消毒劑驗(yàn)證方案

1、消毒劑驗(yàn)證方案Disinfectants Validation Protocol編號(hào)Code: 版本Version: 編寫(xiě)Prepared by:日期Date:審 核 人 日 期 Reviewed by Date批準(zhǔn)Approved by:日期Date:有限公司 消毒劑驗(yàn)證方案Disinfectants Validation Protocol變更記錄Change Log版本號(hào)Version變更描敘Description變更細(xì)節(jié)Section changed批準(zhǔn)日期Release Date目 錄Contents1.簡(jiǎn)介42.實(shí)施日期43.驗(yàn)證小組名單44.材料與試劑45.設(shè)備和儀器56.中和劑鑒

2、定試驗(yàn)57.載體定量殺滅試驗(yàn)78.現(xiàn)場(chǎng)考察試驗(yàn)79.附件810.相關(guān)SOP811.修改事項(xiàng)812.再驗(yàn)證813.文檔81. 簡(jiǎn)介 消毒劑常用于設(shè)備設(shè)施表面消毒。本公司使用的消毒劑有75%酒精、0.1%新潔爾滅、2%來(lái)蘇爾和6%過(guò)氧化氫。其中0.1%新潔爾滅主要用于墻面、地面和門(mén)的表面消毒，75%酒精和6%過(guò)氧化氫主要用于設(shè)備、操作臺(tái)面、門(mén)把手消毒，2%來(lái)蘇爾主要用于地漏消毒。本方案結(jié)合特定菌挑戰(zhàn)試驗(yàn)和現(xiàn)場(chǎng)考察試驗(yàn)，對(duì)消毒劑的殺菌效力進(jìn)行確認(rèn)。2. 實(shí)施日期項(xiàng)目中和劑鑒定試驗(yàn) 載體定量殺滅試驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)考察實(shí)施日期3. 驗(yàn)證小組名單部 門(mén)姓 名職 責(zé)批準(zhǔn)方案、報(bào)告QA審核驗(yàn)證方案、記錄和報(bào)告QC審核驗(yàn)

3、證方案、記錄和報(bào)告生產(chǎn)部審核驗(yàn)證方案、記錄和報(bào)告QA編寫(xiě)和實(shí)施驗(yàn)證方案QA現(xiàn)場(chǎng)微生物監(jiān)測(cè)取樣QC實(shí)施驗(yàn)證方案4. 材料與試劑4.1 菌株 （1）細(xì)菌： 金黃色葡萄球菌CMCC(B) 26003大腸桿菌CMCC(B) 44102 （2）細(xì)菌芽孢：枯草桿菌芽孢CMCC(B) 63501（3）真菌：白色念珠菌CMCC(F) 980014.2 培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基粉 20.0g純化水 1000ml將上述成分混合后，加熱至完全溶解，調(diào)pH至7.1±0.2，分裝，于121高壓蒸氣滅菌15min備用。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基粉 31.0g純化水 1000ml將上述成分混合后，

4、加熱至完全溶解，調(diào)pH至7.1±0.2，分裝，于121高壓蒸氣滅菌15min備用。改良馬丁培養(yǎng)基： 改良馬丁培養(yǎng)基粉 28.0g 純化水 1000ml將上述成分混合后，加熱至完全溶解，調(diào)pH至6.4±0.2，分裝，于115高壓蒸氣滅菌20min備用。改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基： 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基粉 42.0g 純化水 1000ml將上述成分混合后，加熱至完全溶解，調(diào)pH至6.4±0.2，分裝，于115高壓蒸氣滅菌20min備用。4.3 稀釋液：1%蛋白胨-PBS溶液4.4 中和劑：0.1%卵磷脂+1%吐溫80溶液1%硫代硫酸鈉溶液+0.3%卵磷脂+1%吐溫80溶液4.5

5、 無(wú)菌載片：1.5cm×1.5cm不銹鋼片4.6 無(wú)菌試管4.7 無(wú)菌平皿(90mm)4.8 含玻璃珠的無(wú)菌三角瓶4.9 消毒劑：75%酒精，0.1%新潔爾滅，2%來(lái)蘇爾，6%過(guò)氧化氫4.10 移液器及配套無(wú)菌吸頭:0-100ul，100-1000ul4.11 計(jì)時(shí)器5. 設(shè)備和儀器5.1 HS-1300-V型凈化工作臺(tái)5.2 電動(dòng)混合器 5.3 SHP-150型細(xì)菌培養(yǎng)箱5.4 GNP-9270型生化培養(yǎng)箱5.5 人工菌落計(jì)數(shù)器6. 中和劑鑒定試驗(yàn) 6.1 細(xì)菌和真菌菌液制備接種金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)18-24h；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良

6、馬丁培養(yǎng)基中，2328培養(yǎng)18-24h。將上述培養(yǎng)物用稀釋液稀釋至所需濃度備用。6.2 枯草桿菌芽孢懸液的制備6.2.1 取枯草桿菌新鮮培養(yǎng)物（18-24h）適量至營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面，使菌液布滿營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面，再將多余的培養(yǎng)物吸出，將斜面置于3035培養(yǎng)57天。用接種環(huán)取菌樣少許涂于玻片上，進(jìn)行芽孢染色鏡檢。當(dāng)芽孢形成率達(dá)95以上時(shí)，即可進(jìn)行以下處理。否則，應(yīng)繼續(xù)在室溫下放置一定時(shí)間，直至達(dá)到上述芽孢形成率后再進(jìn)行以下處理。6.2.2 加適量無(wú)菌水于每一營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面試管內(nèi)，以接種環(huán)輕輕推刮下菌苔。吸出第一批洗下的菌懸液，再取適量無(wú)菌水于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面，重復(fù)洗菌一遍。將第一和第二批

7、洗下的菌懸液集中于一含玻璃珠的無(wú)菌三角燒瓶?jī)?nèi)，振搖5min，打碎菌塊，使成均勻的芽孢懸液。6.2.3 用無(wú)菌棉花或紗布過(guò)濾芽孢懸液，清除其中的瓊脂凝快。6.2.4 將過(guò)濾后的芽孢懸液放于80水浴中10min以殺滅殘余的細(xì)菌繁殖體。待冷至室溫后，保存于4冰箱中備用。有效使用期為半年。6.2.5 芽孢懸液在使用時(shí)，應(yīng)先進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。6.3 染菌載片制備6.3.1 載片脫脂處理：將載片放在含肥皂的水中煮沸30min，以純化水洗凈，用純化水煮沸10min，用蒸餾水漂洗至pH中性晾干備用。6.3.2 菌液滴染：將經(jīng)滅菌的載體平鋪于無(wú)菌平皿內(nèi)，滴加105cfu/ml的菌液10ul，并用接種環(huán)涂勻整個(gè)載體表

8、面。滴染菌液后，載體置37溫箱內(nèi)干燥約20-30min后再使用。6.4 中和劑鑒定操作程序6.4.1 根據(jù)試驗(yàn)分組，準(zhǔn)備足量試管和平皿，依次進(jìn)行編號(hào)。 第1組：用無(wú)菌鑷子取一染菌載片移入含有10ml中和劑的試管中。作用10min后，用電動(dòng)混合器混合20s，或?qū)⒃嚬苷翊?0次，混勻，分別吸取1.0ml，接種于兩個(gè)平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。細(xì)菌放3035培養(yǎng)48h，芽孢放3035培養(yǎng)72h，真菌放2328培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果。 第2組：用無(wú)菌鑷子取一染菌載片移入含有10ml中和產(chǎn)物（以浸有消毒劑的無(wú)菌載片置10ml中和劑內(nèi)，作用10min）的試管中。作用10min后，用電動(dòng)混合器混合20s，或?qū)⒃嚬苷?/p>

9、打80次，混勻，分別吸取1.0ml，接種于兩個(gè)平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。細(xì)菌放3035培養(yǎng)48h，芽孢放3035培養(yǎng)72h，真菌放2328培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果。 第3組：用無(wú)菌鑷子取一染菌載片移入含有10ml稀釋液的試管中。作用10min后，用電動(dòng)混合器混合20s，或?qū)⒃嚬苷翊?0次，混勻，分別吸取1.0ml，接種于兩個(gè)平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。細(xì)菌放3035培養(yǎng)48h，芽孢放3035培養(yǎng)72h，真菌放2328培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果。 第4組：分別吸取稀釋液和中和劑各1.0ml于同一無(wú)菌平皿內(nèi)，加入上述試驗(yàn)同批次的培養(yǎng)基15-20ml，培養(yǎng)觀察。6.4.2 判定標(biāo)準(zhǔn) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合以下全部條件，所測(cè)中和劑

10、可判為合格： 第1、2和3組有相似量試驗(yàn)菌生長(zhǎng)，其組間菌落數(shù)誤差率不應(yīng)超過(guò)15%。第1、2和3組菌落數(shù)誤差率計(jì)算公式如下： （3組間菌落平均數(shù)-各組菌落平均數(shù)）的絕對(duì)值之和誤差率×1003×3組間菌落平均數(shù) 第4組無(wú)菌生長(zhǎng)。否則，說(shuō)明試劑有污染，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。6.4.3 結(jié)果記錄附件1：中和劑鑒定試驗(yàn)結(jié)果記錄7. 載體定量殺滅試驗(yàn)7.1 將菌液用稀釋液稀釋成 108cfu/ml的菌懸液。7.2 取已滅菌的載體放于無(wú)菌平皿內(nèi)，每種微生物試驗(yàn)用載體分"5分鐘組"、"10分鐘組"和"15分鐘組"共3組。7.3 滴染10

11、8cfu/ml的菌懸液10ul于無(wú)菌載體上，載體置37溫箱內(nèi)干燥 約20-30min后再使用。7.4 用無(wú)菌鑷子將染菌載體加入含有消毒劑的平皿中，作用至規(guī)定時(shí)間，將染菌載體移入含有10ml中和劑的試管內(nèi)，用電動(dòng)混合器混合20s，或?qū)⒃嚬苷翊?0次，使菌片上的微生物被洗脫進(jìn)入中和液內(nèi)，再放置5 min，使中和作用充分。最終進(jìn)一步混勻，適當(dāng)稀釋，分別吸取1.0ml接種于兩個(gè)平皿中，做活菌計(jì)數(shù)。細(xì)菌放3035培養(yǎng)48h，芽孢放3035培養(yǎng)72h，真菌放2328培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果。7.5 另取一平皿，注入10ml稀釋液代替消毒劑，放入染菌載片，作用10min后取出載片，移入含有10ml中和劑的試管

12、內(nèi)，其隨后的試驗(yàn)步驟與上述試驗(yàn)相同，作為陽(yáng)性對(duì)照。7.6 判定標(biāo)準(zhǔn)消毒劑對(duì)挑戰(zhàn)菌的殺滅對(duì)數(shù)值3判為合格。7.7 殺滅對(duì)數(shù)值計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值（KL）對(duì)照組平均活菌濃度對(duì)數(shù)值-試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值7.8 結(jié)果記錄附件2：載體定量殺滅試驗(yàn)結(jié)果記錄8. 現(xiàn)場(chǎng)考察試驗(yàn)8.1 消毒劑的配制：潔凈區(qū)操作人員按照車(chē)間消毒劑的配制和使用（SOP 034401）配制75%酒精、0.1%新潔爾滅、2%來(lái)蘇爾和6%過(guò)氧化氫。8.2 生產(chǎn)結(jié)束后操作人員按照車(chē)間生產(chǎn)區(qū)清潔（SOP 030492）對(duì)潔凈區(qū)進(jìn)行清潔消毒。8.3 清潔消毒完畢15分鐘后，現(xiàn)場(chǎng)QA使用接觸皿對(duì)清潔消毒后的潔凈區(qū)進(jìn)行表面微生物監(jiān)測(cè)取樣，共測(cè)定3次。表

13、面微生物監(jiān)測(cè)位點(diǎn)詳見(jiàn)附件3。8.4 測(cè)定結(jié)果記錄附件4：潔凈區(qū)表面微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果記錄8.5 合格標(biāo)準(zhǔn)符合10萬(wàn)級(jí)潔凈要求。9. 附件11.1 中和劑鑒定試驗(yàn)結(jié)果記錄11.2 載體定量殺滅試驗(yàn)結(jié)果記錄11.3 表面微生物監(jiān)測(cè)點(diǎn)11.4 潔凈區(qū)表面微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果記錄10. 相關(guān)SOP文件編號(hào)文件名稱車(chē)間消毒劑的配制和使用車(chē)間生產(chǎn)區(qū)清潔微生物實(shí)驗(yàn)室管理物品進(jìn)出微生物檢驗(yàn)室微生物檢驗(yàn)區(qū)的清潔消毒培養(yǎng)基的配制細(xì)菌的接種、傳代和保存高壓滅菌微生物數(shù)量的測(cè)定11. 修改事項(xiàng)在實(shí)施過(guò)程中，如果方案需要修改，必須提交書(shū)面的報(bào)告，闡述修改的原因，修改的內(nèi)容，并經(jīng)過(guò)相關(guān)部門(mén)及QA的認(rèn)可。修改后的方案同先前執(zhí)行的方案一起歸檔。12. 再驗(yàn)證12.1 當(dāng)消毒劑的使用濃度和清潔消毒程序發(fā)生變更時(shí)應(yīng)進(jìn)