論文寫作格式模板

1、小4號仿宋體、居中，作者在上、指導(dǎo)教師在 下；作者與標(biāo)題、指導(dǎo)教師與摘要之間空小四單倍行距。摘要內(nèi)容與正文左右縮進(jìn)2字符，小4號仿宋體，兩端對齊方式排列，首行縮進(jìn)2字符，行距20磅。不能用第一、第三人稱，不得出現(xiàn)評價(jià)性語言。標(biāo)題小2號黑體、居中。應(yīng)簡練，一般不超過25個(gè)漢字。木聚糖降解菌的篩選及分子鑒定“摘要”、“關(guān)鍵詞”字體為小四黑體。作 者：×××指導(dǎo)老師：×××摘要：從寶天曼地區(qū)采集的腐木中富集、分離出了16株能夠降解木聚糖的菌株。利用剛果紅活性染色法對菌株進(jìn)行染色，根據(jù)透明圈的大小篩選出6株產(chǎn)木聚糖酶菌株。6株菌株在搖床180

2、 r/min、28 的條件下發(fā)酵培養(yǎng)48 h，利用DNS法測定各菌株木聚糖酶的活力大小，結(jié)果表明菌株M3的酶活力最高，酶活力為19.098 U/mL。提取菌株M3的基因組進(jìn)行26S rDNA PCR擴(kuò)增并進(jìn)行序列測定，經(jīng)相似性分析和系統(tǒng)發(fā)育樹分析，初步鑒定菌株M3屬于Trichosporon porosum。關(guān)鍵詞：木聚糖降解菌；篩選；分子鑒定；木聚糖酶；酶活正文與關(guān)鍵詞之間空小4單倍行距一行。正文文字用四號宋體、22磅行距、全角標(biāo)點(diǎn)詞與詞之間用分號。一般為35個(gè)，盡量不與標(biāo)題重復(fù)。0 引言種名用斜體上標(biāo)格式按出現(xiàn)的先后順序標(biāo)序；連續(xù)文獻(xiàn)如2-6，不連續(xù)文獻(xiàn)如1,4,7來表示。纖維素類物質(zhì)是一

3、類大量存在而又可再生的重要潛在資源，半纖維素占總纖維素的15%30%，其中主要成分是木聚糖。與纖維素相比，半纖維素更易為微生物所降解和轉(zhuǎn)化1。木聚糖酶是一類以內(nèi)切方式降解木聚糖分子中-1,4-木糖苷鍵的酶類，其水解產(chǎn)物主要是木二糖和木寡糖，也有少量木糖和阿拉伯糖。該酶具有廣泛的應(yīng)用前景2，該酶在造紙業(yè)中部分替代二氧氯用于紙漿漂白，可改善紙漿性能；木聚糖酶作為飼料添加劑，可提高飼料的能量值和禽、畜對飼料的利用率；食品工業(yè)中可利用木聚糖酶降解半纖維素的主要成分木聚糖生產(chǎn)低聚木糖等高附加值的產(chǎn)品?？梢娔揪厶敲冈诠I(yè)中的用途非常廣泛。因此國內(nèi)外很多研究者都致力于對木聚糖酶的研究，已有不少研究者對黑曲霉

4、、木霉(Trichoderma sp.)等真菌及短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)、環(huán)狀芽孢桿菌(B.circulans)等細(xì)菌的木聚糖酶進(jìn)行了研究。英文縮寫首次出現(xiàn)，應(yīng)標(biāo)出英文全稱。森林腐木中富含半纖維素，這種環(huán)境中有大量的微生物都能分解木聚糖，從中很容易篩選得到高效降解木聚糖的菌株。本研究主要從寶天曼森林腐木中富集、分離、篩選出產(chǎn)木聚糖酶菌株，并分析它們木聚糖酶的酶活力大小，找出酶活力較高的分離菌株。最后通過分子生物學(xué)方法測定分離菌株的26S rDNA序列并對其進(jìn)行序列相似性分析和系統(tǒng)發(fā)育樹分析，初步鑒定出分離菌株在系統(tǒng)發(fā)育上的分類地位。一級標(biāo)題用阿拉伯?dāng)?shù)字、小3號黑體、左頂

5、格，不加標(biāo)點(diǎn)，段前、段后各空四號單倍行距一行。一級標(biāo)題不可置于頁尾。序號與標(biāo)題文字之間空一字之距。二級標(biāo)題采用阿拉伯?dāng)?shù)字1.1、1.2等格式標(biāo)引、4號黑體、左頂格、不加標(biāo)點(diǎn)。序號與標(biāo)題文字之間空一字之距。1 材料與方法1.1 樣品數(shù)值與單位之間空半字之距。取自實(shí)驗(yàn)室保存的寶天曼地區(qū)采集的腐木。1.2 試劑2.2%溴鉀酚綠、1%剛果紅溶液、1 mol/L NaCl溶液、檸檬酸緩沖液、木糖溶液、DNS試劑、試劑酵母基因組提取試劑盒、PCR Magic Mix2.0、引物NL1、引物NL4、TAE緩沖液、瓊脂糖凝膠、EB試劑。1.3 培養(yǎng)基3富集培養(yǎng)基：木聚糖1%、酵母氮基礎(chǔ)培養(yǎng)基1%、氯霉素(80

6、 L/100 mL)；英文、數(shù)字、符合等用Time New Rome字體。分離培養(yǎng)基：酵母提取物0.5%、葡萄糖1%、溴鉀酚綠2%、瓊脂2%、氯霉素（80 L/100 mL）；鑒別培養(yǎng)基：木聚糖1%、酵母氮基礎(chǔ)培養(yǎng)基1%、瓊脂2%、氯霉素（80 L/100 mL）；三級標(biāo)題采用阿拉伯?dāng)?shù)字等格式標(biāo)引，4號宋體、左頂格、不加標(biāo)點(diǎn)，序號與標(biāo)題文字之間空一字之距。斜面培養(yǎng)基：酵母粉0.3%、麥芽粉0.3%、蛋白胨0.5%、瓊脂2%、氯霉素（80 L/100 mL）；1.4 菌株篩選4,5 富集培養(yǎng)取7支干凈小試管，向每支試管中分裝入35 mL富集培養(yǎng)基，于121 高壓滅菌鍋中滅菌20 min。用鑷子夾

7、取少許實(shí)驗(yàn)室保存的7種森林腐木分別放入已滅菌的富集培養(yǎng)基中，于28 溫箱中富集培養(yǎng)23 d。 平板分離對培養(yǎng)后變混濁的富集培養(yǎng)液按照梯度稀釋法用無菌水稀釋到10-5，在超凈工作臺中的無菌條件下，準(zhǔn)確吸取100 L的10-310-5不同稀釋倍數(shù)的菌液涂布于已滅菌的平板培養(yǎng)基上，于28 溫箱中倒置培養(yǎng)23 d。 純化菌種根據(jù)菌落形態(tài)特征的比對，找出不同形態(tài)的菌株。在無菌條件下，挑取不同形態(tài)的單菌落在已滅菌的純化培養(yǎng)基上進(jìn)行扇形劃線，于28 溫箱中倒置培養(yǎng)23 d。按照同樣的方法劃線23次后即可得到純菌落。用鑷子夾取已滅菌的牙簽，將純化培養(yǎng)基中的純菌落點(diǎn)蘸到鑒別培養(yǎng)基上，于28 溫箱中倒置培養(yǎng)23

8、d。待菌落長大后用1%剛果紅進(jìn)行活性染色30 min，傾去染液，再用1 mol/L NaCl溶液漂洗1 h，觀察菌落周圍是否有透明圈出現(xiàn)以及透明圈的大小。出現(xiàn)透明圈的菌落即為所需要的木聚糖降解菌，再選出透明圈大且明顯的菌株接種到斜面培養(yǎng)基上于4 冰箱中保存?zhèn)溆?。表包括表序、表題、表格、表注等。表與上下文之間空小四、單倍行距，標(biāo)題在表上、小四宋體，表序與標(biāo)題間空一字之距；表格為“三線表”格式（自動(dòng)套用格式-簡明型1），首、尾線為粗線，表內(nèi)文字為5號宋體。1.5 木聚糖酶活力的測定 木糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取烘干好的木糖0.1000 g溶解于蒸餾水中后，再用100 mL容量瓶定容至100 mL，得到1

9、mg/mL的木糖溶液。用木糖制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的體系見表1。表1 制備木糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的溶液體系（單位：mL）編號0123456木糖標(biāo)準(zhǔn)液蒸餾水DNS02.01.50.21.81.50.41.61.50.61.41.50.81.21.51.01.01.51.20.81.5注：表中所用試劑為純試劑表注在表格下方，5號仿宋字，與正文左右縮進(jìn)2字符。取7支帶刻度的平底試管，編號為17，分別加入上述溶液。于沸水浴中煮沸5 min后，立即放入冷水中冷卻，加蒸餾水定容至25 mL，用TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)在540 nm波長下測OD值并制作工作曲線備用。1.5.2 搖瓶培養(yǎng)取一環(huán)旺盛生長于斜面培養(yǎng)基上

10、的菌種接種到已滅菌的種子培養(yǎng)基中，28 、180 r/min進(jìn)行三角瓶搖床培養(yǎng)24 h，取2 mL菌液加入已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中28 ，180 r/min搖床培養(yǎng)48 h。 木聚糖酶粗酶液的制備取5 mL發(fā)酵培養(yǎng)基菌液于已滅菌的10 mL離心管中，在4 離心機(jī)中6000 rpm離心20 min，轉(zhuǎn)移上清至另一離心管，則為所需的粗酶液。取各酶液1 mL裝入1.5 mL離心管中沸水浴煮沸10 min得到失活酶液作為空白對照。 木聚糖酶酶活力的測定6取25 mL具蓋帶刻度的平底試管，加入1.5 mL 1%木聚糖檸檬酸緩沖液于50 水浴預(yù)熱15 min，再加入0.5 mL相應(yīng)酶液(對照中加入0.5 mL

11、滅活酶液)，50 水浴保溫30 min(隔幾分鐘震蕩數(shù)次)。然后加入1.5 mL的DNS試劑，沸水浴煮沸5 min，立即放入冷水中冷卻，并定容至25 mL。版面尺寸：A4（210毫米×297毫米）。正文位置：上、下邊界25毫米、左邊界30毫米、右邊界20毫米、裝訂線位置定義為0毫米。1.6 菌株的分子鑒定 基因組DNA的提取菌株基因組DNA的提取采用酵母菌基因組提取試劑盒法。用接種環(huán)從斜面培養(yǎng)基上取三環(huán)生長旺盛的酵母菌細(xì)胞，懸浮于500 L無菌水中，12000 rpm離心1 min，棄上清，沉淀即為各菌株的菌體。按照酵母菌基因組提取試劑盒中使用說明書上的流程進(jìn)行各菌株基因組的提取，并

12、將其保存于TE緩沖液中，放入4 冰箱中保存?zhèn)溆谩⒏骶昊蚪M進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析，根據(jù)條帶的亮度確定基因組的稀釋倍數(shù)，作為PCR擴(kuò)增的模板。2 結(jié)果與分析2.1 菌株篩選用木聚糖作為唯一碳源從實(shí)驗(yàn)室保存的腐木中分離能產(chǎn)木聚糖酶的菌種。2.2 基因組DNA的提取和PCR的擴(kuò)增以NL1和NL4作為引物對菌株M3的26S rDNA基因組做特異性PCR反應(yīng)擴(kuò)增。將擴(kuò)增的基因組進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析得到單一條帶，片段大小長度約為600 bp，擴(kuò)增產(chǎn)物無明顯非特異擴(kuò)增現(xiàn)象，結(jié)果見圖1。圖包括圖形、圖序、圖題、圖注。圖題在圖下、小4號宋字、加粗，圖序與圖題間空一字之距；圖注在圖題下方、5號仿宋字，與正文

13、左右縮進(jìn)2字符；圖形中應(yīng)對與文中相關(guān)的信息標(biāo)注。750bp500bp12圖1 菌株M3 26S rDNA電泳圖采用小4號宋體，用“第×頁（共×頁）”的格式，居中，距下邊界15毫米的位置。注：1、DL2000marker；2、菌株M32.3 26S rDNA 序列相似性分析測定菌株M3的26S rDNA序列，長度為595 bp，將獲得的26S rDNA堿基序列經(jīng)DANMAN軟件處理后在GenBank核酸序列數(shù)據(jù)庫中通過BLAST進(jìn)行同源序列搜索及相關(guān)信息檢索，得到菌株M3的26S rDNA序列與其他菌種的相似性，結(jié)果見表2。檢索結(jié)果表明，菌株M3與Trichosporon的2

14、6S rDNA序列有較高的相似性。3 討論木聚糖作為植物半纖維素的重要組分，是自然界繼纖維素之后含量第二豐富的可更新的多糖。以往的研究中，半纖維素的再利用通常經(jīng)過酸水解處理，而后再經(jīng)微生物轉(zhuǎn)化為生產(chǎn)產(chǎn)品。然而，盡管酸水解速度快，但伴隨有毒性化合物產(chǎn)生，對隨后的生物轉(zhuǎn)化過程有影響。因自然界中許多微生物類群都能產(chǎn)生木聚糖酶，且微生物木聚糖酶水解法處理半纖維素更為安全和有效，因而大力開發(fā)經(jīng)濟(jì)、高效的微生物木聚糖酶具有重要意義。以往研究的木聚糖降解菌主要集中在霉菌、放線菌等，而霉菌、放線菌等生產(chǎn)木聚糖酶周期相對較長，通常為47 d。少數(shù)產(chǎn)木聚糖酶細(xì)菌的產(chǎn)酶效率相對較低。本研究以木聚糖作為唯一碳源從森林

15、腐木中分離、篩選出6株木聚糖降解菌。利用剛果紅活性染色法對各菌株染色，根據(jù)透明圈的大小初步判定M3降解木聚糖的能力較強(qiáng)。進(jìn)一步對各菌株進(jìn)行酶活力測定，結(jié)果表明菌株M3在搖床180 r/min，28 ，48 h條件下利用1%木糖的酶活力最高，酶活力為19.098 U/mL。M3產(chǎn)酶效率高，發(fā)酵周期短，僅48 h。通過26S rDNA序列相似性分析得出，菌株M3與Trichosporon porosum親緣關(guān)系較近，其中與Trichosporon porosum的相似性為100%，因此初步鑒定菌株M3屬于Trichosporon porosum。用分子生物學(xué)的方法對酵母菌進(jìn)行分子鑒定，是一種快速、

16、簡便和有效的方法。利用26S rDNA序列分析方法對酵母菌進(jìn)行分離和分子鑒定，為研究酵母菌打下了基礎(chǔ)。頁碼采用小4號宋體，用“第×頁（共×頁）”的格式，居中，距下邊界15毫米的位置。一般位于正文結(jié)尾后下隔2行，居中，采用小3號黑體，字與字之間空半格，與參考文獻(xiàn)目錄間空小四單倍行距。如距離小，可以另起一頁。參 考 文 獻(xiàn)1 周世寧,陸勇軍,杜揚(yáng).木聚糖降解菌的篩選和木聚糖酶性質(zhì)的研究J.中山大學(xué)學(xué)報(bào),1996,35(1):91-96.參考文獻(xiàn)目錄標(biāo)引序號用阿拉伯?dāng)?shù)字、方括號括住，按在正文中出現(xiàn)的先后順序排列，序號與內(nèi)容間空半格，內(nèi)容為小4號仿宋體，20磅行距，左頂格，拐行時(shí)與

17、序號后文字齊，半角標(biāo)點(diǎn)。作者3人以下全部寫出，中間用逗號隔開，3人以上用 “第一作者，等”。2 黃云紅,等.木聚糖酶高產(chǎn)微生物的篩選和鑒定J.江西師范大學(xué)學(xué)報(bào),2002,26(3):245-248.3 王辰,白逢彥.海南熱帶雨林腐木上酵母菌物種多樣性研究J.菌物學(xué)報(bào),2009,28(3):354-362.4 國春艷.酸性木聚糖酶產(chǎn)生菌的篩選及酶學(xué)性質(zhì)分析J.中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,43(7):1524-1530.5 孫豐慧,李安明.耐堿性木聚糖酶產(chǎn)生菌的篩選及發(fā)酵條件研究J.應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào),2008,14(3),436-439.文獻(xiàn)題目后應(yīng)有相應(yīng)的標(biāo)識。如期刊J,著作M,學(xué)位論文D,報(bào)紙N

18、,專利P等。6 濮智穎.酸性木聚糖酶產(chǎn)生菌產(chǎn)酶條件及酶學(xué)性質(zhì)研究J.陜西教育學(xué)院學(xué)報(bào),2008,24(2):101-105.7 陳紅歌. 酸性木聚糖酶產(chǎn)生菌的篩選及產(chǎn)酶條件J.微生物學(xué)報(bào),1999,39(4):350-354.8 Anthony T,Gunasekaran P,Raj K C,Rajendran A,Gunasekaran P.Inhibition of pro- teases during fermentation improves xylanase production by alkali tolerant Aser- perillus fumigatus AR1J.Jou

19、rnal of Bioscience and Bioengineering,2003,96(4): 394-406.9 Fukusaki E ,Panbangred W.The complete nucleotide sequence of the xylanase gene of Ba-cillus pumilusJ.Febs Letters,1984,171(2):197-201.10 周德慶.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊M.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1986:197-231.年，卷號（期號）：起止頁碼等信息應(yīng)齊全。沒有卷號可不標(biāo)。著作可只標(biāo)出出版年份。作者用小四號Time New Rome體、“姓”

20、用大寫字母拼寫，“名字”的第一個(gè)字母用大寫，其余小寫，兩字者加連字符。Selection and Molecular Identification of英文標(biāo)題用四號Time New Rome體、加粗、行距22磅，單詞首字母大寫（介詞和連詞除外），與姓名之間空小四單倍行距。如頁面距離太小，可放到下一頁。Xylan-degrading YeastGUAN Wei-weiAbstract: Sixteen Xylan-degrading strains are filtered out by enriching and separating from the rot wood gathered from the Mountain BaoTianMan. Using dye Congo red staining on strains, six Xylan-degrading strains are selected by observating the transparent circles size of these strains. Six strains are cultured in the