成骨細(xì)胞骨形成機(jī)制研究

1、成骨細(xì)胞骨形成機(jī)制研究         03-08-11 09:34:00     作者：童安莉 陳璐璐、丁桂    編輯：snowflake骨不斷地進(jìn)行著重建，骨重建過程包括破骨細(xì)胞貼附在舊骨區(qū)域，分泌酸性物質(zhì)溶解礦物質(zhì)，分泌蛋白酶消化骨基質(zhì)，形成骨吸收陷窩；其后，成骨細(xì)胞移行至被吸收部位，分泌骨基質(zhì)，骨基質(zhì)礦化而形成新骨。破骨與成骨過程的平衡是維持正常骨量的關(guān)鍵。成骨細(xì)胞是骨形成的主要功能細(xì)胞，負(fù)責(zé)骨基質(zhì)的合成、分泌和礦化。目前，隨

2、著研究的不斷深入，在骨形成過程中，成骨細(xì)胞發(fā)展及其調(diào)控的分子機(jī)制也逐漸得以揭示。1成骨細(xì)胞的起源成骨細(xì)胞起源于多能的骨髓基質(zhì)的間質(zhì)細(xì)胞，除成骨細(xì)胞外，基質(zhì)細(xì)胞還可分化成軟骨細(xì)胞，成纖維細(xì)胞，脂肪細(xì)胞或肌細(xì)胞。成骨細(xì)胞來源譜系有以下幾種：(1)骨髓克隆形成單位(成纖維細(xì)胞集落形成單位，CFU-F)；(2)骨祖細(xì)胞，可分化成前成骨細(xì)胞和前軟骨細(xì)胞譜系，常位于骨髓腔中，有很強的自身增殖能力；(3)前成骨細(xì)胞，即最近的成骨前體，能定向分化成成骨細(xì)胞，具有合成和增殖能力1，2。成骨細(xì)胞由多能的間質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)的各種調(diào)控因素的調(diào)節(jié)下發(fā)展而來，調(diào)控因素主要有BMP-2，BMP-2能誘導(dǎo)基質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化

3、，具體就是誘導(dǎo)間質(zhì)干細(xì)胞分化形成骨祖細(xì)胞進(jìn)而形成前成骨細(xì)胞3。2成骨細(xì)胞發(fā)展階段及骨形成機(jī)制成骨細(xì)胞在骨形成過程中要經(jīng)歷成骨細(xì)胞增殖，細(xì)胞外基質(zhì)成熟、細(xì)胞外基質(zhì)礦化和成骨細(xì)胞凋亡四個階段。很多因素可調(diào)節(jié)這幾個階段，從而最終調(diào)控骨形成。成骨細(xì)胞增殖期成骨細(xì)胞數(shù)量增加，以形成多層細(xì)胞，并合成、分泌型膠原以便最終可以礦化形成骨結(jié)節(jié)。對成骨細(xì)胞增殖的調(diào)控具體說來即是對細(xì)胞周期的調(diào)控，后者包括細(xì)胞在有絲分裂原作用下復(fù)制DNA和細(xì)胞分裂的調(diào)節(jié)機(jī)制，典型的成骨細(xì)胞細(xì)胞周期時間為2024小時4。抑制與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)相關(guān)的基因會導(dǎo)致增殖的停止。與增殖激活有關(guān)的基因有c-myc、c-fos、c-jun；與細(xì)胞周期有

4、關(guān)的基因有組蛋白、細(xì)胞周期素基因。在顱蓋骨分骨細(xì)胞培養(yǎng)中觀察到細(xì)胞從顱蓋骨中分離后很快即出現(xiàn)最高水平的c-fos mRNA表達(dá)，比c-myc和H4組蛋白基因表達(dá)早許多。c-myc mRNA常在1天后表達(dá)達(dá)到高峰，H4組蛋白基因表達(dá)伴隨細(xì)胞內(nèi)DNA合成，與增殖密切相關(guān)5。c-fos、c-jun基因表達(dá)在增殖晚期明顯下調(diào)，同時伴隨成骨細(xì)胞增殖減慢，細(xì)胞由增殖期進(jìn)入分化期。c-fos對成骨細(xì)胞增殖的作用在體內(nèi)實驗中也得到證實，如在人的長骨與胚胎骨生長旺盛的區(qū)域c-fos原癌基因高表達(dá)。另有報道，c-fos高表達(dá)的小鼠中骨形成也會增加，這些均證明c-fos與成骨細(xì)胞增殖有關(guān)。而且c-fos與c-jun

5、編碼的蛋白質(zhì)c-fos,C-jun能形成異二聚體，作為轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到基因啟動子區(qū)的AP-1位點，已觀察到在增殖的成骨細(xì)胞中有很高的AP-1結(jié)合活性，而在增殖下調(diào)后，這種高活性也明顯改變，這說明原癌基因可能通過c-fos/c-jun復(fù)合物來調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖2。在成骨細(xì)胞增殖期，同時還能表達(dá)的基因有表皮生長因子(FGF)、胰島素樣生長因子(IGF)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)、型膠原、纖維連接素(fibronectin)等基因6。在細(xì)胞增殖晚期，與細(xì)胞周期與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因表達(dá)下降，而編碼細(xì)胞外基質(zhì)成熟的蛋白的基因開始表達(dá)，在分化早期主要是堿性磷酸酶表達(dá)，因此堿性磷酸酶被認(rèn)為是細(xì)胞外基質(zhì)成熟的早期標(biāo)志，

6、AKP mRNA表達(dá)此時可增加10倍以上。有學(xué)者用羥基脲抑制成骨細(xì)胞增殖，加入羥基脲1小時后觀察到DNA合成和H4組蛋白mRNA下降90%，與此同時，AKP mRNA增加4倍，證明增殖下調(diào)可提前誘導(dǎo)AKPmRNA表達(dá)5，7。成骨細(xì)胞分泌AKP和鈣鹽結(jié)晶體至細(xì)胞外基質(zhì)中，AKP使局部磷酸含量增高，促使基質(zhì)礦化。在細(xì)胞外基質(zhì)成熟期，膠原繼續(xù)合成并相互交聯(lián)、成熟。在成骨細(xì)胞分化晚期，當(dāng)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)入礦化期，細(xì)胞內(nèi)的AKP活性下降，而與細(xì)胞外基質(zhì)中羥磷灰石沉積相關(guān)的基因表達(dá)達(dá)到高峰，如骨橋蛋白(osteopontin)、骨鈣素、骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein)基因。骨鈣素等非膠原蛋白分

7、泌至     03-08-11 09:34:00     作者：童安莉 陳璐璐、丁桂    編輯：snowflake細(xì)胞外基質(zhì)中，與鈣、磷結(jié)合，然后，沿膠原分子的長軸，鈣和磷結(jié)合到膠原分子的側(cè)鏈的膠原氨基酸殘基上，形成羥磷灰石結(jié)晶。在用羥基脲抑制增殖的實驗中同時可觀察到，與AKP不同，骨鈣素，骨橋蛋白的mRNA表達(dá)不因增殖抑制而增加，證明它們與增殖無關(guān)而可能與礦化基質(zhì)中成骨細(xì)胞分化有關(guān)。Owen在體外實驗中進(jìn)一步觀察-磷酸甘油(-GP)對骨鈣素產(chǎn)生的影響，-GP是羥磷灰石形成

8、的原料，能被AKP迅速水解，釋放出無機(jī)磷。如果培養(yǎng)中沒有-GP時，即使細(xì)胞通過細(xì)胞外基質(zhì)成熟期進(jìn)入礦化階段，骨鈣素基因也不能表達(dá)，說明在沒有礦物質(zhì)沉積時不能表達(dá)礦化階段的基因5。體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞在骨礦化期骨鈣素高度增加，此后，骨鈣素逐漸降低，與此同時，可觀察到膠原酶增加，成骨細(xì)胞開始凋亡，并出現(xiàn)代償性細(xì)胞增殖和膠原合成8。3成骨細(xì)胞性骨形成的調(diào)控機(jī)制成骨細(xì)胞在產(chǎn)生、發(fā)展的各個階段均需借助于精細(xì)的調(diào)控，以最終完成正常的骨形成。已知很多全身激素和骨組織局部調(diào)節(jié)因子都對成骨細(xì)胞發(fā)揮作用并影響成骨細(xì)胞發(fā)展的各個階段，調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞功能。已知的全身激素如甲狀旁腺激素(PTH)、甲狀旁腺激素相關(guān)肽(PTH

9、rp)、1，25-二羥維生素D31，25(OH)2D3、降鈣素(CT)、糖皮質(zhì)激素、生長激素、甲狀腺激素、性激素等對骨形成均有影響。而近年來，骨組織局部調(diào)節(jié)因子對骨形成所起的作用尤受重視。3.1胰島素樣生長因子(IGFs)IGFs是骨細(xì)胞中含量最豐富的生長因子，對成骨細(xì)胞功能起重要的調(diào)節(jié)作用，目前已知的IGF主要為IGF-和IGF-，IGF-、IGF-由骨細(xì)胞生成并儲存于骨中，在骨吸收時從骨中釋放出來；成骨細(xì)胞在骨吸收時也能分泌增加量的IGFs，以自分泌方式發(fā)揮作用，刺激成骨細(xì)胞增殖和分化；另外由破骨細(xì)胞產(chǎn)生的IGFs以旁分泌方式作用于成骨細(xì)胞。因為IGF對骨形成有很強的促進(jìn)作用，因此IGFs

10、在骨吸收時大量增加介導(dǎo)了骨吸收和骨形成之間的偶聯(lián)作用，使骨吸收后骨形成增加9，有利于骨重建的正常進(jìn)行。IGF-、IGF-對成骨細(xì)胞的作用基本相似，但I(xiàn)GF-作用較IGF-弱。IGF-、在成骨細(xì)胞培養(yǎng)中均可刺激成骨細(xì)胞的增殖和型膠原的生成，且與劑量有相關(guān)性，同時IGFs還可刺激堿性磷酸酶活性以及骨鈣素的產(chǎn)生10。離體實驗顯示IGF-、IGF-促進(jìn)鼠成骨細(xì)胞原癌基因c-fos的表達(dá)，后者可能在誘導(dǎo)成骨細(xì)胞增殖中起重要作用。不僅如此，IGFs還能介導(dǎo)全身激素如糖皮質(zhì)激素、PTH、1，25(OH)2D3、雌激素及機(jī)械壓力對成骨細(xì)胞增殖和分化的作用。另外IGFs與其他生長因子產(chǎn)生協(xié)同作用，共同刺激成骨細(xì)

11、胞增殖和分化。骨組織中IGF受其自身合成，IGF受體數(shù)目及其親和力、IGFBPs等調(diào)節(jié)9，11。TGF也能調(diào)節(jié)IGF-表達(dá)，TGF增加人成骨細(xì)胞IGF-表達(dá)，而抑制鼠成骨細(xì)胞的IGF-表達(dá)。IGFs為小蛋白，在血循環(huán)中半衰期很短，IGFs在體內(nèi)與胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白(IGFBPs)結(jié)合后半衰期延長很多。骨組織中共存在6種結(jié)構(gòu)相關(guān)的IGFBPs，IGFBPs可調(diào)節(jié)IGF作用。骨中IGFBP1-6除IGFBP-1外，其余均由成骨細(xì)胞產(chǎn)生，IGFBP-3、IGFBP-5可促進(jìn)IGF對成骨細(xì)胞的刺激作用。而其他IGFBPs尤其是IGFBP-4阻止IGFs結(jié)合到胰島素樣生長因子受體(IGFR)上，抑

12、制IGF活性。很多因素可調(diào)節(jié)IGFBPs產(chǎn)生，從而影響骨形成。骨細(xì)胞中，IGFs能調(diào)節(jié)IGFBps水平，使IGFBP-4減少而IGFBP-5增加。TGF減少IGFBP-4mRNA表達(dá)，同時顯著增加IGFBP-4蛋白分解。在SaOS-2細(xì)胞系中，PTH增強IGFBP-4的結(jié)合活性及抑制IGFBP-4蛋白酶活性，從而對成骨細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用，而雌二醇可以消除PTH的這些作用。此外，皮質(zhì)激素能抑制IGFBP-5表達(dá)而1，25(OH)2D3刺激IGFBP-4表達(dá)從而二者均抑制成骨細(xì)胞增殖9，12。3.2轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)TGF超家族包括TGFs，骨形態(tài)蛋白2-7(BMPs2-7)，肌動蛋白(acti

13、n)，抑制     03-08-11 09:34:00     作者：童安莉 陳璐璐、丁桂    編輯：snowflake素(inhibitin)。TGF合成初期是一種無活性的大分子復(fù)合物。骨基質(zhì)中有大量的無活性TGF，當(dāng)pH降低或纖溶酶及組織蛋白酶激活時，可使無活性的TGF活化。骨組織中骨吸收區(qū)pH值較低，可使TGF活化，因為TGF對成骨細(xì)胞骨形成產(chǎn)生重要影響，因此TGF可以調(diào)節(jié)骨吸收區(qū)新骨的形成。TGF對骨形成作用很復(fù)雜。在體外培養(yǎng)中TGF可以抑制或刺激成骨細(xì)胞增殖。這些

14、矛盾的結(jié)果部分由于各個實驗中所使用的TGF濃度，細(xì)胞密度，細(xì)胞來源不同13。TGF刺激非轉(zhuǎn)化的成骨細(xì)胞DNA合成及細(xì)胞增殖，同時，TGF誘導(dǎo)c-fos原癌基因表達(dá)，而用c-fos反義mRNA能阻斷TGF的致有絲分裂作用，證明c-fos表達(dá)在TGF誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖中有重要意義。目前，對TGF對成骨細(xì)胞分化功能的影響存在不同的結(jié)論，有報道，在原代成骨細(xì)胞培養(yǎng)中，TGF抑制AKP和骨鈣素的合成。但另有學(xué)者報道，TGF可以明顯促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的合成，刺激膠原、骨連接素(osteonectin)和骨橋蛋白合成，增加骨基質(zhì)沉積率14。另外，TGF1減少膠原酶轉(zhuǎn)錄并加速膠原酶mRNA降解，這有利于維持骨中的

15、膠原基質(zhì)。在體實驗中，實驗動物接受TGF2系統(tǒng)性治療能使其小梁骨的形成增加，并且在鼠股骨骨膜下注射TGF1和TGF2也能促使骨發(fā)生15。這些均證明TGF對骨形成起重要作用。TGF在人骨中的量隨年齡增加而下降。體外研究中發(fā)現(xiàn)1，25(OH)2D3、E2可以增加鼠成骨細(xì)胞TGF產(chǎn)量。1，25(OH)2D3并能調(diào)節(jié)TGF受體表達(dá)。在人成骨細(xì)胞中，睪酮和PTH同樣能增加TGF產(chǎn)量，除此之外，BMP-2也能增加TGF表達(dá)，而且TGF可自身誘導(dǎo)TGF表達(dá)9。3.3骨形態(tài)蛋白(BMPs)BMPs是TGF超家族成員，具有刺激成骨的作用。BMP可由成骨細(xì)胞產(chǎn)生，產(chǎn)生的BMP主要與骨基質(zhì)結(jié)合，很少釋放到骨外。BM

16、P的主要生物學(xué)作用是誘導(dǎo)未分化的間質(zhì)細(xì)胞分化形成軟骨和新生骨，前面已提到，BMP-2誘導(dǎo)成骨細(xì)胞的前體細(xì)胞分化成成骨細(xì)胞。在MC3T3-E1小鼠成骨樣細(xì)胞培養(yǎng)中，BMP能增加AKP活性和膠原合成，但對成骨細(xì)胞增殖不起作用2。在鼠骨肉瘤ROS17/2.8細(xì)胞系培養(yǎng)中，BMP-7抑制細(xì)胞增殖，而在人成骨細(xì)胞培養(yǎng)中，BMP-7刺激細(xì)胞增殖。BMPs與其他生長因子相互作用，共同誘導(dǎo)新骨形成，如TGF、VitD可使BMP-2增加。糖皮質(zhì)激素促進(jìn)BMP-2、BMP-4對成骨細(xì)胞分化的誘導(dǎo)作用并在分化早期促進(jìn)BMP-6合成，BMP-6在成骨細(xì)胞分化早期有重要作用，它介導(dǎo)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞分化。BMPs

17、對其他生長因子的影響表現(xiàn)在BMP-2增加大鼠成骨細(xì)胞IGF-、IGF-，BMP-4增加單核細(xì)胞TGF，而BMP-7能增加IGF-型受體的數(shù)量和減少IGFBP-4的產(chǎn)生及增加IGFBP-3、-5的產(chǎn)生。BMPs通過調(diào)節(jié)這些生長因子而誘導(dǎo)成骨作用9，16，17。3.4白細(xì)胞介素1(IL-1)IL-1由單核巨噬細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，可自分泌、旁分泌發(fā)揮作用。現(xiàn)已證明，它不僅對破骨細(xì)胞性骨吸收有明顯促進(jìn)作用，而且它還能影響成骨細(xì)胞性骨形成。IL-1對成骨細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用，而它對成骨細(xì)胞分化的作用比較復(fù)雜，不同的研究結(jié)果顯示，IL-1可以刺激或抑制膠原合成、AKP活性和骨鈣素合成。實驗結(jié)果的不同是由于實驗中所采用成骨細(xì)胞培養(yǎng)方法、細(xì)胞密度、IL-1劑量和IL-1處理時間、方式的不同2。最近，Shadman用大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行實驗，觀察到IL-1短暫作用于成骨細(xì)胞時，骨結(jié)節(jié)形成增加且呈劑量依賴性；而IL-1較長時間作用于成骨細(xì)胞時可產(chǎn)生雙向作用，低劑量增加骨結(jié)節(jié)形成，而