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文檔簡介
1、血紅素氧合酶【關鍵詞】 血紅素氧合酶摘要:目的 探討血紅素氧合酶1(HO1)對肝硬化大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護作用。方法 將大鼠隨機分為:正常組(N組)、硬化組(LC組)、假手術組(S組)、手術組(I/R組)和給藥組(I/R+hemin組)。除正常組外其余各組大鼠皮下注射體積分數(shù)為40%的CCl4溶液,每周2次,11周后形成肝硬化模型;停藥1周后進行肝臟缺血再灌注;于再灌注后6h檢測肝功能、抗氧化能力,免疫組織化學檢測核轉錄因子(NFB)、天冬半胱酶(caspase3)和HO1蛋白的表達。 結果 給予hemin誘導HO1高表達能減輕肝臟缺血再灌注后肝細胞損傷,提高錳超氧化物歧化酶(MnSOD
2、)水平,降低caspase3、NFB陽性表達。結論 HO1能有效地減輕肝硬化肝臟缺血再灌注損傷,其機制可能與提高MnSOD水平、降低caspase3及NFB表達有關。關鍵詞:血紅素氧合酶1;肝臟缺血再灌注;NFB;caspase3Protection of heme oxygenase1 against hepaticischemia reperfusion injury in cirrhotic ratsABSTRACT: Objective To study the proctective effect of heme oxygeanse1(HO1) on cirrhotic rats a
3、fter hepatic ischemia reperfusion injury. Methods All the rats were randomly divided into 5 groups as follows: normal group(N), liver cirrhosis group (LC), sham operation group (S), ischemia reperfusion group (I/R), and I/R+hemin group. Except for N group, the other groups were injected with 40% CCl
4、4 twice a week. After 11 weeks, the model of liver cirrhosis was formed. The segmental (70%) hepatic ischemia reperfusion operation was carried out one week later. The animals were sacrificed 6h after reperfusion. Blood was collected to measure the liver function, antioxidative ability, NFB and casp
5、ase3, and HO1 expressions were studied by immunohistochemistry method. Results Administration of hemin to induce high HO1 expression could lessen hepatic injury, increase MnSOD enzyme level, and decrease caspase3 and NFB expresssion. Conclusion HO1 plays an important role in protecting liver cirrhos
6、is against ischemia reperfusion injury by increasing MnSOD enzyme level and decreasing expression of caspase3 and NFB.KEY WORDS:heme oxygenase1; hepatic ischemia reperfusion; NFB; caspase3上消化道大出血、肝臟外科手術等過程中都經歷肝臟缺血再灌注(ischemia reperfusion, I/R)損傷這一臨床常見的病理變化過程。肝硬化時肝臟對缺血再灌注損傷更加敏感。近年人們發(fā)現(xiàn)血紅素氧合酶1(heme oxy
7、genase1, HO1)對肝臟缺血再灌注損傷有保護作用1。本實驗采用大鼠肝硬化肝臟缺血再灌注模型,觀察誘導HO1表達后肝組織caspase3、核轉錄因子B(nuclear factorkappB, NFB)及HO1的變化,探討HO1對肝硬化肝臟缺血再灌注的保護機制。1 材料與方法1.1 實驗動物及分組 健康雄性SD大鼠,體重200-250g,由西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供。將大鼠隨機分為:正常組(N組)、硬化組(LC組)、假手術組(S組)、手術組(I/R組)和給藥組(I/R+hemin組)。正常組和硬化組:入腹后直接取血和肝組織,不阻斷肝門血供。假手術組:入腹后只分離肝十二脂腸韌帶,不
8、阻斷肝門血供。手術組:游離肝十二脂腸韌帶,分清供應肝左葉和中葉的肝蒂,肝臟缺血30min,再灌注6h。給藥組:術前24h和12h給大鼠腹腔注射氯化鐵血紅素(hemin),每次0.3mmol/kg(30mol/100g),其余操作同手術組。其他各組給予等量生理鹽水腹腔注射。正常組每組6只大鼠,其余各組或亞組9-12只大鼠。1.2 主要試劑 CCl4分析純購自西安富力化學廠,橄欖油分析純購自國藥集團化學試劑有限公司,hemin購自美國Sigma公司,超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所,抗大鼠NFBp65、caspase3和HO1一抗購自武漢博士得生物工程
9、公司,即用型快速免疫組化MaxVisionTM試劑盒購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。1.3 模型制備1.4 實驗方法1.5 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據均用均數(shù)標準差(s)表示,采用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件進行單因素方差分析,以全體P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2 結果2.1 血清ALT、AST活性測定 LC組血清ALT、AST活性較N組明顯升高(P0.01)。肝臟缺血再灌注6h后,I/R組、I/R+hemin組血清ALT、AST活性迅速升高,與S組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)。I/R+hemin組與I/R組相比,酶活性降低,其差異也具有統(tǒng)計學意義(P0.01,表1)。2.2 血清MnS
10、OD、MDA含量測定 與N組比較,LC組MnSOD水平降低,MDA水平升高(P0.01)。肝臟缺血再灌注后6h時I/R組及I/R+hemin組MnSOD均低于S組,MDA高于S組(P0.01),但給予hemin再灌注后MnSOD水平高于同期I/R組,MDA水平低于I/R組(P0.01,表1)。表1 肝臟缺血再灌注6h時血清學指標(略)Table 1 The level of serum enzymes after 6h of hepatic ischemiaN: normal group; LC: liver cirrhosis group; S: shamoperation group; I
11、/R: ischemia reperfusion group; I/R+hemin: given hemin before ischemia reperfusion group; #P0.01 vs. N group; P0.01 vs. S group; P0.01 vs. I/R group2.3 肝組織NFB、caspase3免疫組化結果 NFB、caspase3在N組肝組織中幾乎沒有表達,在LC組和S組呈弱陽性表達。肝硬化大鼠肝臟缺血再灌注后6h,I/R組NFB、caspase3表達比S組明顯升高(P0.01)。I/R+hemin組再灌注6h時NFB、caspase3表達比同期I/R組明顯下降(P0.01,表2、圖1、圖2)。2.4 肝組織HO1免疫組化結果 HO1在N組無表達,LC組和S組有少量表達。再灌注6h時I/R組HO1表
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