實(shí)驗(yàn)六、兔血細(xì)胞的計(jì)數(shù)及鴨血細(xì)胞大小的測(cè)量

1、實(shí)驗(yàn)六、兔血細(xì)胞的計(jì)數(shù)及鴨血細(xì)胞大小的測(cè)量一一. .實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 利用顯微鏡并借助血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，計(jì)算單位體積的液體中所含細(xì)胞或微小生物的數(shù)量。二二. .試劑與器械試劑與器械 光學(xué)顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、兔血。兔血細(xì)胞計(jì)數(shù)兔血細(xì)胞計(jì)數(shù)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片 計(jì)數(shù)室 2蓋玻片 計(jì)數(shù)室 三實(shí)驗(yàn)步驟1.取血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，檢查計(jì)數(shù)板是否清潔，如有污垢，應(yīng)先洗滌干凈。然后將計(jì)數(shù)板放于低倍鏡下，熟悉計(jì)數(shù)室的構(gòu)造。然后加蓋玻片蓋住兩邊的小槽。2.充液：用小滴管將一小滴稀釋200倍的兔血滴在蓋玻片邊緣的玻片上，使稀釋血液借毛細(xì)管現(xiàn)象自動(dòng)滲入計(jì)數(shù)室中。2三實(shí)驗(yàn)步驟1.取血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，檢查計(jì)數(shù)板是否清潔，如有污垢，應(yīng)先

2、洗滌干凈。然后將計(jì)數(shù)板放于低倍鏡下，熟悉計(jì)數(shù)室的構(gòu)造。然后加蓋玻片蓋住兩邊的小槽。2.充液：用小滴管將一小滴稀釋200倍的兔血滴在蓋玻片邊緣的玻片上，使稀釋血液借毛細(xì)管現(xiàn)象自動(dòng)滲入計(jì)數(shù)室中。注意事項(xiàng): 如滴入過多,溢出并流入兩側(cè)槽內(nèi),使蓋玻片浮起,體積改變,會(huì)影響計(jì)數(shù)結(jié)果，需用濾紙把多余的溶液吸出，以槽內(nèi)沒有溶液為宜。如滴入溶液過少,經(jīng)多次充液,易產(chǎn)生氣泡,應(yīng)洗凈計(jì)數(shù)室,干燥后重做。三實(shí)驗(yàn)步驟3.計(jì)數(shù)：充液后靜止1-2分鐘，待紅細(xì)胞下沉后，方可進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)四角及中央共5個(gè)中方格內(nèi)的80個(gè)小方格中所有細(xì)胞數(shù)。25X16 計(jì)數(shù)板長(zhǎng)x寬x高= 1mm x 1mm x 0.1mm = 0

3、.1mm3 = 10-4ml(25x16 = 400小格子)細(xì)胞濃度計(jì)算公式：細(xì)胞濃度(細(xì)胞個(gè)數(shù)/ml)=(80小格內(nèi)細(xì)胞個(gè)數(shù)80) 400104稀釋倍數(shù) 計(jì)數(shù)時(shí)為防止重復(fù)和遺漏，應(yīng)按一定的順序，先自左向右數(shù)到最后一格，下一行格子則自右向左，再下一行又自左向右，即呈S形計(jì)數(shù)。細(xì)胞計(jì)數(shù)原則計(jì)數(shù)分布在刻線上的紅細(xì)胞時(shí)，依照“計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右”的原則，判斷標(biāo)準(zhǔn)為是否接觸三條邊線的中間線。如發(fā)現(xiàn)各中方格的細(xì)胞數(shù)目相差20個(gè)以上，表明血細(xì)胞分布不均勻，須重新計(jì)數(shù)重新計(jì)數(shù)。細(xì)胞計(jì)數(shù)原則X計(jì)算上側(cè)和左側(cè)接觸到中線的細(xì)胞排除下側(cè)和右側(cè)接觸到中線的細(xì)胞四. 注意事項(xiàng)：1.防止液體滴入

4、過多，否則溢出并流入兩側(cè)槽內(nèi)，會(huì)使蓋玻片浮起，體積改變，會(huì)影響計(jì)數(shù)結(jié)果。2. 先用低倍鏡找到血球計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)區(qū)，調(diào)節(jié)光源亮度以及孔徑光闌大小得到清晰的圖像。五. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和作業(yè)： 計(jì)算出每立方厘米(每毫升)的兔血中所含紅細(xì)胞的數(shù)量。六. 思考題： 1. 比較鳥類（鴨）與哺乳類動(dòng)物（兔）血紅細(xì)胞大小及 形態(tài)上的差異。 十字板十字板 分劃板分劃板 網(wǎng)格板網(wǎng)格板一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?利用測(cè)微尺測(cè)量細(xì)胞大小1. 常用顯微鏡目鏡測(cè)微尺種類鴨血鴨血細(xì)胞大小的測(cè)量細(xì)胞大小的測(cè)量二、實(shí)驗(yàn)器材:A mitotic fertilized egg from a sea urchin (海膽)9.2 Light Micros

5、copyFluorescence MicroscopyLaser-Scanning Confocal Microscopy(激光掃描共聚焦顯微鏡) For better resolution when imaging thick cells.鏡臺(tái)測(cè)微尺2. 測(cè)微尺的使用操作1毫米分成100個(gè)小格每一小格長(zhǎng)度 = 10微米(10m)1.取下目鏡,將目鏡測(cè)微尺的刻度面向下放入目鏡中,旋上透鏡(Olympus顯微鏡目鏡中已安裝了測(cè)微尺,不必自己安裝)；2.將鏡臺(tái)測(cè)微尺蓋片面朝上放在載物臺(tái)上,用低倍鏡觀察,調(diào)節(jié)焦距看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度；1 mm目鏡測(cè)微尺0 10 20 30 40 503.移動(dòng)鏡臺(tái)測(cè)微

6、尺,同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡,使目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺平行靠近,并將兩尺的“0”點(diǎn)刻度線或某刻度線對(duì)齊，然后從左向右查看兩尺刻度線另一重合處,記錄重合線間目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)。 目鏡測(cè)微尺的100格與鏡臺(tái)測(cè)微尺的50格重合在某一物鏡倍數(shù)下：目鏡測(cè)微尺每格的值 =目鏡測(cè)微尺的格數(shù)鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)x10微米鏡臺(tái)測(cè)微尺目鏡測(cè)微尺0 10 20 30 40 50 60 70 80 90100a. 將綠豆大小血滴滴于清潔玻片上。 b. 另取邊緣平滑的玻片作為推片：推片一端放在血滴的前方，逐漸后移，接觸血滴并使血滴沿推片邊緣均勻展開，然后將推片與玻片保持 30 45 度角，輕輕用力，均勻而迅速地將推片沿玻片表

7、面向前推至玻片另一端，形成頭體尾明顯的舌形血膜。立即將玻片搖動(dòng)，使其快速干燥，忌熱力干燥。三、實(shí)驗(yàn)步驟:鴨血細(xì)胞的觀察與測(cè)量 1.制作鴨血涂片：三、實(shí)驗(yàn)步驟:鴨血細(xì)胞的觀察與測(cè)量2.血涂片染色與觀察：將已經(jīng)制備好的鴨血涂片放在染色盤架上,滴幾滴瑞氏染液(伊紅美藍(lán)混合染料溶于甲醇中制得）于玻片上蓋滿涂片部分,靜置染色1分鐘,滴加等量1/15mol/L磷酸緩沖液，輕輕搖動(dòng)混勻,再靜置 染色 510分鐘，最后用清水緩緩沖洗（從玻片的背面沖洗）1分鐘,傾斜放置,涼干后進(jìn)行觀察測(cè)量。3.鴨血紅細(xì)胞大小的測(cè)量：移去鏡臺(tái)測(cè)微尺，換鴨血涂片。先用低倍鏡觀察全片,了解涂片染色、細(xì)胞分布情況， 選擇細(xì)胞分布均勻的

8、部分( 常在血膜體尾交界部), 轉(zhuǎn)高倍物鏡按一定順序檢查。涂布均勻的鴨血紅細(xì)胞測(cè)量10個(gè)鴨血紅細(xì)胞四.注意事項(xiàng)1.不同物鏡下目鏡測(cè)微尺代表的大小不同。五.實(shí)驗(yàn)結(jié)果和作業(yè)：1.分別計(jì)算不同物鏡放大倍數(shù)(10 x, 20 x, 40 x)下 目鏡測(cè)微尺的單位。2.用目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺測(cè)量一下 鴨血紅細(xì)胞的長(zhǎng)軸和短軸， 分別測(cè)量10個(gè)鴨血紅細(xì)胞，求其平均值(多少微米？)。 實(shí)驗(yàn)分組：實(shí)驗(yàn)分組：前半部分同學(xué)：前半部分同學(xué)： 1.1.血球計(jì)數(shù)血球計(jì)數(shù): :滴稀釋的兔血（滴稀釋的兔血（B413/B414B413/B414 ) )鏡檢（鏡檢（B409B409）。）。( (血球計(jì)數(shù)板血球計(jì)數(shù)板1 1片片/

9、 /人）人）2.2.鴨血涂片制作：鴨血涂片制作：（B413/B414),B413/B414),血細(xì)胞大小測(cè)量（血細(xì)胞大小測(cè)量（B409) B409) 鏡臺(tái)測(cè)微尺（鏡臺(tái)測(cè)微尺（1 1片片/ /人）。人）。后半部分同學(xué)：后半部分同學(xué)：1.1.鴨血涂片制作鴨血涂片制作: :（B413/B414),B413/B414),血細(xì)胞大小測(cè)量（血細(xì)胞大小測(cè)量（B409) B409) 鏡臺(tái)測(cè)微尺（鏡臺(tái)測(cè)微尺（1 1片片/ /人）。人）。2.2.血球計(jì)數(shù)血球計(jì)數(shù): :滴稀釋的兔血（滴稀釋的兔血（B413/B414B413/B414）鏡檢）鏡檢(B409(B409）。）。Olympus顯微鏡目鏡中已安裝了目鏡測(cè)微尺顯微鏡目鏡中已安裝了目鏡測(cè)微尺