甲胎蛋白操作規(guī)程sop

1、杭州余杭邦爾醫(yī)院檢驗科免疫室項目SOP文件文件編號：YHBE5-JYK-MYS-002標準操作規(guī)程 甲胎蛋白測定編制人：劉鳳婷生效日期：2018年1月1日審核人：鐘劍版本號/修訂號：1/4批準人：張延亮發(fā)布部門：檢驗科頁碼數(shù)：5-8頁甲胎蛋白測定標準操作規(guī)程1 檢驗申請單獨檢驗項目中請：甲胎蛋白測定（縮寫 AFP;組合項目中請：月中瘤標志物 檢查。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗申請。2標本采集與處理2.1 標本采集2.1.1 常規(guī)靜脈采血約2ml,不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空采血管。也可采集血漿標本，用肝或 EDTAK凝。2.1.2 檢驗申請單和血標本試管標上統(tǒng)一且唯一的標識符。2.1

2、.3 急診標本采集后，在檢驗申請單上填寫標本采集時間。2.1.4 標本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責標本的接收 并記錄標本的狀態(tài)，對不合格標本予以拒收。2.1.5 下列標本為不合格標本2.1.5.1 標本量不足：少于 0.3ml的全血標本，或少于 0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2 對反應吸光度有干擾的標本，包括嚴重溶血、嚴重渾濁的標本。2.1.5.3 無法確認標本與申請單對應關系的。2.1.5.4 其他如標識涂改、標本試管破裂等。2.2 標本保存2.2.1 接收標本后在60min內(nèi)將標本離心分離出血清（漿），避免溶血。離心必 須達到4000rpmx 15min,離心后的

3、血清中不能含有顆粒物或微量纖維蛋白。2.2.2 標本保存時間：室溫（1525C）下可穩(wěn)定 8h,普通冰箱中（28C） 穩(wěn)定2d,在-20 C最多可保存4周。避免反復凍融。2.2.3 已完成測試的標本保持完整的識別號，置 48c冰箱內(nèi)保存7d。2.3 標本采集的注意事項2.3.1 采血前使受檢者保持平靜、松弛、避免劇烈活動。3方法原理甲胎蛋白測定采用雙位點加心化學發(fā)光免疫分析法，其檢測原理來如下：第一步：將標本與包被著AFP單克隆抗體的超順磁性磁珠和另外一種小鼠 AFP 單克隆抗體-堿性磷酸酶標記物添加到反應管中，經(jīng)過孵化，標本中的AFP和包被在磁珠上的AFP抗體結合，同時AFP抗體-堿性磷酸酶

4、標記物與樣本中同一 AFP 上不同的抗原結合位點結合。在反應管內(nèi)孵化完成后，結合在固相上的物質將之 與一個磁場內(nèi)被吸住，洗去未結合的物質。第二步：將化學發(fā)光物添加到反應管內(nèi)，發(fā)光底物（AMPPD被堿性磷酸酶所分解，脫去一個磷酸基，生成一個不穩(wěn)定的中間產(chǎn)物，該中間產(chǎn)物通過分子內(nèi)電 子轉移產(chǎn)生間氧苯甲酸甲酯陰離子，處于激發(fā)態(tài)的問氧苯甲酸甲酯陰離子從激發(fā) 態(tài)返回基態(tài)時，產(chǎn)生化學發(fā)光，再通過光電倍增管對反應中所產(chǎn)生的光子數(shù)進行 測量。所產(chǎn)生光子數(shù)與樣本內(nèi)甲胎蛋白的濃度成正比。樣本內(nèi)分析物的量油校準曲線來確定。文件編號：YHBE6-JYK-MYS-002標準操作規(guī)程 甲胎蛋白測定編制人：劉鳳婷生效日期：

5、2018年1月1日審核人：鐘劍版本號/修訂號：1/4批準人：張延亮發(fā)布部門：檢驗科頁碼數(shù)：5-8頁4試劑及其他用品4.1 試劑：AFP測定試劑包，由邁瑞公司出品。未打開的試劑包保存于28c 避光保存，可穩(wěn)定保存18個月，不可凍存。開啟的試劑包載入系統(tǒng)中可使用28d。4.2 試劑盒組分4.2.1 試劑 1 （Ra）:組分包被著甲胎蛋白抗體（小鼠單抗，IgG）的超順磁性微粒，懸浮于緩 沖液，含防腐劑。原料及含量：包被著甲胎蛋白抗體（小鼠單抗， IgG）的超順磁性微粒，0.3g/L;Tris 緩沖液，50mmol/L,Proclin300,0.5g/L;疊氮鈉，0.9g/L。4.2.2 試劑 2 （

6、Rbb組分：抗甲胎蛋白抗體（小鼠單抗，IgG）-堿性磷酸酶標記物稀釋于緩 沖液，含防腐劑。原料及含量：抗甲胎蛋白抗體（小鼠單抗，IgG）-堿性磷酸酶標記物，3mg/L;磷酸鹽緩沖液，10mmol/L;Proclin300,0.5g/L;疊氮鈉，0.9g/L。4.2.3 試齊1J 3 （R0組分：樣本處理緩沖液，好防腐劑。原料及含量：Tris 緩沖液，50mmol/L,Proclin300,0.5g/L;疊氮鈉，0.9g/L 。4.3 其他試劑與用品試劑包即開即用，臨用時輕柔顛倒混勻數(shù)次，無須特殊準 備。4.3.1 底物液4.3.2 清洗緩沖液等。5校準品與校準模式5.1 校準品：采用專用配套A

7、FP5準液。校準品需在28c貯存。5.2 校準類型和校準點數(shù)目：非線性模式，6個校準點。儀器根據(jù)校準曲線卡片 數(shù)據(jù)（6參數(shù)對數(shù)擬合曲線）自動建立校準曲線。5.3 校準周期：在同一批號試劑使用期間校準曲線有效，但在間隔28d后需要重新校準。每當：更換試劑批號或出現(xiàn)質控漂移時；儀器進行全面保養(yǎng)后； 儀器的重要零件更換后，進行一次校準。5.4 校準液重建方法：凍干校準液，用1mLK儲水復溶，復溶后的校準液于28c 保存最長不超過5周，或于-20 C最長保存10周。避免反復凍融。6質控品與室內(nèi)質控規(guī)則6.1 質控品采用AFP配套質控品。6.2 質控液重建方法：液態(tài)質控液，即開即用，充分顛倒混勻，無需特

8、殊準備。6.3 質控品測定：在每一批標本中測定質控血清一次。6.4 質控規(guī)則：采用L-J質控圖，以土 3s為失控限。標準差由本室實驗數(shù)據(jù)得 出。6.5 如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質控標準操作程序采取各種有效的糾正措施及時 糾正，并在確認重新回復到控制狀態(tài)后開始標本檢測。7適用儀器文件編號：YHBE7-JYK-MYS-002標準操作規(guī)程 甲胎蛋白測定編制人：劉鳳婷生效日期：2018年1月1日審核人：鐘劍版本號/修訂號：1/4批準人：張延亮發(fā)布部門：檢驗科頁碼數(shù)：5-8頁深圳邁瑞自動發(fā)光免疫分析儀8標本檢測步驟裝載試劑一進行校準一進行質控一輸入標本檢測項目一加載標本 一標本測定一結果復核一報告。9主要

9、分析參數(shù)無須輸入操作參數(shù)，儀器根據(jù)預設的分析項目參數(shù)和試劑條碼的信息自動進 行分析。標本10卜l。10結果計算儀器根據(jù)校準曲線自動給出每個標本測定結果。測定結果單位以ng/mL表示。11檢驗結果的報告及范圍11.1 結果的報告11.1.1 結果經(jīng)審核后，確認準確無誤后發(fā)出報告。11.1.2 報告單上標明結果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和 審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學信息。11.1.3 如收到標本的質量可能對測定結果有影響的也在報告單上指出。11.2 報告范圍：0.5 1210 ng/ml，超過此范圍的結果報告時必須附有證明該結果準確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標本重新稀釋

10、后重復測定的結果。12操作性能12.1 精密度：批內(nèi)CWC3%;批問CVk5%12.2 分析范圍：0.5 1210 ng/ml. 。12.3 分析靈敏度：0.5 ng/ml.。12.4 方法的有限性及干擾因素：輕度溶血、黃疸、脂血、 Rh因子對本試驗無 明顯干擾。甘油三脂(0 1500mg/dL)、血紅蛋白(0 500mg/dL)或膽紅素(< 20mg/dL) 時對試驗的干擾偏差在+-10%范圍內(nèi)。ng/ml以內(nèi)沒有hook效應。13參考范圍及醫(yī)學決定水平參考范圍：0 7.0 ng/ml14臨床意義14.1 在懷孕時，AFP由胎兒產(chǎn)生并轉運至羊水，然后又滲透入母親的外周血中。 開放性神經(jīng)

11、管缺陷(NTD可使AFP直接通過胎兒的毛細血管進入羊水；因此， 羊水和母親血清中的AFP濃度升高，可提示有可能存在包括無腦兒和脊柱裂在內(nèi) 的一系列胎兒畸形。AFP的測定為篩查NTD勺高風險妊娠提供了一個有效的方法， 可利用這一指標對她們進行篩查；另外，多胎妊娠也可伴有AFP濃度的升高。14.2 AFP濃度升高也可發(fā)生在患有原發(fā)性肝細胞癌或非精原細胞瘤的睪丸癌 患者，對此類患者的治療中動態(tài)監(jiān)測其 AFP水平，可用于對患者病情的治療監(jiān)控； 另外，AFP濃度升高也可見于非惡性肝臟疾病的患者。15結果審核以及分析與相關項目的聯(lián)系15.1 由資深專業(yè)人員負責檢驗結果的審核。15.2 審核者認真審核每一個

12、測定結果，對發(fā)出報告結果的可靠性負責，并在報 告單的審核者處簽名。文件編號：YHBE8-JYK-MYS-002標準操作規(guī)程 甲胎蛋白測定編制人：劉鳳婷生效日期：2018年1月1日審核人：鐘劍版本號/修訂號：1/4批準人：張延亮發(fā)布部門：檢驗科頁碼數(shù)：5-8頁15.3 相關項目：審核與其他月中瘤標志物的關系，如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的 情況，應分析與查找原因。16有關引用程序與文件16.1 CL-1200i自動發(fā)光免疫分析儀儀器標準操作規(guī)程。16.2 免疫檢驗室內(nèi)質控標準操作程序。16.3 檢驗結果審核程序。16.4 標本送檢和接收程序。17參考文獻17.1 陸永綏，張偉民主編.臨床檢驗管理與技術規(guī)程.杭州：浙江大學出版社， 2004.17.2 Access甲胎蛋白測定試劑說明書。17.3