%到99,當(dāng)?shù)竭_(dá)99%即表示儲(chǔ)能完成）5、儲(chǔ)能完成（界面顯示“L 99”），按“RD”即進(jìn)行導(dǎo)入動(dòng)作6、導(dǎo)入動(dòng)作后，界面會(huì)顯示本次導(dǎo)入時(shí)間（時(shí)間常數(shù)），如下圖所示圖5.2_3 時(shí)間常數(shù)顯示5、導(dǎo)入動(dòng)作后，需按“U”鍵返回到設(shè)置狀態(tài)中，來進(jìn)行新的設(shè)置；如無需根改參數(shù)，直按“RD”鍵，儀器按前一次設(shè)置進(jìn)行儲(chǔ)能注意事項(xiàng)：1、每一個(gè)數(shù)字鍵按下都有“嘀”的聲音提示，如沒有聲音則表示按

9、鈕并未完全按下，輸入無效。2、如聽到“嘀”、“嘀”兩聲提示音則表示輸入數(shù)據(jù)超出范圍需重新輸入（在設(shè)定電容、電阻參數(shù)時(shí)）。六、使用注意事項(xiàng)1、儀器若長(zhǎng)期未使用在重新使用時(shí)，應(yīng)先低壓充電、放電，逐步升高電壓，直至額定值。在儀器使用時(shí),應(yīng)先通電予熱10-15min,設(shè)置數(shù)據(jù),進(jìn)行幾次充電放電空操作后,才可正式進(jìn)行導(dǎo)入操作。2、儀器的輸出連接線、接線座等處在放電時(shí)有高電壓、大電流存在。故在使用時(shí)，應(yīng)避免與人體、導(dǎo)體（如液體）或易受干擾的電器等接觸、靠近。3、 儀器內(nèi)有高電壓（2500V）存在，非專業(yè)人員，不得打開檢修。如有故障請(qǐng)與我單位有關(guān)技術(shù)人員聯(lián)系。4、 實(shí)驗(yàn)中如果出現(xiàn)溶池發(fā)生弧光,溶液爆濺出來說

10、明電壓設(shè)置太高或電容太大,應(yīng)相應(yīng)降低電壓、電容的設(shè)置值。七 新芝基因?qū)雰x實(shí)驗(yàn)參考技術(shù)參數(shù)品種電壓電容電阻導(dǎo)入盒轉(zhuǎn)化率反饋用戶名酵母1200-1500V25µF200-4002mm2.2-3.2*102cfu/ug DNA上海肺科醫(yī)院大腸桿菌1250V5µF400-10001mm107-108cfu/ug DNA清華大學(xué)大腸桿菌1100V10µF5001mm2500cfu/ug DNA清華大學(xué)大腸桿菌1500V25µF4002mm2500cfu/ug DNA左右解放軍總醫(yī)院羊細(xì)胞250V500µF5004mm102cfu/ug DNA中科院發(fā)育

11、所畢赤酵母1500V25µF4002mm1.8x103cfu/ug DNA華東師范大學(xué)枯草芽孢桿菌1250V25µF4002mm102cfu/ug DNA華東師范大學(xué)（因各單位實(shí)驗(yàn)條件不盡相同，以上實(shí)驗(yàn)參數(shù)僅供參考）八 操作過程1、按上圖所示，連接好儀器電源、導(dǎo)入盒（接輸出插孔）等。 2、將配有相應(yīng)細(xì)胞液的導(dǎo)入杯裝入導(dǎo)入盒內(nèi)（細(xì)胞液一般用雙重去離子水價(jià)甘露醇或葡萄糖等，濃度為10%20%，電阻在3千歐左右）。3、 打開電源開關(guān)，儀器通電，顯示器有顯示。按“參數(shù)設(shè)置步驟”的方法。設(shè)置實(shí)驗(yàn)所需的技術(shù)參數(shù)時(shí)然后按RD鍵按一下即可，當(dāng)屏幕中充電進(jìn)度顯示“99”時(shí)，按RD鍵進(jìn)行導(dǎo)入，

12、聽到鋒鳴器響聲后，此時(shí)顯示屏顯示的是時(shí)間常數(shù)。電腦便進(jìn)行儲(chǔ)能電壓, 儲(chǔ)能電容, 放電電阻的選取及對(duì)所選定的儲(chǔ)能電容充電,當(dāng)充電電壓穩(wěn)定到所設(shè)置的電壓值后, 按RD鍵進(jìn)行導(dǎo)入，立即向輸出端(包括導(dǎo)入盒和所選定的放電電阻的并聯(lián)電路)釋放高壓脈沖，進(jìn)行有一定時(shí)間常數(shù)的放電過程，即電擊穿、融合、導(dǎo)入過程。（選擇儲(chǔ)能電壓值、電容值和放電電阻值，是為了選取恰當(dāng)?shù)碾娔芰亢头烹姡≧C）時(shí)間常數(shù)，以期獲得剛好使細(xì)胞壁可逆擊穿，基因?qū)肴诤系淖罴研Ч?。這是十分重要的。因?yàn)橛绊懸蛩睾芏啵氆@得高的轉(zhuǎn)換率，必須依靠自己長(zhǎng)期實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的積累。）4、 若需二次放電，只要按U，然后再次按RD鍵即可。若要修改參數(shù)，則重復(fù)上述

13、（3）的操作過程，可獲得多次放電效果。5、 若停止使用，可關(guān)電源開關(guān)，切斷輸入電源，取出導(dǎo)入杯。為安全起見，應(yīng)在關(guān)斷電源后，再取出為妥。九、大導(dǎo)入（參考資料） 用基因?qū)雰x進(jìn)行基因轉(zhuǎn)化很有效。用生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞，可使1ug質(zhì)粒DNA材料E coli單菌落LB培養(yǎng)基10%冰冷的甘油(丙三醇)Scientz-2C基因?qū)雰x含抗菌素的LB平板冰水SOC培養(yǎng)基(0.5%酵母提取物,2%蛋白胨,10mmol/L Nacl,20mmol/L MgSO4,25mmol/L KCl,20mmol/L葡萄糖,10mmol/L MgCl2)（2） 方法將培養(yǎng)物在冰水中放置30分鐘使細(xì)胞停止生長(zhǎng)，然后倒入預(yù)冷的離心管

14、中，在4下5000g離心10分鐘，棄去上清液。（3） 用100ml預(yù)冷10甘油重懸細(xì)胞，4 5000g離心10分鐘，棄去上清液。（4） 重復(fù)步驟（3）。（5） 用5-10ml預(yù)冷10甘油重懸細(xì)胞，100-200µl/管分裝于無菌的1.5ml eppendorf管中，保存于-80。注意（1）該法的關(guān)鍵是用適當(dāng)?shù)碾妷?、電容值和適當(dāng)時(shí)間常數(shù)的電脈沖。用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)胞進(jìn)行的轉(zhuǎn)化效率比穩(wěn)定生長(zhǎng)期的細(xì)胞高。（2） 該法的優(yōu)點(diǎn)是：轉(zhuǎn)化效率高。尤其對(duì)一些較大的質(zhì)粒，采用該法可獲得較好的結(jié)果。實(shí)踐已經(jīng)證明，當(dāng)質(zhì)粒達(dá)14kb時(shí)，轉(zhuǎn)化效率不會(huì)產(chǎn)生明顯下降。（3） 釋放電脈沖，取出導(dǎo)入杯立即加入1mlSOC

15、培養(yǎng)基，并用吸管將菌液轉(zhuǎn)至無菌的小管中。在37下，緩慢振蕩培養(yǎng)30-60分鐘。（4） 將上述轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)液涂于抗菌素的LB平板上。實(shí)驗(yàn)結(jié)果（使用Scientz-2C基因?qū)雰x） 材料: PUC18質(zhì)粒1UL 0.1UGDNA 轉(zhuǎn)化率 BL 21 2-3×10 JM 109 2-3×10 DH 5a 1×10 HB 101 2-3×10 應(yīng)用舉例條件：導(dǎo)入杯2mm (一次性使用) 電壓 2.5kv 電容 25uf 電阻 400-1000PUC 18質(zhì)粒轉(zhuǎn)化率（BL 21菌株） 電 阻 400 800 1000 轉(zhuǎn)化率 1×10 1.5×10 2-3×10 十、裝 箱 清 單1、SCIENTZ-2C基因?qū)雰x主機(jī) 1臺(tái)2、保險(xiǎn)管3A 2只3、質(zhì)量保證書（保修卡） 1份4、合格證 1份5、使用說明書 1份6、2mm基因?qū)牒校ㄟM(jìn)口） 1只7、電源線及連接線 各1副Scientz-2C基因?qū)雰x簡(jiǎn)易實(shí)驗(yàn)步驟1、收集細(xì)胞：用胰酶消化細(xì)胞，將細(xì)胞培養(yǎng)液吸入到15ml離心管中，分為6管，900rpm 5min，棄其上清。