標(biāo)本制備區(qū)工作制度標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件

1、標(biāo)本制備區(qū)工作制度標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件1 . 目的： 規(guī)范樣本處理區(qū)的配置、功能、內(nèi)務(wù)管理等。2 .適用范圍：PCR實(shí)驗(yàn)室。3負(fù)責(zé)人：操作人：4細(xì)則：4.1 配置：冰箱一臺(tái)，生物安全柜一臺(tái)，臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)一臺(tái)，混勻器一臺(tái)，加樣器一套，可移動(dòng)紫外燈？一臺(tái)， 電熱恒溫水浴箱？一臺(tái)，空調(diào)一臺(tái)，其它耗品、辦公用品若干。4.2 功能：本區(qū)負(fù)責(zé)各種標(biāo)本、質(zhì)控樣品的核酸提取純化，儲(chǔ)藏，樣本貯存。4.3 內(nèi)務(wù)管理：a. 著裝和標(biāo)識(shí)：本區(qū)工作服、專用設(shè)備均以藍(lán)色？ 為標(biāo)識(shí)。b. 驗(yàn)人員進(jìn)入該區(qū)須穿本區(qū)專用藍(lán)色 工作服。實(shí)驗(yàn)中須戴一次性手套（手套需常更換）、 鞋套或本區(qū)專用拖鞋。c. 從傳遞窗中取出試劑放入冰箱試

2、劑存放專區(qū)暫存。d. 記錄溫濕度計(jì)讀數(shù)和冰箱的溫度計(jì)讀數(shù)。（本區(qū)每天在工作前利用本區(qū)的溫控設(shè)備使溫度控制在15- 25之間）e. 核對(duì)標(biāo)本的編號(hào)、類型和標(biāo)本數(shù)量。f. 按試劑盒要求進(jìn)行標(biāo)本的裂解和提取處理，在生物安全柜上進(jìn)行加樣，加樣后低12000rpm 離心數(shù)秒。g. 使用本室專用的經(jīng)過無菌處理的加樣器和帶濾芯的吸頭。h. 使用過的離心管、吸頭須置于盛有5%施康消毒液的廢液缸中。i. 使用帶有本室標(biāo)識(shí)的記錄本、紙和筆。其他區(qū)的用品不得帶入本室。j. 患者標(biāo)本應(yīng)按有生物傳染性危險(xiǎn)品對(duì)待。k. 標(biāo)本處理完成后，關(guān)閉所有儀器，記錄運(yùn)行狀態(tài)。l. 走出標(biāo)本處理區(qū)，在緩沖區(qū)脫下專用工作服，將手套、鞋套

3、置于專用污物桶中。m. 實(shí)驗(yàn)完畢打開紫外燈消毒60 分鐘。4.4 核酸提取操作規(guī)程本實(shí)驗(yàn)室使用江蘇碩世的核酸提取試劑取200以l樣品于1.5ml離心管中加入400以l Lysis Buffer,振蕩混勻，室溫孵育10分鐘加入450以l Binding Buffer （已加無水乙醇），振蕩混勻?qū)?00以l混合液移至一新吸附柱中，4 C 12000rpm ,離心1 分鐘；棄廢液，將吸附柱放入同一收集管中將剩余混合液移至吸附柱中，4 12000rpm ， 離心 1 分鐘；棄廢液，將吸附柱放入新收集管中力口入400以l WB1 , 4 c 12000rpm,離心30秒；棄廢液，將吸附柱放入同一收集管中加入600以l WB2 （已加無水乙醇），4 c 12000rpm,離心30 秒；棄廢液，將吸附柱放入同一收集管中4 12000rpm ，空柱離心3 分鐘將吸附柱放入新離心管中,在吸附柱膜中央小心加入50以lElution Buffer, 室溫靜置2-5 分鐘