法醫(yī)物證學各章知識整理

1、【精品文檔】如有侵權，請聯(lián)系網站刪除，僅供學習與交流法醫(yī)物證學各章知識整理.精品文檔.第二章 法醫(yī)物證分析的遺傳學基礎法醫(yī)物證學：是以法醫(yī)物證為研究對象，以提供科學證據為目的，研究應用生命科學技術解決案件中與人體有關的生物檢材鑒定的一門學科。法醫(yī)物證的特點：法醫(yī)物證的穩(wěn)定性受環(huán)境條件的影響；法醫(yī)物證屬于“科學證據”。法醫(yī)物證學生物檢材遺傳標記個人識別遺傳（heredity）：生物繁衍過程中，子代與親代相似的現(xiàn)象。變異（variation）：生物繁衍過程中，子代與親代有所不同的現(xiàn)象。遺傳標記（genetic marker，GM）：個體的單位遺傳性狀作為標志用于法醫(yī)物證分析時，這種遺傳性狀就稱為遺

2、傳標記。遺傳標記顯然具有以下特點： 特定性-遺傳多態(tài)性 穩(wěn)定性-終身不變、對環(huán)境的耐受性 反映性 -可檢測性遺傳性狀：生物體表現(xiàn)出來的形態(tài)特征和生理生化特性稱為性狀。如果性狀的產生是由遺傳因素決定的，稱為遺傳性狀。單位遺傳性狀是指可檢測的、由遺傳決定的、并能夠以一定的規(guī)律從親代傳給下一代的形態(tài)學、生理學及分子生物學特征?；颍耗軌虮磉_特定功能的產物，并決定生物特定性狀的一段DNA序列?；蜃╨ocus)：基因在染色體上的一個特定位置等位基因: 同一個基因座上的基因可以有不同類型，它們之間存在一級結構的差異，這種有差異的基因稱為等位基因復等位基因：對群體而言，一個基因座上具有3個或3個 以上的

3、等位基因，稱為復等位基因，如ABO血型、TH01基因型：個體一個或多個基因座的等位基因的組合，是生物體可見性狀的實際基因組成?；蜃系牡任换蚨际浅蓪Υ嬖诘摹?純合子：成對的等位基因相同。雜合子：成對的等位基因不同。表型：是指生物體某特定基因所表現(xiàn)出的性狀。法醫(yī)學含義：1、表型是基因型決定的 2、表型是個體基因型檢測的結果。 3、型檢測的結果可以對未知基因型進行推斷。 4、DNA水平的檢測結果也是表型。 5、表型可能和真實的基因組成之間存在偏差孟德爾分離律：指在生殖細胞通過減數分裂形成配子時，成對的等位基因彼此分離，并獨立地分配到不同配子中自由組合律：在配子形成時，不同基因座上的非等位基因隨

4、機地自由組合，形成子代基因型先決條件：各基因座間沒有遺傳連鎖關系。要求：選擇符合自由組合律的遺傳標記 位于不同染色體上 在同一染色體上相距較遠的位置 通過群體調查證實沒有遺傳連鎖關系（基因座獨立性檢驗）母 系 遺 傳(線粒體DNA)：(1) 遺傳物質位于細胞質中，不受核移植的影響 (2) 無有絲分裂和減數分裂的周期變化 (3) 子代只表達母方的特征 應用：母系進化研究，缺乏父親的親子鑒定，其他男性伴性遺傳(Y染色體DNA)：（1）Y染色體非重組部分的DNA序列 （2）連鎖遺傳（以單倍體形式遺傳） （3）只遺傳給男性子代 應用：父系進化研究，缺乏母親的親子鑒定，性犯罪連鎖(linkage) ：

5、每個染色體上必然集合著許多基因，基因的這種集合叫連鎖。完全連鎖(complete linkage) ： 同一條染色體上的兩個非等位基因，在遺傳過程中完全不分離的遺傳現(xiàn)象群體： 包含同一物種所有的個體。 Hardy-Weinberg群體： 在一定地域內一群隨機婚配，能實現(xiàn)基因世代傳遞并保持穩(wěn)定的許多個體的集群。gene Pool(基因庫)： 一個群體內所包含的全部基因的總和遺傳多態(tài)性(genetic polymorphism) ： 對一個群體而言，控制遺傳標記的基因座上存在有2個或2個以上等位基因，并且等位基因的頻率大于0.01?；蝾l率：群體中某等位基因數目占該基因座上所有等位基因總數的百分比

6、?；蛐皖l率：群體中某基因座上的基因型在全部基因型中所占百分比表型頻率：就某一性狀而言，某一表型在群體中所占百分比Hardy-Weinberg平衡定律：群體無限大； 隨機婚配； 沒有突變；沒有大規(guī)模的遷移和沒有選擇因素的影響。 結論是群體中的基因頻率和基因型頻率在逐代傳遞中保持不變。Hardy-Weinberg平衡定律的意義：1.反映基因頻率和基因型頻率的關系 2.群體樣本的檢驗。連鎖平衡（linkage equilibrium，LE）：位于不同染色體的基因座，或者位于同一染色體相距較遠的基因座之間常常是按照隨機原則進行組合的，呈不連鎖遺傳。這種基因座之間沒有相關性的狀態(tài)稱為連鎖平衡連鎖不平衡

7、：在遺傳過程中，如果不同基因座上的等位基因沒有按照孟德爾自由組合定律的隨機原則組合時，這些基因座的遺傳則處于一種連鎖不平衡狀態(tài)。雜合度(heterozygosity) ：群體中某遺傳標記所有基因型中雜合子所占的比例。個人識別率(probability of discrimination power, DP) ：在群體中隨機抽取兩個體，兩者的遺傳標記表型不相同的概率。非父排除概率(excluding probability of paternity, PE) ： 指孩子的非親生父親的男子，能夠被某個遺傳標記系統(tǒng)排除的概率。第3章 DNA多態(tài)性的分子基礎DNA的分子結構：一級結構是指DNA分子中核

8、苷酸的排列順序（3,5-磷酸二酯鍵，方向：5端3端）；二級結構是指兩條DNA單鏈形成的雙股螺旋結構；三級結構則是指雙鏈DNA進一步扭曲盤旋形成的超級螺旋結構。寡核苷酸：是二至幾十個核苷酸殘基以磷酸二酯鍵連接而成的線性核苷酸片段。寡核苷酸可由儀器自動合成，可作為DNA合成的引物（primer）、基因探針（probe）等，在分子生物學研究中具有廣泛用途。探針probe：標記有示蹤物的寡核苷酸片段。通過與靶DNA特異性結合（雜交），檢測靶DNA分子。引物primer：與模板DNA結合，引發(fā)DNA的合成反應中合成鏈的延伸反應。DNA分子的理化性質：（一）核酸的高分子性質 ：粘性 酸堿性 紫外吸收 （二

9、）DNA的變性和復性：變性 復性 降解 雜交DNA變性denaturation:在一定條件下，堿基間氫鍵被打開，互補 DNA雙鏈變?yōu)閮蓷l單鏈的過程(變性因素：加熱、溶液堿性、有機溶劑)增色效應:在熱變性的過程中，隨變性溫度升高，DNA的紫外吸收增強，A260值升高融鏈溫度（melting temperature，Tm）:融鏈曲線的中點所示溫度。是一半DNA發(fā)生變性時的溫度。Tm的高低反映了DNA分子的熱穩(wěn)定性程度的高低（C+G含量越高Tm越高，高離子強度可以增加溶液中DNA分子的穩(wěn)定性）。降解：DNA分子的共價鍵斷裂，形成多個分子量更小的片段的過程（法醫(yī)學意義：高度降解的DNA片段，有可能使待

10、測遺傳標記發(fā)生破壞，而失去檢測的價值）。DNA復性：變性因素撤除后，原變性的兩條互補單DNA鏈通過堿基配對重新結合為雙鏈DNA的過程退火：加熱后變性的DNA在溫度降低過程中的復性。復性的影響因素：1、復性溫度：高：不易形成氫鍵，不易發(fā)生錯配，特異性高。低：氫鍵容易形成，易發(fā)生錯配，特異性差。參考溫度：Tm值下25 2、離子強度：離子可以中和單鏈DNA分子中所帶的負電荷，促進單鏈DNA分子之間的聚合高：錯配率高、特異性差 低：錯配率低、特異性高3、DNA分子大小 DNA分子序列復雜程度 DNA分子濃度雜交：在復性條件下，來源不同、但具有同源性的DNA單鏈按堿基配對原則形成雙鏈DNA分子的過程。雜

11、交條件的選擇： 雜交條件 溫度 離子強度 雜交效果 高強度 高 低 錯配率低，特異性高 低強度 低 高 錯配率高，特異性差基因組（genome）：細胞中所有DNA的總稱。突變：遺傳物質發(fā)生可遺傳的變異。端粒（telomere）：線性形式基因組DNA的末端都有一種特殊的結構，是一段DNA和蛋白質形成的復合結構，叫做端粒?；蛲蛔兊姆诸悾荷矬w的基因組DNA并不穩(wěn)定，經常會出現(xiàn)各種各樣的可遺傳的改變，在子代留下變異的遺傳信息。在DNA分子水平，DNA損傷的后果之一就是突變（mutation）。主要分為編碼區(qū)堿基突變和非編碼區(qū)突變兩種。編碼區(qū)堿基突變：堿基替代在基因組中是最常見的突變形式，分轉換（t

12、ransition）和顛換（transversion）兩種。非編碼區(qū)突變：非編碼區(qū)DNA沒有表達產物，DNA復制中也能夠出現(xiàn)堿基的錯配、插入和缺失，但是對細胞正常生理過程不構成實質性影響。無論在編碼區(qū)或非編碼區(qū)，突變的后果從沒有效應到有害效應和有利效應，各種情況都會出現(xiàn)。堿基替換：堿基轉換、堿基顛倒堿基序列改變 基因突變堿基排列改變：倒位、易位堿基數目改變：插入、缺失、重復同義突變（same sense mutation）：是指DNA組成變了，但密碼子沒有改變，或密碼子雖然不同，但編碼產生同一種氨基酸，這種突變又稱中性突變。錯義突變（missence mutation）：是指DNA組成改變使編

13、碼一種氨基酸的密碼子改變成編碼另一種氨基酸的密碼子。無義突變（nonsense mutation）：是指某一堿基的替換使氨基酸密碼子變?yōu)榻K止密碼，可過早地終止轉錄，形成無活性的肽鏈。移碼突變（frameshift mutation）：DNA鏈上插入或缺失一個或n個核苷酸，使下游密碼子閱讀框發(fā)生變化，導致在插入或缺失部位以后的編碼發(fā)生相應改變。終止密碼突變：是DNA分子中的某一終止密碼突變?yōu)榫幋a氨基酸的密碼子，從而使多肽鏈的合成至此仍繼續(xù)下去，直至下一個終止密碼為止，形成超長的異常多肽鏈。沉默突變（silent mutation）：僅改變表達產物的單個氨基酸，對蛋白質的生理功能沒有影響的點突變，

14、是形成蛋白質多態(tài)性的主要原因。DNA多態(tài)性：基因組中，由不同堿基構成的等位基因所形成的多態(tài)性叫做DNA多態(tài)性DNA長度多態(tài)性：同一基因座上各等位基因之間的DNA片段長度差異構成的多態(tài)性可變數目串聯(lián)重復序列 VNTR ： 通常把小衛(wèi)星DNA中的可變數目串聯(lián)重復序列稱為VNTR短串聯(lián)重復序列 STR: 把微衛(wèi)星的可變數目串聯(lián)重復序列稱為短串聯(lián)重復序列 STR。是目前在法醫(yī)物證學中應用最廣泛的長度多態(tài)性遺傳標記。它的重復單位短，僅1-6bp，其長度多態(tài)性來源于重復單位串聯(lián)重復次數的個體差異。4bp重復的STR基因座最常用。篩選STR基因座的條件：等位基因長度在300bp以下； 重復單位為四核苷酸，不

15、含有插入的非重復單位堿基； 等位基因數812個； 基因座雜合度0.8以上，個體識別能力大于0.9； 基因頻率分別比較平均，沒有特別高的或特別低的頻率的等位基因； PCR擴增溫度，突變率低。單核苷酸多態(tài)性（SNPs）：在人類基因組范圍內，如果任何單堿基突變使特定核苷酸位置上出現(xiàn)兩種堿基其中最少的一種在群體中的頻率不少于1，就形成單核苷酸多態(tài)性。第四章 DNA長度多態(tài)性限制性片段長度多態(tài)性分析（RFLP）：RFLP分析是一種傳統(tǒng)的分子生物學檢測技術，廣泛應用于突變分析、基因診斷、基因定位等各個方面。法醫(yī)物證鑒定應用RFLP技術主要是對人類基因組中的VNTR基因座進行分型，其技術核心是DNA分子雜交

16、，決定RFLP分析圖譜個體特異性的因素是限制性核酸內切酶的特異性和探針的特異性。檢測所用的探針多是由人類基因組DNA中篩選出的小衛(wèi)星序列，選擇特異性不同的探針，在不同的雜交條件下，可以只檢出單個VNTR基因座，也可同時檢出多個VNTR基因座，前者稱為DNA紋印，后者稱之為DNA指紋，檢測所用的相應探針分別被稱為單基因探針（single-locus probe）和多基因探針(multi-locus probe)?；炯夹g：DNA提取、純化和定量 限制性核酸內切酶酶切 電泳分離 印跡轉移 探針選擇單基因座探針（DNA紋印），多基因座探（DNA指紋） 探針標記 分子雜交 譜帶顯示限制性酶選擇要求：識

17、別序列位于VNTR兩側，盡量靠近VNTR； 酶活性、特異性穩(wěn)定，反應條件容易控制； 不受基因組DNA是否甲基化的影響。聚合酶鏈式反應（PCR）：類似半保留復制，在體外以基因組DNA為模板，以一對寡核苷酸為引物，dNTP為原料，在Taq DNA聚合酶的催化下，經過變性、退火和引物延伸三步循環(huán)使目標片段得到復制百萬倍。PCR反應體系： 模板DNA，寡核苷酸引物，dNTP，反應緩沖液，TaqDNA聚合酶。 循環(huán)參數 ：溫度、時間PCR技術特點：靈敏度高 特異性高 適用于降解DNA檢材 種屬特異性好 操作簡單，時間短 儀器自動完成 污染 樣本要求 影響因素多復合擴增：經過篩選的STR基因座，擴增條件基

18、本相同，可以在同一個PCR體系中擴增多個靶基因座，叫作復合擴增。應用于法醫(yī)的STR應滿足條件： PCR擴增產物長度在300bp以下； 宜選擇四核苷酸STR基因組； 選多個STR基因座應不在同一條染色體上； 每個STR基因座等位基因數8-10個左右； 基因頻率分布均勻，沒有高或低頻基因出現(xiàn)； 雜合度高，最好大于0.80； 低突變率<0.2%。不同DNA長度分析技術比較：不同DNA長度分析技術綜合評價：STR分型用于法醫(yī)物證鑒定的主要優(yōu)點：1、高靈敏度：適用于微量降解檢材。 2、高鑒別能力：節(jié)約檢材、試劑和提高效率。 3、標準化分型：實現(xiàn)數字化結果，利于實驗室間數據交換，建立數據庫。mini

19、STR：通過重新設計引物，使其結合在更靠近核心重復區(qū)的側翼序列，從而降低擴增產物的大小，進一步提高靈敏度和分型成功率，這種技術稱為短片段STR分型或miniSTR分型。miniSTR的優(yōu)勢：ØSTR基因座的擴增片段較短，靈敏度更高，尤其適用于極微量或嚴重降解生物檢材的DNA分型； Ø等位基因片段長度范圍較窄，不易發(fā)生因小等位基因的優(yōu)勢擴增而造成的等位基因丟失現(xiàn)象； Ø可對多個STR基因座進行復合擴增，從而節(jié)約檢材、降低成本，提高單次檢測的信息量miniSTR分型的局限性：1、因擴增片段長度的限制，構建復合擴增體系時只能同時擴增較少的基因座（通常每種顏色的熒光標記的

20、基因座不超過2個）。要想達到與傳統(tǒng)的商品化試劑盒接近的個人識別能力，必須增加復合擴增的次數。2、miniSTR引物與傳統(tǒng)的引物結合區(qū)之間若存在堿基的插入和缺失，易導致miniSTR與傳統(tǒng)STR分型結果的不一致。 3. 若某些STR基因座核心重復區(qū)上游或下游側翼序列存在嘌呤或嘧啶堿基堆積現(xiàn)象，則不利于miniSTR引物設計。4、 當PCR擴增產物過小時，未消耗引物上的染料分子或稱“染料污斑”（dye blobs）可使產物峰變寬、信號變弱。這種影響在檢測降解生物樣本時更為明顯。 Y-STR有何法醫(yī)學應用特點：1、Y染色體為男性特有2、Y-STR呈父系遺傳特征3、單倍體遺傳：在減數分裂過程中，Y-特

21、異性區(qū)不發(fā)生重組，所有Y-STR基因座均呈連鎖遺傳，等位基因頻率不能以相乘方法計算4、GD=PE5、結果不具有唯一性，不能認定。其法醫(yī)學應用價值在于排除Y-STR分型中需要注意的問題：因為X和Y染色體部分序列具有高度相似性，有些Y-STR分型時在X染色體上也能檢出擴增產物男性個體可見額外的產物峰，女性個體也可有分型結果。 部分Y-STR基因座，有時可檢出二個或三個等位基因，易被誤認為不同男性的混合樣本。第五章 STR自動分型 STR自動分型技術的主要步驟：1、DNA自動化提取 2、PCR多色熒光標記STR復合擴增 3、PCR產物電泳前處理 4、自動毛細管電泳結合激光誘導的熒光檢測 5、自動數據

22、采集并分型 off-ladder：在STR分型圖譜中，常會遇到部分樣本的少量片段峰未被程序化數字命名，在分型圖譜中被標識為off-ladder。漂移作用和新等位基因都可標識為off-ladder低拷貝DNA（low copy number，LCN）：是指基因組含量小于100pg的樣本。第六章 DNA序列多態(tài)性PCR循環(huán)測序的基本原理：PCR技術能夠快速、特異性地擴增靶DNA，應用PCR技術測定DNA序列分為兩個步驟：先利用PCR擴增靶序列片段，制備測序模板，然后再利用PCR直接測定序列。PCR測序采用了熱循環(huán)高效合成DNA的特性并結合雙脫氧核苷酸終止法，使引物鏈終止的延伸產物數量在熱循環(huán)過程中

23、得到增加，因此稱為循環(huán)測序。每個測序循環(huán)包括：PCR擴增制備的模板DNA變性成單鏈形式；標記引物與其中的一條鏈上的互補序列退火；退火后的引物在耐熱DNA聚合酶催化下發(fā)生鏈延伸終止反應。本次循環(huán)產生的模板鏈與延伸終止鏈形成的雙鏈的產物，在下一輪測序循環(huán)中，再次被變性，釋放出模板鏈，作為又一輪引發(fā)反應的模板，同時積累下一輪循環(huán)產生的鏈終止產物。上述循環(huán)步驟重復2040次，使鏈終止產物以線性方式獲得擴增。DNA自動測序技術：DNA自動測序技術是以4種熒光染料基團分別作為4種ddNTP終止鏈的標記物，于20世紀80年代末期建立的一種高效、快速、自動化的序列測定技術。4種熒光染料分別作為測序反應中4種d

24、dNTP終止鏈的標記物，即4種被雙脫氧核苷酸終止的DNA片段分別帶上4種不同的顏色。這些DNA片段的混合物同時加在一個樣品槽中電泳展開，相互間僅差1個堿基的DNA片段形成一條具有4種顏色的階梯分布圖像。階梯中的每- DNA片段由標記在該片段上的特征性熒光基團發(fā)出的熒光所指示。熒光染料基團作為標記物的基本要求是經過激光誘發(fā)的吸收光譜波長在可見光波長范圍內，不影響延伸反應，不影響標記后DNA片段的電泳性質。其次要求4種熒光的吸收和激發(fā)光波長要有足夠的差異，便于檢測。熒光染料的摻入的方式有兩種：一種是將熒光染料預先標記在測序反應通用引物的5端。4種熒光標記形成4種標記引物，測序反應分4個反應管進行，

25、特定的熒光染料與相應的ddNTP是對應關系，例如熒光示蹤染料JOE標記的通用引物總是與ddATP加在同一個反應管內，因此由ddATP終止的所有延伸鏈都帶有JOE。這種方式被稱為Dye-Primers。另一種是將熒光染料基團連在ddNTP上，4種熒光染料分別與4種ddNTP底物連接，反應產生的4組DNA片段分別由特定ddNTP所終止，并且標記有4種不同的熒光發(fā)色基團，A、C、G和T分別攜帶有綠、紅、藍、黃4種熒光。這種方式被稱為Dye-Terminators。兩種方式各有特點，不過前者要求A，G，C，T分4個反應進行，而后者的4組反應可以在同一管中完成。上述兩種方法都能確定4種熒光與4種ddNT

26、P所終止的DNA片段之間的對應關系，這是后來從電泳中檢測標記物信號以及最終讀序的基礎。自動測序儀器無論是變性PAG平板凝膠電泳還是毛細管電泳，都配置有激光束激發(fā)系統(tǒng)和熒光信號收集檢測系統(tǒng)。當DNA片段電泳通過檢測窗口時，在激光束的激發(fā)下，片段的電泳時間和被激發(fā)熒光的波長、強度等信號都被記錄，由計算機自動作數據處理，最后在屏幕上顯示每一樣品的各終止片段電泳分離的模擬圖像。不同顏色的峰標示各自標記的堿基及其排列順序(如圖所示)：MVP（minisatellite variant repeat）序列：稱為具有變異核心序列的小衛(wèi)星DNA，是一類既有長度多態(tài)性又有序列差異的DNA重復序列。線粒體DNA的

27、特點：人類線粒體的基因排列得非常緊湊，除與mtDNA復制及轉錄有關的一小段區(qū)域外，無內含子序列。mtDNA為高效利用DNA有5個閱讀框架，缺少終止密碼子，僅以U或UA結尾。mtDNA的突變率高于核中DNA，并且缺乏修復能力。mtDNA為母系遺傳。部分mtDNA的密碼子不同于核內DNA的密碼子。血型（blood group）：是人類血液由遺傳控制的個體性狀之一，是血液的遺傳標記（genetic marker）。紅細胞血型是指紅細胞表面抗原由遺傳決定的個體差異?；瘜W結構抗原分布紅細胞膜上分泌液中血漿中糖脂質HAB、PILea、Leb莫內蛋白Rh、Kell糖蛋白（寡糖+多肽）MN、HLAHAB、Le

28、a、Leb蛋白質Gm、KmABO血型（重點）：ABO血型系統(tǒng)是最早發(fā)現(xiàn)，最重要的血型系統(tǒng)。人類學與遺傳學研究、器官移植，以及法醫(yī)學實踐中的個人識別與親子鑒定均需應用這個系統(tǒng)。.一、ABO血型.4種普通血型的劃分及存在相應的抗體.1.紅細胞ABO血型系統(tǒng)的分型。ABO血型系統(tǒng)分四種型：即O型、A型、B型與AB型。.2.四種血型個體血清中存在的相應抗體：血清中有天然抗體，B型血清中有抗A抗體；A型血清中有抗B抗體；O型血清中有抗A、抗B及抗A，B等抗體；AB型血清中沒有抗體ABO血型抗體恒定地存在于正常人的血清中，可以預測其存在，故稱為規(guī)則抗體。.3.正常的A、B、AB、O型的檢測。利用抗A與抗B

29、血清，以及A與B型紅細胞，可以測定未知血液的ABO血型。.二、ABO血型抗體.正常情況下，凡紅細胞沒有某一種或某兩種ABO抗原，又無明顯的外來A或B抗原的刺激，其血清中含有與紅細胞上缺失抗原相對應的天然抗A、抗A1或抗B抗體。.(一) 抗A、抗B抗體的生成.新生兒血中的IgG抗A與抗B抗體多來自母體，故一般不對新生兒進行血型測定。36個月以內的嬰兒，多數尚未產生抗A與抗B抗體；6個月以后，抗體逐漸產生；510歲抗體效價達最高峰；隨著年齡的增長，抗體效價逐漸降低，老年人抗體水平明顯地低于年輕的成年人。.(二) 抗A、抗B抗體的特性.1、抗A與抗B抗體最顯著的血清效應是凝集反應，在適當的條件下也可

30、以發(fā)生溶血反應；.2、ABO血型測定都在室溫中(2225)進行，偶爾在4下進行；.3、抗A和抗B抗體可以是天然的，也可以是免疫抗體；.4、B型與A型血液中的天然抗A與抗B抗體大多數是IgM；.5、天然IgM與IgG抗A與抗B抗體均能在鹽水介質中使紅細胞發(fā)生凝集反應，在室溫中具有抗體活性。.(三)抗H抗體.由于O、A、B或AB型紅細胞結構上含有H成分，故其血清中很少有抗H抗體。.三、ABO血型的遺傳.(一) 各種不同表型的雙親所生子女的血型。.(二) ABO血型按孟德爾規(guī)律遺傳.ABO血型系統(tǒng)按孟德爾定律遺傳，人類染色體上的一個座位為.A、B、O.三個等位基因之一所占，每一個體有一對染色體，一條

31、來自父親，另一條來自母親，紅細胞ABO型的表達由基因決定。ABO血型有4種普通型，由復等位基因.A、B及O.所控制，有6種基因型，決定4種表現(xiàn)型。四種表現(xiàn)型、六種基因型，一個基因座位，三個等位基因。.何謂ABO血型的正反定型？正定性試驗：根據RBC與特異性抗體的反應來分型，即用抗A抗體判定A抗原，用抗B抗體判定B抗原。反定型試驗：依據血清中的凝集素與標準型RBC膜上的凝集原反應的性質，即用標準的A型RBC判定抗A抗體，用標準的B型RBC判定抗B抗體，同時也應用抗H抗體判定H抗原。試述ABO血型的DNA分型方法 PCR-SSP序列特異性引物PCR技術：特異性強、重復性好；PCR-RFLP。Rh血

32、型：凡是人體血液紅細胞上有Rh凝集原者，為Rh陽性。反之為陰性。這樣就使已發(fā)現(xiàn)的紅細胞A、B、O及AB四種主要血型的人，又都分別一分為二地被劃分為Rh陽性和陰性兩種。在中國，Rh陰性血型只占千分之三到四。RH陰性A型、B型、O型、AB型的比例是3：3：3：1。Rh血型鑒定：RhD抗原分布：Rh血型鑒定一般指Rh系統(tǒng)中D抗原的檢測，根據病人紅細胞是否帶有D抗原分為Rh陽性和Rh陰性。Rh血型鑒定正常值：Rh+，稱作“Rh陽性”、“Rh顯性”，表示人類紅細胞有“Rh因子”；Rh-，稱作“Rh陰性”，“Rh隱性”，表示人類紅細胞沒有“Rh因子”。HLA（human leukocyte antigen

33、）抗原：即人類白細胞抗原，是人類最復雜的顯性遺傳多態(tài)性系統(tǒng)，也是迄今為止人類基因組中密度最高的區(qū)域。HLA系統(tǒng)具有極其重要的功能，如抗原的加工、呈遞，控制免疫應答，調節(jié)免疫細胞間相互作用，對異體移植物的排斥，腫瘤監(jiān)視，參與大量的自身免疫性疾病的發(fā)生。人類白細胞膜上的抗原分為三類：是紅細胞血型抗原，如ABH、Lea、Leb、Jka、K、k、Dib等；是白細胞本身特有的抗原，如CD4、CD8、Leu8等；是與其他組織共有的，也是最強的同種抗原，即人類白細胞抗原。HLA抗原的結構和分布：HLA-I類和HLA-II類抗原存在于細胞表面，為跨膜蛋白質，均為異二聚體蛋白。HLA-I類抗原分布廣泛，幾乎存在

34、于所有的有核細胞表面，以淋巴細胞上的密度最高；含有HLA-II類抗原的組織比I類抗原少得多，密度最高者為樹突狀細胞、單核細胞，一些吞噬細胞亞群及B細胞。結構：HLA-I類基因產物為HLA-A、B和C抗原，由重鏈和輕鏈兩條多肽鏈構成；HLA-II類基因產物為HLA-DR、DQ、DP抗原，均為跨膜糖蛋白，由和兩條鏈構成。HLA遺傳：HLA基因定位于6號染色體，占整個人類基因組全部堿基序列的0.12%。HLA區(qū)主要有HLA-I、II、III類基因座。表現(xiàn)為：共顯性遺傳、單倍型遺傳、連鎖不平衡。HLA遺傳特征：共顯性遺傳：每個HLA基因座表達一對抗原，人類HLA每個基因座上有眾多等位基因。故如果血清學

35、方法分型時，個體只檢測出了一個抗原則有三種可能：該抗原的純合子、HLA血清板不完全、存在一種至今尚未發(fā)現(xiàn)的抗原。單倍型遺傳：單倍體是指一條染色體上HLA各基因座的基因緊密連鎖組成的基因遺傳單位。連鎖不平衡：HLA在實際群體調查發(fā)現(xiàn)，各基因座的基因并非完全隨機組成單倍型，有些單倍型觀察頻率高于期望頻率或低于期望頻率，這種現(xiàn)象稱為連鎖不平衡。處于連鎖部平衡狀態(tài)說明HLA不同基因座的基因之間存在關聯(lián)，具有一同遺傳的趨向。HLA高多態(tài)性。HLA抗原的分布：HLA-I類抗原：分布廣發(fā)，幾乎存在于所有的有核細胞表面，以淋巴細胞上的密度最高；成熟RBC上沒有HLA-A、B、和DR抗原，幼稚RBC卻有；HLA-II類抗原：密度最高者為DC、單核細胞，一些吞噬細胞亞群及B細胞；II類抗原作為一種分化抗原在不同細胞上表達，大多數骨髓分化細胞具有HLA-II類抗原。HLA命名原則：以大寫字母A、D、C.表示HLA遺傳區(qū)域中的座位；HLA抗原特異性用數字表示；為防止與補體組分命名相混淆，HLA-C抗原特異性以Cw為字首命名；HLA基因命名一般以4位數字表示，其中前2位數字表示對應最相近的HLA抗原特異性，后2位數字則用于表示亞型的等位基因，如A*0101；如果出現(xiàn)第五位數字，則代表“沉默