新輔助熱化療對(duì)乳腺癌微血管密度和血清VEGF的影響

1、新輔助熱化療對(duì)乳腺癌微血管密度和血清VEGF的影響作者：蔣金恒,包國(guó)強(qiáng),何顯力,高德明,馬慶久作者單位：第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院普通外科，陜西 西安 710033 【摘要】目的: 研究新輔助熱化療對(duì)乳腺癌患者腫瘤微血管密度(MVD)、血清血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)的影響. 方法： 應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)及酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)，觀察新輔助熱化療和新輔助化療后腫瘤MVD的變化,檢測(cè)乳腺癌患者接受新輔助熱化療和新輔助化療前后血清VEGF含量. 結(jié)果： 新輔助化療組與對(duì)照組相比，MVD明顯下降(47.4±13.3)個(gè)/HP vs (81.7±17.6)個(gè)/HP，P<

2、;0.05;新輔助熱化療組與新輔助化療組及對(duì)照組相比，MVD下降更明顯(26.8±5.9)個(gè)/HP vs (47.4±13.3)個(gè)/HP及(81.7±17.6)個(gè)/HP，P<0.05. 與對(duì)照組相比，新輔助化療和新輔助熱化療后血清VEGF含量均明顯降低(315±154) ng/L vs (156±53) ng/L，P<0.05;(307±156) ng/L vs (140±47) ng/L，P<0.05;新輔助熱化療與新輔助化療后VEGF含量變化兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05). 結(jié)論： 新輔助

3、熱化療和新輔助化療后乳腺癌患者M(jìn)VD及血清VEGF水平均明顯下降. 新輔助熱化療組較新輔助化療組MVD下降更為明顯. 【關(guān)鍵詞】 乳腺腫瘤,化學(xué)療法,輔助,腫瘤微血管密度;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 0引言 腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)與腫瘤血管形成密切相關(guān)1，腫瘤微血管密度(microvessel density, MVD)是衡量腫瘤血管形成程度的標(biāo)志. 而血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascuiar endotheliai cell growth factor，VEGF)在腫瘤血管形成中起重要作用2. 新輔助熱化療對(duì)乳腺癌患者血清VEGF含量與MVD的影響研究國(guó)內(nèi)報(bào)道甚少. 我們通過檢測(cè)乳腺癌患者新輔助熱

4、化療、新輔助化療前后血清VEGF及腫瘤組織MVD的變化，探討新輔助熱化療對(duì)乳腺癌血管生成的影響及在乳腺癌臨床治療中的意義. 1材料和方法 1.1材料選擇2004/2007經(jīng)我院病理檢查證實(shí)為晚期乳腺癌女性患者60例. 人VEGF ELISA試劑盒(森雄生物公司);CD34 mAb，免疫組化染色試劑盒，DAB染色劑(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司). 1.2方法 新輔助化療組：術(shù)前行新輔助化療方案，采用多烯紫杉醇+阿霉素+環(huán)磷酰胺方案，共完成2個(gè)周期治療; 新輔助熱化療組：術(shù)前行新輔助熱化療方案，其化療方案同新輔助化療組. 熱療采用脈沖聚焦微波加熱治療系統(tǒng)(南京啟亞醫(yī)療設(shè)備有限公司，脈沖峰值功率6

5、00032 000 W，工作頻率2.45 GHz，波長(zhǎng)12 cm，溫度控制范圍(42.5±1.0). 熱化療于化療藥物開始輸注后0.51 h進(jìn)行，每次熱療60 min. 化療1個(gè)周期共聯(lián)合2次熱療，共完成2個(gè)周期治療;化療方案及周期同第1組; 對(duì)照組術(shù)前不接受任何治療.保存.表1乳腺癌3組臨床病理資料×3;30 mL/L H2O2去離子水封閉30 min. PBS振洗3 min×3;3 mol/L尿素消化30 min，檸檬酸修復(fù)，PBS振洗3 min×3;用濾紙將片子擦干后，置于濕盒內(nèi)，37正常血清封閉30 min;滴加一抗(3 mg/L)，放入冰箱4過

6、夜;d2，取出片子，37復(fù)溫30 min，PBS振洗3 min×3;滴加二抗，37于濕盒內(nèi)孵育30 min，PBS振洗3 min×3;滴加ABC復(fù)合物，37于濕盒內(nèi)孵育30 min，PBS振洗3 min×3;DAB顯色20 min，自來水充分沖洗，蘇木素淡染，乙醇逐級(jí)脫水，透明，封片. 結(jié)果判定(微血管定量方法)參照Weiderner的方法，在100倍光鏡下挑選微血管分布最密區(qū)域，200倍視野下計(jì)數(shù)5個(gè)不重復(fù)視野中被CD34染成棕色的血管數(shù)目，取其均值作為MVD. 微血管的判定不以是否形成管腔或管腔內(nèi)有無紅細(xì)胞為記數(shù)單位，而是以與鄰近的微血管明顯分離的染色陽(yáng)性的單

7、個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞簇均作為一個(gè)血管計(jì)數(shù)，凡管腔大于8個(gè)紅細(xì)胞，帶較厚肌層的血管均不計(jì)數(shù). 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)椐進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以x±s表示，分析采用t檢驗(yàn). P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 2結(jié)果 2.1組織MVD計(jì)數(shù)免疫組化CD34染色，顯示三組乳腺癌組織切片中微血管均呈現(xiàn)不同程度的棕黃色(圖1). MVD數(shù)值分別為(81.7±17.6)個(gè)/HP，(47.4±13.3)個(gè)/HP和(26.8±5.9)個(gè)/HP，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05). 2.2血清VEGF含量結(jié)果顯示，血清VEGF含量對(duì)照組為(304

8、77;156) ng/L;新輔助化療組化療前為(315±154) ng/L，化療后為(156±53) ng/L(P<0.05). 新輔助熱化療組在熱化療前為(307±156) ng/L;熱化療后為(140±47) ng/L，新輔助熱化療前血清VEGF的含量明顯高于熱化療后血清VEGF的含量，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05). 3討論 乳腺癌新輔助化療可以縮小腫瘤及淋巴結(jié)體積，使原發(fā)腫瘤及淋巴結(jié)降期，提高保乳率，改善癌旁浸潤(rùn)情況，降低癌細(xì)胞活力消滅微轉(zhuǎn)移灶，提高可手術(shù)率，減少術(shù)中播散及術(shù)后轉(zhuǎn)移，消滅亞臨床病灶，減少?gòu)?fù)發(fā)的潛在危險(xiǎn). 腫瘤熱療是

9、利用物理能量在組織中積聚而產(chǎn)生熱效應(yīng),使腫瘤組織溫度上升到有效治療溫度,并維持一段時(shí)間,以殺死癌細(xì)胞,又不損傷正常細(xì)胞的一種治療方法2-3. 腫瘤新輔助熱化療即化療聯(lián)合熱療,可能成為臨床上一種新的腫瘤治療的方法. 實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴新生血管的形成，而MVD與腫瘤浸潤(rùn)、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性密切相關(guān). MVD可作為判斷腫瘤預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo). VEGF為特異的血管內(nèi)皮細(xì)胞刺激因子，能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、分裂，促進(jìn)新的血管生成，同時(shí)可引起細(xì)胞外基質(zhì)改變而有利干腫瘤細(xì)胞在合適的微環(huán)境形成新的轉(zhuǎn)移灶4-5. 我們檢測(cè)新輔助化療及新輔助熱化療前后的MVD值和血清VEGF含量，新輔助熱化療和新輔助化療

10、后患者M(jìn)VD值和血清VEGF水平較化療前顯著下降，而新輔助熱化療較之新輔助化療更能有效降低腫瘤血管密度及血清VEGF. 提示新輔助熱化療可能通過減少腫瘤的血管形成，破壞其血流供應(yīng)而達(dá)到抑制腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移的作用. 其機(jī)制可能由于熱化療使腫瘤部位的熱量蓄積, 局部溫度高于周圍正常組織溫度, 使化療藥物的作用具有定向性. 熱化療可以使腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接增多，間隙減小，血管壁變厚;甚至可以導(dǎo)致新生血管只有完整的基膜而缺乏內(nèi)皮細(xì)胞，通過抑制腫瘤細(xì)胞合成與分泌VEGF，從而減少VEGF對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞刺激所引起的血管過度增生6. 研究結(jié)果顯示，新輔助熱化療可使乳腺癌MVD和血清VEGF含量下降，提示

11、其在乳腺癌臨床治療中可能具有重要意義. 但新輔助熱化療目前仍處在未成熟的研究階段,仍有大量問題有待于進(jìn)一步深入研究和解決. 例如: 熱療的劑量學(xué)、深部精確無損測(cè)溫、與化療達(dá)到最大協(xié)同作用的間隔時(shí)間和次序等，這方面的研究報(bào)道還相對(duì)較少，相信隨著臨床研究的深入,腫瘤熱化療在腫瘤綜合治療中將會(huì)越來越顯示出它的作用. 【參考文獻(xiàn)】 1 Nyberg P, Xie L, Kalluri R. Endogenous inhibitors of angiogenesisJ. Cancer Res, 2005, 65:3967-3979. 2 蔣東，鄭世營(yíng)，陳鎖成,等. 全身熱療與腫瘤細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展J. 醫(yī)學(xué)綜述, 2008,14:51-52. 3 Falk MH, Issels RD. HypexthexmiinoncologyJ. Int J Hyperxthermia, 2001,17:1-18. 4 Bellon G, Martiny L, Robinet A. Matrix metallopmteinases and matrikines in angiogenesisJ. Crit Rev Oncol