高效液相色譜使用詳細(xì)操作步驟-

1、高效液相色譜使用操作步驟一、泵操作面板PUM P:運(yùn)行鍵 START:梯度運(yùn)行鍵 PURGE:快沖鍵RESET:復(fù)位鍵 HOLD:程序暫停鍵 STOP:泵停止鍵TIME:程序開啟鍵 FLOW:流速: RSVR: A B C PROG:程序 DEL:刪除程序 PMAX:最大壓力PMIN:最小壓力 ENTER:確定TIME 0 FLOW ENTER (設(shè)置流速TIME 0 RSVR ABC ENTER (設(shè)置溶劑TIME 0 PROG ENTER (設(shè)置程序TIME 0 % A 30 ENTER (設(shè)置比例TIME 0 % B 30 ENTER (設(shè)置比例TIME 0 % C 40 ENTER (

2、設(shè)置比例DEL PROG 1 ENTER (刪除程序1.對于梯度泵設(shè)定舉例如下:(人參皂苷的梯度TIME 0 PROG 1 ENTERTIME 0 % A 81 ENTERTIME 15 % A 81 ENTERTIME 60 % A 65 ENTERTIME 65 % A 0 ENTERTIME 80 % A 0 ENTERTIME 81 % A 81 ENTERTIME 100 % A 81 ENTER因?yàn)锳+B之和始終是100%,所以B相就不用設(shè)了。7.對于對照品在這種條件下只要對照品的峰全部出完后按下RESET鍵等20分鐘即可進(jìn)第二針進(jìn)完針后按START 鍵運(yùn)行梯度程序。但是對樣品來說

3、一定要等峰出完后再按下RESET鍵等基線基走直才可進(jìn)下一針。二、檢測器操作面板RESET:復(fù)位鍵 A/Z:調(diào)零鍵 WL:調(diào)波長 ENTER:確定三、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作1、實(shí)驗(yàn)前流動(dòng)相提前配好過濾脫氣。2、置換流動(dòng)相時(shí)把泵的濾頭從原來的流動(dòng)相中換到新的流動(dòng)相中濾頭要輕拿輕放。3、液路排氣順序:首先打開排氣閥按PURGE鍵進(jìn)行排氣結(jié)束后按STOP鍵停止再擰緊排氣閥按PUM P鍵讓泵運(yùn)行。4、打開檢測器首先觀察右上角氘燈指示燈確認(rèn)氘燈是否點(diǎn)亮,按WL鍵調(diào)好實(shí)驗(yàn)波長后按A/Z鍵調(diào)零。5、打開電腦打開在線工站選擇對應(yīng)的通道,輸入實(shí)驗(yàn)信息、方法、包括采樣控制,積分和儀器條件,積分面積外標(biāo)法測絕對含量歸一法相

4、對含量內(nèi)標(biāo)法測絕對含量;后點(diǎn)數(shù)據(jù)采集,將電壓調(diào)到-2020,時(shí)間調(diào)到030,點(diǎn)零點(diǎn)校正后再點(diǎn)查看基線,大約1個(gè)小時(shí)左右基線基本穩(wěn)定(就是基本成直線,因?yàn)闄z測器打開后需要一定的穩(wěn)定時(shí)間,檢測器基本穩(wěn)定泵里面的流動(dòng)相同時(shí)也就置換好了,就可以進(jìn)樣了。6、進(jìn)對照品:對照品配成溶液后要過濾再進(jìn)樣等對照品的峰出來以后點(diǎn)停止采集輸入文件名后保存。(一般連進(jìn)三針為準(zhǔn)7、進(jìn)樣品:樣品配成溶液后要過濾再進(jìn)樣等樣品的峰出來以后點(diǎn)停止采集輸入文件名后保存。8、進(jìn)樣閥搬閥順序搬到LOAD位置時(shí)進(jìn)針打完針后搬到INJECT位置進(jìn)樣要求打針勻速輕快搬閥輕快每次基本一樣,外標(biāo)法進(jìn)樣量是定量管的四五倍。9、用以下公式算出樣品含

5、量:C標(biāo)/C樣=S標(biāo)/S樣10、做校正曲線:打開離線點(diǎn)打開打開對照品的譜圖點(diǎn)積分方法(選用面積外標(biāo)法點(diǎn)組分表點(diǎn)全選輸入所需要對照品的峰名點(diǎn)采用點(diǎn)校正點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)含量輸入含量(可以是對照品的濃度也可以是百分?jǐn)?shù)OK點(diǎn)加入標(biāo)樣再次打開剛才打開的對照品的譜圖校正完畢點(diǎn)峰名看校正曲線圖點(diǎn)輸出取名保存。11、計(jì)算樣品的含量:打開離線-打開樣品的譜圖-點(diǎn)預(yù)覽點(diǎn)加載加載剛才對照品的校正曲線譜圖即可得出樣品的含量四、液相色譜儀注意事項(xiàng):1、泵正常工作時(shí),在流動(dòng)相和流速不變的前提下柱壓應(yīng)該是穩(wěn)定的,當(dāng)然在換流動(dòng)相時(shí)壓力變化是正常的,正常情況下如果柱壓升高基本上都是由色譜柱使用時(shí)間長引起的(只有更換色譜柱,如果正常情況下

6、壓力突然降低有可能是(1接頭處有漏液的地方,采取的方法是有濾紙檢查,如有漏液的地方用扳手?jǐn)Q緊即可。如果沒有漏液則可能是(2白色的管子里面有氣泡從而導(dǎo)致流動(dòng)相進(jìn)不到泵里面去,采取的方法是排氣泡排氣時(shí):先STOP停泵打開排氣閥按PURGE(快沖鍵等氣泡排完后先STOP停泵擰緊排氣閥,其先后步驟不要搞反了。2、泵正常工作時(shí)最高壓力最好不要超過200KG,所以打開泵以后可以將泵的最大壓力調(diào)到200KG,這樣如果壓力超過上限則會(huì)自動(dòng)報(bào)警停機(jī),流速最好不用超過1ML/MIN,如果使用時(shí)壓力超過200KG,建議將流速調(diào)低點(diǎn)以降低壓力(在色譜柱正常的情況下,如果是因?yàn)樯V柱長時(shí)間使用造成壓力升高則建議更換色譜

7、柱(因?yàn)樯V屬于耗材長時(shí)間使用就需要更換,更換的主要依據(jù)色譜柱出峰不正?；蛘咧鶋毫^高。3、泵正常工作時(shí)平均每15天左右向注油孔加潤滑油23滴。4、流動(dòng)相里面如果有鹽或酸類,做完實(shí)驗(yàn)后要先用95%二次蒸餾水與5%甲醇洗色譜柱40分鐘左右,然后用純甲醇洗30分鐘左右才可以關(guān)機(jī)。第二天如果繼續(xù)做實(shí)驗(yàn)流動(dòng)相里面仍舊有鹽或酸類,最好先用95%二次蒸餾水與5%甲醇過度20分鐘,再用流動(dòng)相。如果流動(dòng)相里面只有甲醇,水,乙腈。做完實(shí)驗(yàn)后就不用95%二次蒸餾水5%甲醇沖洗,可直接用純甲醇洗30分鐘即可關(guān)機(jī)。5、C18色譜柱的耐酸PH值范圍38使用時(shí)不要超出。6、儀器長期不用時(shí)一定要將濾頭泡在甲醇里半月開機(jī)一次,如果開機(jī)時(shí)泵抽不上液可以打開排氣閥按PURGE快沖。7、調(diào)反壓器時(shí)要注意等液體流出來以后