常用試劑的配制

1、應(yīng)阿至囪財(cái)反常用溶液的配制 信息來源：生物谷更新時(shí)間：2004-12-211:33:00 一、常規(guī)溶液 （一）1/15mol/LPBS（磷酸緩沖液 PhosphateBufferSolution,PBS） 甲液：1/15mol/LNa2HPO4溶液 Na2HPO49.465g 蒸儲水加至 1000ml 乙液：l/15mol/LKH2P。4溶液 KH2P049.07g 蒸儲水加至 1000m1 分裝在棕色瓶內(nèi)，于 4c 冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按不同比例 混合， 即可得所需 pH 的緩沖液 ，見卜表： PH 甲液ml 乙液 mI pH 甲液 ml 乙液 mI 5.29 2.5 97.5 6.

2、81 50.0 50.0 5.59 5.0 95.0 6.98 60.0 40.0 5.91 10.0 90.0 7.17 70.0 30.0 6.24 20.0 80.0 7.38 80.0 20.0 6.47 30.0 70.0 7.73 90.0 10.0 6.640.0 60.0 8.04 95.0 5.0 （二）0.3%臺盼蘭染液 稱取臺盼蘭（Trypanblue）粉 0.3 克，溶于 100ml生理鹽水中，加熱 使之完全溶解，用濾紙過濾除渣，裝入瓶內(nèi)室溫保存。 （三）0.5%酚紅指示劑 酚紅 0.5g 雙蒸水 85ml 將 0.5 克酚紅置研缽中，緩漫滴加 0.1NNaOH 溶液邊

3、加邊磨，并不 斷吸出已溶解的酚紅液，直至全部溶解，然后加入 85ml雙蒸水，顏 色為深紅，經(jīng)粗濾紙過濾后使用，室溫保存。 （四）5.6%NaHCO3溶液 稱 NaHCO35.6 克，溶于 100ml蒸儲水中，室溫保存即可（如需要也 可 10 磅 15 分鐘高壓滅菌，4c 冰箱保存） （五）10w父 ml秋水仙素 秋水仙素 lOmg 生理鹽水 100ml 裝入茶色瓶中，為貯備液，4c 冰箱中保存。甩時(shí)取貯備液 1ml加生 理鹽水 9ml即可。 （六）0.4%KCl-0.4%檸檬酸鈉低滲液 將 0.4%KCl和 0.4%檸檬酸鈉兩液等量混合即可，室溫保存。 （七）2%檸檬酸鈉 稱取檸檬酸鈉 2 克

4、，加 100ml雙蒸水即可，室溫保存。 （八）0.2%次甲基蘭染液 稱次甲基蘭（Methyleneblue）0.2 克，加蒸儲水 100ml,室溫保存。 （九）0.5%醋酸洋紅（AceioCarmine）染液 洋紅 lg 醋酸 90ml 將 90ml醋酸加入 110ml蒸儲水煮沸，然后將火焰移去，立即加入 1 克洋紅，使之迅速冷卻過濾，加飽和氫氧化鐵（媒染劑）水溶液數(shù)滴,直到呈葡萄酒色。室溫保存。加鐵使洋紅沉淀于組織而著色。此染液室溫存放時(shí)間越長效果越好，室溫保存。 （十）1%甲苯胺蘭（Toluidineblue） 稱取甲苯胺蘭 1 克，加蒸儲水 lOOml。 （H一）1/3000 中性紅染液

5、 取中性紅（Neutralred）0.1 克,加蒸儲水 300ml。室溫保存。 （十二）Giemsa 染液 1 .貯備液 Giemsa 粉 1g 純甘油 66ml 甲醇 66ml 先將 Giemsa 粉置于研缽中加少量甘油，充分研磨，呈無顆粒的糊狀。再將全部甘油加入，放入 56c 溫箱中 2 小時(shí)，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般兩周后使用為好。 2.工作液 臨用時(shí)將貯備液與 pH6.8 的磷酸緩沖液按照 1:20 混合。 （十三）埃利希（Ehrlich）蘇木精染液 蘇木精 1.0g 乙醇 50ml 甘油 50ml 硫酸鋁鉀 5g 蒸儲水 50ml 將蘇木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并攪拌，

6、以加速其溶解。 當(dāng)蘇木精溶解后將甘油加入并搖動容器，同時(shí)加入其余的乙醇；硫酸 鋁鉀需研磨并加熱， 然后溶解于蒸儲水中， 將其一滴滴地加入上邊的溶液，并不斷搖動，此液配好后，將瓶口用紗布蓋好，置通風(fēng)處，經(jīng)常搖動以加速其成熟，成熟約需 4 周左右，成熟的染液為深紅色。 二、細(xì)胞化學(xué)和細(xì)胞組分分離溶液 （一）M 一緩沖液 瞇口坐（Imidazole）3.404g KCI3.7g MgCl26H2O101.65mg ECTA380.35mg EDTA29.224mg 航基乙醇 0.07ml 甘油 297ml 蒸儲水加至 1000ml 用 lNHCl調(diào) pH 至 7.2 室溫保存。 （二）2%Trito

7、nX100 溶液 量取 2mlTritonX 一 100（聚乙二醇辛基苯基醍）液，加 M 緩沖液 98ml 即可。 （三）0.2%考馬斯亮蘭 R-250 染液 甲醇 46.5ml 醋酸 7.0ml 考馬斯亮蘭 0.2g 蒸儲水加至 100ml （四）A.0.1%堿性固綠染液（pH8.08.5） 1. 0.1%固綠水溶液 固綠（Fastgreen）0.1g 蒸儲水 100ml 2. 0.05%Na2c03溶液 Na2c0350mg 蒸儲水 100ml 用時(shí)按 1:1 體積混合即可。 B.0.1%酸性固綠染液（pH2.2） 1. 0.1%固綠水溶液。 2. mol/LX75 鹽酸液 鹽酸（比重 1

8、.19）0.109ml加蒸儲水至 100ml 用時(shí)按 l:1 混合。 （五）甲基綠一哌咯寧染液 1.1mol/L 醋酸緩沖液（pH4.8）: （1）醋酸 17ml 13.5g 蒸儲水加至 lOOml 用時(shí)分別取兩液 40ml、60ml混勻即可。 2.甲基綠一哌咯寧(methylgreen-Pyrcnln) 5%哌咯寧水溶?取6ml 2%甲基綠水溶液 6ml 蒸儲水 16ml lmol/L 醋酸緩沖液 16ml lmol/L 醋酸緩沖液臨用時(shí)才可加入染液中。 (六)Schiff 試劑 將堿性品紅 0.5 克加入 lOOml沸水，持續(xù)煮沸 5 分鐘，并隨時(shí)攪拌，待冷卻到 50c 時(shí)過濾到棕色瓶中，

9、力口 1NHC11O 毫升，冷卻至 25c 時(shí)力口入 1 克 NaHSO3,此時(shí)需很好的振蕩，避光過夜。次日取出(呈淡黃色)加 0.25 克活性炭劇烈振蕩 1 分鐘。過濾后即得 Schiff 試齊 ij 避光低溫保存。 (七)聯(lián)苯胺混合液 聯(lián)苯胺(4.4Diaminobenzidine)0.2g 95%乙醇 lOOml 3%過氧化氫 2 滴 此液臨用時(shí)配制。 (八)l%番紅水溶液 (2)醋酸水 番紅(Safranin)1.0g（九）1%SDS（十二烷基硫酸鈉 Sodiumdodecylsulfate,SDS） SDS10g 45%乙醇 100ml （十）1mol/LTris（三羥甲基氨基甲烷/

10、鹽酸緩沖液 Trihydroxy methylaminomethaneTris/HCL）pH7.8 Tris12.114g 蒸儲水 lOOml 先將 Tris 溶于少量蒸儲水，用 HCI 調(diào) pH 至 7.8,然后加水至 100ml （十一）RingerSolution 氯化鈉（冷血動物用 0.65 克）0.9 克 氯化鉀 0.042 克 氯化鈣 0.025 克 蒸儲水 100ml （十二）淀粉肉湯培養(yǎng)基 蛋白 2g 淀粉 6g 牛肉湯 100ml 用 10%NaHCO3調(diào) pH 至 7.07.2 （十三）0.25mol/L 蔗糖一 0.003mol/L 氯化鈣溶液 蔗糖 85.5g（十四）1

11、%詹納斯綠 B 染液 取詹納斯綠（JanusgreenB）1.0gRinge 氏?夜 100ml （十五）1%剛果紅染液 剛果紅 1g 蒸儲水 100ml （十六）Gomori 硝酸鉛作用液 0.05mol/L 醋酸緩沖液（pH5）lOOml 0.6 醋酸加蒸儲水 200ml、取其 42ml 醋酸鈉 1.36g 加蒸儲水 200ml,取其 158ml 共 200ml B-甘油磷酸鈉 2g 醋酸鉛 2g 5%氯化鎂 5ml 以上作用液在臨用時(shí)配制，最終在 pH55.2,過濾使用。 （王世藩匯編） 三、細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞融合溶液 （一）0.01mol/LPBS（磷酸鹽緩沖液 PhosphateBuff

12、erSaline PBS）pH7.2。 0.2mol/L 磷酸氫二鈉液（甲液）： NaH2P0412H2O35.814g 雙蒸水加至 500ml 0.2mol/L 磷酸二氫鈉液（乙液）:NaH2P0412H2O15.601g 雙蒸水加至 500ml 取甲液 36ml,乙液 14ml 和 NaCl8.2 克，加雙蒸水至 1000ml?；?勻待完全溶解分裝，經(jīng)高壓滅菌后保存于 4C 冰箱備用。 （二）50%PEG（聚乙二醇 Polyethyleneglycolmwl500） 稱取 0.5 克 PEG,用前放入試管中在酒精燈火焰上熔化，加入等量 37c 予熱的 MEM 培養(yǎng)液，混勻，保溫在 37c

13、水浴中待用。 （三）MEM 培養(yǎng)液（含 10%小牛血清） MEM 培養(yǎng)液（日本制藥株式會社）9.4g 雙蒸水 1000ml NaHCO31.5g 谷氨酰胺（L-glutamin）0.292g 56c 滅活 30 分鐘的小牛血清 110ml MEM 粉末加水溶解后，用 NaHCO3調(diào) pH 到 7.1（因在抽濾過程中 pH 升高 0.20.3）,然后加滅活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解 后，立即用 G6抽濾除菌，分裝，置 4c 冰箱保存?zhèn)溆谩?（四）0.25%胰蛋白酶一 0.02%EDTA 混合消化液 胰蛋白酶（Trypsin）粉 0.25g EDTA 粉 20.0mg 0.01mol/LPB

14、S 100ml 先用少量 PBS 溶解胰蛋白酶，然后將 EDTA 粉末和剩下的液體加 入混合，置 37c 水浴中 1 小時(shí)左右（待徹底溶解，液體呈透明為止）,用G5抽濾，分裝置 4c 冰箱中保存 （五）Hanks 液 1.原液甲 NaCl160g KCl8g MgSO47H2O2g MgCI26H2O2g 溶于 800ml儲水中。 CaCl2（無水）2.8g 溶于 100ml蒸儲水中 將兩種液體混合后，加水至 1000ml用濾紙濾過，再加 2ml氯仿防 腐，置 4c 冰箱備用。 原液乙 Na2HPO412H2O3.04g KH2PO41.2g 葡萄糖 20.0g 水至 1000ml,最后加入

15、2ml氯仿防腐，置 4c 冰箱備用 2.使用液 甲乙兩液各 1 份，雙蒸水 18 份，混勻分裝包扎好瓶口，經(jīng) 10 磅 15 分鐘高壓滅菌后置 4c 冰箱中保存。使用時(shí)用 5.6%NaHCO3調(diào) pH 溶于 800ml蒸儲水中, 用濾紙過濾，然后加 0.5%酚紅 80ml,再加 值到所需要求。 （六）1640 培養(yǎng)液（含 10%小牛血清） RPMI-1640 粉 10.39g 雙蒸水加至 1000ml 通入適量的 C02氣體，邊通入 CO2邊慢慢攪拌，使其（呈透明）完全 溶解。用 NaHCO31.5 克調(diào) pH 值至（J7.2。 雙抗 1 萬 u/ml10ml 滅活小牛血清 110ml 混勻上

16、述液體，立即用 G6抽濾除菌分裝，置 4c 冰箱備用。 （七）青、鏈霉素溶液 青霉素鈉鹽（40 萬u/瓶）5 瓶 鏈霉素（100 萬u/瓶）2 瓶 將兩者溶于 200ml0.9%的無菌生理鹽水，分裝小瓶，-30C 保存。雙抗在培養(yǎng)基中的終濃度為各 lOOu 為宜。 （八）二甲基亞碉誘導(dǎo) HL-60 細(xì)胞分化使用的終濃度為 1。4%。 （九）BrdU 溶液（200ug/m1） 用無菌青霉素瓶，在室溫下稱取 1.0mg,在無菌條件下加入滅菌生 理鹽水 9.0ml,溶解，混勻，用黑紙包嚴(yán)，避光置冰箱冰格中保存。 最好用時(shí)現(xiàn)配。 （十）2）SSC 溶液 用分析天平稱取氯化鈉 17.53 克，檸檬酸鈉

17、8.82 克溶于蒸儲水中，加 蒸儲水至 1000 毫升。 （十一）3%瓊脂： 取瓊脂粉 3 克，加入雙蒸水到 100 毫升，攪勻，高壓消毒后（15 磅 20 分鐘），冷藏備用，使用前重新加熱煮沸（貯存時(shí)間不宜過長）。 四、制備電鏡標(biāo)本的溶液 （一）2.5%戊二醛溶液 25%戊二醛 lOml 0.1mol/L 二甲碎酸鈉緩沖液 裝入茶色瓶中，保存于 4c 冰箱備用。 （二）0.1mol/L 二甲碎酸鈉緩沖液 二甲碑酸鈉 10.70g 蒸儲水 500ml 將二甲碑酸鈉置于 500ml容量瓶中，先加水約 400ml,震蕩使其溶 解，用 HCl 調(diào) pH 到 7.4,加入剩余蒸儲水，4c 冰箱保存。

18、（三）包埋劑 環(huán)氧樹脂 Epon81256.30g DDSA（十二烷基琥珀酸酊 Dodecenylsuccinic anhydride,DDSA）14.60g MNA（甲基內(nèi)次甲基鄰苯二甲酸酊 MethylNadic） 混合上述三種包埋劑成分，攪拌 30 分鐘使其充分混勻。再加加速劑2,4,6 一三（二甲氨基甲基）苯酚（2,4,6-tridimethyl aminomethylphenol,DMP-30） 1.5ml,繼續(xù)攪拌 30 分鐘， 置于干燥罐中 （室溫）備用。 （四）2%單寧酸 單寧酸 2g 雙蒸水 100ml 溶解后過濾裝茶色瓶中，4c 冰箱保存。 （五）高鎰酸鉀固定劑 檸檬酸三鈉 60mmol/L 氯化鉀 25mmol/L 氯化鎂 35mmol/L 高鎰酸鉀 125mmol/L pH 為 7.4-7.8,裝茶色瓶中，4c 冰箱中保存，有效期 2 個(gè)月左右。 （六）1%OsO4溶液 OsO40.5g 0.1mol/L 二甲碑酸鈉緩沖液。50ml OsO4一般為 0.5 或 1 克安瓶中封閉包裝，配制時(shí)剝?nèi)ド虡?biāo)，用自來水洗凈，放洗滌液中泡 412 小時(shí)后用水沖洗，在安瓶上劃痕，用蒸儲水洗凈，投入茶色瓶中，加緩沖液，用玻璃棒在