實驗七酵母RNA的提取及鑒定

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上姓名：郭沈杰 年級專業(yè)：2012級生物科學 同組者：蔡萍萍學號：實驗七 酵母RNA的提取及鑒定 一、實驗目的掌握稀堿法提取酵母RNA的原理和方法。二、實驗原理酵母核酸中RNA含量較多，DNA含量則少于2%。RNA可溶于堿性溶液，當堿被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。用堿液提取的RNA有不同程度的降解。三、實驗儀器1、離心機2、水浴鍋3、電爐4、燒杯5、量筒6、移液管7、玻璃棒8、濾紙9、漏斗10、試劑瓶11、電子天平12、pH試紙（pH114）四、實驗試劑1、干酵母粉2、0.2%氫氧化鈉溶液：2g氫氧化鈉溶于蒸餾水并稀釋至1000ml。3、乙酸（A.R

2、.）4、95%乙醇5、 無水乙醚（A.R.）6、10%硫酸：濃硫酸（比重1.84）10ml，緩緩傾于水中，稀釋至100ml。7、氨水（A.R.）8、5%硝酸銀溶液：5g硝酸銀溶于蒸餾水并稀釋至100ml，貯于棕色瓶中。五、實驗步驟(一)RNA的提?。?、稱取2g干酵母粉于100ml燒杯中，加入0.2%氫氧化鈉溶液10ml，沸水浴加熱30分鐘，經常攪拌（如沸水浴過程中溶液蒸干可再加58ml氫氧化鈉）。冷卻，然后加入乙酸數滴，使提取液呈酸性（pH試紙檢驗，pH56），離心10-15分鐘（4000r.p.m）。倒取上清液，加入2倍體積的95%乙醇，邊加邊攪，加畢，靜置，待完全沉淀，過濾。2、濾渣先用

3、95%乙醇洗2次，每次約5毫升，再用無水乙醚洗2次，每次也約5ml。3、洗滌時可小心地用玻璃棒攪動沉淀。乙醚濾干后，濾渣即為粗RNA，可鑒定和測定含量用。（二）鑒定：1、取上述RNA約0.5g，加10%硫酸5ml,加熱至沸12分鐘，將RNA水解。2、水解液2ml，加入氨水2ml和5%硝酸銀溶液1ml，觀察是否產生絮狀嘌呤銀化合物。注意事項：1、離心管回收2、離心的時候，要兩兩對稱放置，且離心管中溶液的量基本一樣。否則會遭成離心機轉子的損壞。六、實驗結果(一)RNA的提取：加入乙酸使溶液呈酸性，溶液呈土黃色。進行離心后，沉淀沉于離心管的下部，上半部分上清液呈土黃色。取上清液，加入2倍體積的95%

4、乙醇后，溶液呈現白色渾濁狀完全渾濁后，上清液呈白色，沉淀為白色。過濾洗滌后，得RNA粗品。（二）鑒定：（1）水解后，溶液呈無色透明狀。加入氨水后，溶液仍澄清，溶液中似有油狀物質產生。加入硝酸銀后，仍似有油狀物質產生。一段時間后，產生白色絮狀沉淀。（2）取水解液0.5ml，加苔黑酚三氯化鐵試劑1ml，加熱至沸1min，觀察顏色變化七、實驗分析稱取干酵母粉：2.0096g最后得到的RNA粗品：0.034 gRNA提取率（%）=RNA質量（g）/干酵母粉質量（g）x100%本實驗中RNA提取率（%）= 0.0346 g / 2.0096g = 1.722%（稀堿法提取的RNA為變性RNA）本實驗為定

5、性實驗，提取酵母中的RNA中，產生白色沉淀時可能因副反應產生的其他沉淀，即最終的沉淀中可能混有其他雜質，不適于進行定量測定。依據：酵母細胞富含核酸，且核酸主要是RNA，含量為干菌體的2.67%10.0%，而DNA含量較少，僅為0.03%0.516%。為此提取RNA多以酵母為原料。工業(yè)上制備RNA多選用低成本、適于大規(guī)模操作的稀堿法或濃鹽法。這兩種方法所提取的核酸均為變性的RNA，主要用作制備單核苷酸的原料，其工藝比較簡單。八、實驗注意事項1. 過濾時, 洗滌不能帶水, 否則沉淀粘在濾紙上取不下來。2. 有時絮狀沉淀出現較慢, 可放十多分鐘。 3. 利用等電點控制RNA析出時，應嚴格控pH。4. 稀堿法提取的RNA為變性RNA，可用于RNA組分鑒定及單核苷酸制備，不能作為RNA生物活性實驗材料。九、思考題 1、簡述核酸分離純化的一般原則。保持核算一級結構的完整性；盡量排除其他分子的污染，保持核酸純度。 2、RNA提取過程中的關鍵步驟及注意事項有哪些？過濾時，洗滌不能帶水，否則沉淀粘在濾紙上取不下來；有