殼聚糖和尿囊素預(yù)防外科術(shù)后腹腔粘連效果的觀察

1、殼聚糖和尿囊素預(yù)防外科術(shù)后腹腔粘連效果的觀察=            作者：沈新，李孟彬，王為忠，施海 【關(guān)鍵詞】  粘連；殼聚糖；尿囊素；兔    【Abstract】AIM: To investigate the preventive effect of chitosan and allantoin against postsurgical abdominal adhesions and to study the synergetic eff

2、ects of these two drugs and discuss the mechanism. METHODS: Ninetysix rabbits were chosen to establish intestinal adhesion models, which were randomly and evenly divided into control group (group A)，chitosan treatment group (group B), allantoin treatment group (group C) and chitosan+allantoin treatm

3、ent group (group D). Right after the operation, the situations of rabbits were observed. Then the rabbits were dissected to evaluate the degree of adhesions 1 and 2 weeks after the operation. Study the pathological changes under microscope. RESULTS:  The models of adhesions were reliable. The a

4、dhesion degrees of group B, C and D were all significantly decreased compared with that of group A (P<0.05). Group D showed a better effect than group B and C (P<0.05). Group B, C and D could alleviate the inflammation reaction and the degree of fibrosis compared with group A. CONCLUSION: Trea

5、tment with chitosan and allantoin during operation could prevent postsurgical abdominal adhesions, and the two drugs had a synergetic effect.    【Keywords】 adhesions; chitosan; allantoin; rabbits    【摘要】 目的： 對比觀察殼聚糖及尿囊素對術(shù)后腹腔粘連的預(yù)防作用，并探討兩者合用的協(xié)同作用及機(jī)理. 方法： 成年純種家兔96只制成粘連動物模型

6、，隨機(jī)分為對照組（A）、殼聚糖組（B），尿囊素組（C）和殼聚糖+尿囊素聯(lián)合用藥組（D），每組24只. 觀察家兔術(shù)后一般情況， 并于術(shù)后1 wk和2 wk剖腹觀察其腹腔粘連情況，按程度分級，切取標(biāo)本行HE染色，顯微鏡下觀察.  結(jié)果： 粘連動物模型建立切實可靠，B，C組和D組粘連等級與A組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且D組效果明顯優(yōu)于B，C組（P<0.05）. 病理觀察聯(lián)合用藥組炎性反應(yīng)及纖維化程度均輕于對照組. 結(jié)論： 術(shù)中應(yīng)用殼聚糖和尿囊素均有預(yù)防術(shù)后腹腔粘連的作用，兩者合用可產(chǎn)生協(xié)同作用.     【關(guān)鍵詞】 粘連；殼聚糖；尿囊素

7、；兔       0引言    術(shù)后腹腔粘連是外科腹部手術(shù)后的一種常見并發(fā)癥，發(fā)生率高達(dá)90%以上1，是引起腸梗阻最常見的原因，有的甚至可引起腸絞窄而致命. 盡管廣大醫(yī)務(wù)工作者已認(rèn)識到手術(shù)操作輕柔、減少出血和異物存留、避免粗糙創(chuàng)面出現(xiàn)、術(shù)后加強(qiáng)活動等可以減輕腹腔粘連，但已有的研究報道表明：采用上述辦法并不能很有效地預(yù)防粘連2，因而探索能有效預(yù)防術(shù)后腸粘連的新方法具有重要的臨床意義. 殼聚糖是一種純天然的高分子多糖體，可被人體降解吸收，是新型的高分子抗粘連劑. 尿囊素為2,5二氧代4咪唑烷基脲. 它是尿酸的

8、衍生物，具有促進(jìn)組織細(xì)胞增生、促進(jìn)潰瘍及傷口愈合的作用. 本實驗通過對比觀察殼聚糖及尿囊素對家兔術(shù)后腹腔站粘連的預(yù)防作用，以及兩者聯(lián)合應(yīng)用對預(yù)防術(shù)后粘連的效果，探討殼聚糖及尿囊素聯(lián)合應(yīng)用對預(yù)防術(shù)后腸粘連的協(xié)同作用，為預(yù)防和減輕術(shù)后腹腔粘連提供實驗依據(jù).    1材料和方法    1.1材料成年純種家兔96只，雌雄不限，體質(zhì)量22. 5 kg，二級清潔動物，由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供；殼聚糖凝膠，為石家莊億生堂醫(yī)用品有限公司產(chǎn)品；尿囊素，為江蘇華邦生化科技有限責(zé)任公司產(chǎn)品，用生理鹽水配制成0.1 mol/L濃度的溶液備用；速眠新注射

9、液，1.5 mL/支，長春軍需大學(xué)獸醫(yī)研究所生產(chǎn).    1.2方法    1.2.1動物準(zhǔn)備全部動物術(shù)前均禁食(不禁水)12 h，速眠新注射液（2 mL/kg）肌肉注射麻醉. 麻醉后仰臥位固定，剪毛消毒鋪單，無菌操作下取腹正中切口，長約4 cm. 打開腹腔后找出盲腸，用組織鉗取出盲腸，用顯微尖鑷于腸系膜對側(cè)沿縱軸方向剝離約5 cm×2 cm大小漿膜3.    1.2.2實驗動物分組家兔按雙盲法隨機(jī)分為4組，每組24只： 對照組(A組)，關(guān)腹前用生理鹽水30 mL沖洗腹腔，吸棄部分液體，將盲腸放

10、回腹腔，關(guān)腹；殼聚糖組(B組)，關(guān)腹前用殼聚糖凝膠均勻涂布于距盲端3 cm范圍內(nèi)的盲腸漿膜面(用量： 1 mL/只)；尿囊素組(C組) 關(guān)腹前注入尿囊素溶液30 mL；殼聚糖+尿囊素聯(lián)合用藥組(D組)，關(guān)腹前均勻涂布?xì)ぞ厶悄z(1 mL/只)并注入尿囊素溶液30 mL.    1.2.3目視判斷評分術(shù)后動物禁食12 h，分籠飼養(yǎng)，飼料為全價營養(yǎng)家兔顆粒飼料. 每組再隨機(jī)分為2組，每組12只，分別于術(shù)后1 wk 和2 wk在麻醉下再次打開腹腔，肉眼觀察并評定盲腸盲端經(jīng)處理過的部位同周圍腸管、系膜及腹壁的粘連情況. 在實驗期間死亡的家兔也做剖腹檢查. 按文獻(xiàn)4的分級標(biāo)

11、準(zhǔn)對腹腔粘連進(jìn)行評估，同時拍照并記錄結(jié)果： 0級：無粘連；級：輕度粘連，易分離；級：中度粘連，不易分離，但分離時不致撕裂腸管；級：高度粘連，不能分離，施行分離時可撕裂腸管.    1.2.4病理切片評價切取粘連處的盲腸組織，生理鹽水洗凈內(nèi)容物后立即用40 g/L甲醛固定，常規(guī)石蠟切片，蘇木精伊紅染色，光鏡下觀察局部腸壁的病理改變. 根據(jù)炎性細(xì)胞的多少、成纖維細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞的增生、纖維蛋白的存在、間皮細(xì)胞與膠原纖維的排列、毛細(xì)血管的增生等情況，判斷粘連程度.    統(tǒng)計學(xué)處理： 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，各組粘連程度分級程

12、度的差異采用完全隨機(jī)設(shè)計的多組等級資料比較的秩和檢驗KruskalWallis H檢驗，多重比較采用Nemenyi檢驗.    2結(jié)果    2.1一般情況各組家兔麻醉清醒后即可活動，精神、進(jìn)食良好，傷口愈合好. 術(shù)后4 d ，A組動物死亡1只，剖腹探查死因為廣泛腸粘連致絞窄性腸梗阻. 術(shù)后1 wk左右A，B，C組部分動物出現(xiàn)精神萎糜、食欲下降、活動減少等癥狀，A組最重，D組動物情況明顯優(yōu)于其他各組.    2.2肉眼觀察所有存活家兔皮膚切口均為甲級愈合，術(shù)后1 wk和2 wk均未見腹腔內(nèi)有明顯的感染存在

13、，盲腸未見穿孔，A組粘連最重，其次為B，C組，D組最輕( 圖1).     2.3腹腔粘連程度比較術(shù)后1 wk和2 wk，家兔腹腔粘連程度A組與B，C組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與D組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；B組和C組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；D組與B, C組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,表1). A： 無粘連（0級）； B： 輕度粘連（級）； C： 中度粘連（級）； D： 高度粘連（級）.圖1家兔術(shù)后腸管間和腹腔粘連情況表1各組間家兔術(shù)后腹腔粘連程度的比較    2

14、.4形態(tài)學(xué)變化光鏡下觀察家兔腹腔粘連部位的病理改變，術(shù)后1  wk，A組： 有大量的成纖維細(xì)胞和炎性細(xì)胞浸潤，組織水腫明顯；B組： 有炎性細(xì)胞浸潤，成纖維細(xì)胞較少，組織水腫，漿膜面有內(nèi)皮及上皮細(xì)胞增生；C組： 僅有少量成纖維細(xì)胞浸潤和炎性細(xì)胞浸潤，組織輕度水腫，漿膜面有單層間皮細(xì)胞增生；D組： 無或僅有少許成纖維細(xì)胞浸潤和炎性細(xì)胞浸潤，水腫程度輕微(圖2). 術(shù)后2 wk，A組： 處理側(cè)漿膜面纖維組織增生明顯，纖維粘連嚴(yán)重，漿膜層有淋巴細(xì)胞散在浸潤；B組： 纖維粘連較輕；C組： 纖維蛋白少，纖維粘連輕微；D組： 漿膜面光滑平整，無纖維粘連(圖3).A： 對照組；B： 殼聚糖組；C：

15、尿囊素組；D： 殼聚糖+尿囊素聯(lián)合用藥組.    3討論    腹部手術(shù)后粘連發(fā)生機(jī)理以損傷炎癥學(xué)說較流行5，正常情況下，漿膜間皮及間皮下血管中存在纖溶酶原激活因子，能使纖維蛋白的形成和水解處于動態(tài)平衡，以維持漿膜的光滑6. 當(dāng)腹部手術(shù)或炎癥   刺激時，炎性細(xì)胞和受傷的間皮細(xì)胞產(chǎn)生纖溶酶原激活抑制物，導(dǎo)致纖維蛋白溶解作用降低7. 另外，成纖維細(xì)胞增生，分泌膠原纖維，多種因素造成永久性纖維粘連.    本實驗結(jié)果顯示，殼聚糖與尿囊素均具有防粘連的作用， HE染色光鏡下觀察也證

16、實，用藥組炎癥反應(yīng)輕，漿膜面有單層間皮細(xì)胞，光滑平整，達(dá)到生理性修復(fù). 殼聚糖具有良好的生物相容性8，不易引發(fā)炎癥反應(yīng)，不被排斥，隨著器官的蠕動而漫布于整個腹腔，起到潤滑作用，將腸管和腹膜隔開，并最終可降解為對人體有益的氨基葡萄糖單體被吸收. 它可選擇性促進(jìn)上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞增長而抑制成纖維細(xì)胞生長9，從而改善內(nèi)源性修復(fù)過程，促使組織生理性修復(fù)，減少膠原纖維合成. 可抑制出血及纖維蛋白束的形成，減少了因血腫機(jī)化而造成的組織粘連10. 關(guān)腹前注入尿囊素溶液，可以減少和消退膠原蛋白滲出，防止成纖維母細(xì)胞大量增殖，減輕腸管水腫，使腹膜上皮迅速修復(fù). 病理組織學(xué)檢查可以看出，尿囊素可很好地恢復(fù)間皮的連

17、續(xù)性和完整性，防止術(shù)后腸粘連，抗炎抗?jié)B出作用可以減少炎性滲出，從而減少纖維蛋白原和纖維蛋白析出，纖維蛋白性粘連較輕，這有利于間皮細(xì)胞的覆蓋，達(dá)到生理性修復(fù). 減少炎癥滲出及炎性細(xì)胞的浸潤，也是其減輕粘連的一個因素.    本實驗結(jié)果顯示，殼聚糖與尿囊素聯(lián)合應(yīng)用對預(yù)防術(shù)后腹腔粘連有協(xié)同作用，這可能與兩者同時以不同的作用機(jī)理對抗粘連有關(guān). 兩者均無毒副作用11，聯(lián)合用藥預(yù)防術(shù)后粘連的發(fā)生率及粘連程度均明顯降低，為術(shù)后腹腔粘連的預(yù)防提供了臨床依據(jù).    【參考文獻(xiàn)】    1 Liakakos T, Thom

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