殘留溶劑測(cè)定法

1、殘留溶劑測(cè)定法1 簡(jiǎn)述藥品中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及在制劑制備過(guò)程中使用過(guò)，但在工藝過(guò)程中未能完全去除的有機(jī)溶劑。藥物中常見(jiàn)的殘留溶劑及限度參照中國(guó)藥典2015年版四部通則0861附表1的規(guī)定，除另有規(guī)定外，第一、第二、第三類(lèi)溶劑的殘留量應(yīng)符合其規(guī)定；對(duì)其他溶劑，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)工藝的特點(diǎn)，制訂相應(yīng)的限度，使其符合產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。本法照氣相色譜法（中國(guó)藥典2015年版四部通則0521測(cè)定。本測(cè)定方法適用于對(duì)各論項(xiàng)下未收載殘留溶劑檢測(cè)方法的品種中殘留溶劑的檢驗(yàn)，也可用于指導(dǎo)建立各論項(xiàng)下具體品種的殘留溶劑檢查方法。2 儀器和用具2.1 氣相色譜儀，帶FID檢測(cè)器，頂空進(jìn)樣器。2.2

2、 計(jì)算機(jī)，安裝工作站軟件。2.3 色譜柱2.3.1 毛細(xì)管柱除另有規(guī)定外，極性相近的同類(lèi)色譜柱之間可以互代使用。2.3.1.1 非極性色譜柱 固定液為100%的二甲基聚硅氧烷的毛細(xì)管柱。2.3.1.2 極性色譜柱 固定液為聚乙二醇(PEG-20M)的毛細(xì)管柱。2.3.1.3 中極性色譜柱 固定液為(35%)二苯基-(65%)二甲基聚硅氧烷，(50%)二苯基-(50%)二甲基聚硅氧烷，(35%)二苯基-(65%)二甲基亞芳基聚硅氧烷，(14%)氰丙基苯基-(86%)二甲基聚硅氧烷，(6%)氰丙基苯基-(94%)二甲基聚硅氧烷的毛細(xì)管柱。2.3.1.4 弱極性色譜柱 固定液為(5%)苯基-(95%

3、)甲基聚硅氧烷，(5%)二苯基-(95%)二甲基亞芳基硅氧烷共聚物的毛細(xì)管柱。2.3.2 填充柱 以直徑為0.180.25mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他適宜的填料作為固定相。3 供試品溶液和對(duì)照品溶液的制備3.1 供試品溶液的制備3.1.1 頂空進(jìn)樣 除另有規(guī)定外，精密稱(chēng)取供試品0.11g；通常以水為溶劑；對(duì)于非水溶性藥物，可采用N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜或其他適宜溶劑；根據(jù)供試品和待測(cè)溶劑的溶解度，選擇適宜的溶劑且應(yīng)不干擾待測(cè)溶劑的測(cè)定。根據(jù)品種正文中殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液，濃度滿足系統(tǒng)定量測(cè)定的需要。3.1.2 溶液直接進(jìn)樣 精密稱(chēng)取供試品適量，用水或合適

4、的有機(jī)溶劑使溶解；根據(jù)品種正文中殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液，其濃度應(yīng)滿足系統(tǒng)定量測(cè)定的需要。3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取各品種項(xiàng)下規(guī)定檢查的有機(jī)溶劑適量，采用與制備供試品溶液相同的方法和溶劑制備對(duì)照品溶液。若為限度檢查，根據(jù)殘留溶劑的限度規(guī)定確定對(duì)照品溶液的濃度；若為定量測(cè)定，為保證定量結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)根據(jù)供試品中殘留溶劑的實(shí)際殘留量確定對(duì)照品溶液的濃度；通常對(duì)照品溶液的色譜峰面積與供試品溶液中對(duì)應(yīng)的殘留溶劑的色譜峰面積以不超過(guò)2倍為宜。必要時(shí)，應(yīng)重新調(diào)整供試品溶液和對(duì)照品溶液的濃度。4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)4.1 用待測(cè)物的色譜峰計(jì)算，毛細(xì)管色譜柱的理論板數(shù)均應(yīng)大于5000；填充柱法的

5、理論板數(shù)一般應(yīng)大于1000。4.2 色譜圖中，待測(cè)物色譜峰與其相鄰的色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5；4.3 以?xún)?nèi)標(biāo)法測(cè)定時(shí)，對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，所得待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)應(yīng)不大于5%；若以外標(biāo)法測(cè)定，所得待測(cè)物峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)應(yīng)不大于10%。5 測(cè)定法5.1 第一法 毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣等溫法5.1.1 當(dāng)需要檢查的有機(jī)溶劑數(shù)量不多，并極性差異較小時(shí)，可采用此法。 色譜條件 柱溫應(yīng)根據(jù)待測(cè)溶劑及配制供試液的溶劑的沸點(diǎn)決定。為避免溶劑在柱內(nèi)凝結(jié)，提高保留的重現(xiàn)性，柱溫不宜太低，通常在40l00間適當(dāng)選定；常以氮?dú)鉃檩d氣，流速為每分鐘1.02.0ml；以水為溶劑

6、時(shí)頂空瓶平衡溫度為7085，頂空瓶平衡時(shí)間3060分鐘；進(jìn)樣口溫度一般為150200；如采用FID檢測(cè)器，溫度為250。5.1.2 測(cè)定法 取對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣不少于2次，測(cè)定待測(cè)峰的峰面積。由于靜態(tài)頂空進(jìn)樣時(shí)，抽取的是處于氣液平衡的頂空氣，所以每個(gè)頂空瓶只能去取樣一次；供試溶液必須放入2(n)個(gè)頂空瓶中，以保證2(n)次進(jìn)樣的要求。5.2 第二法 毛細(xì)管柱頂空瓶進(jìn)樣系統(tǒng)程序升溫法5.2.1 當(dāng)需要檢查的有機(jī)溶劑數(shù)量較多并極性差異較大時(shí)，可采用此法。色譜條件如為非極性色譜系統(tǒng)，柱溫一般先在30維持7分鐘，再以8/min的速度升至120，維持15分鐘；如為極性色譜系統(tǒng)，柱溫一般

7、先在60維持6分鐘；再以8/min的升溫速率升至100，維持20分鐘；以氮?dú)鉃檩d氣，流速為2.0ml/min；以水為溶劑時(shí)頂空瓶平衡溫度7085，頂空瓶平衡時(shí)間3060分鐘；進(jìn)樣口溫度為200；如采用FID檢測(cè)器，溫度為250。5.2.2 具體到某個(gè)藥品的殘留溶劑檢查時(shí)，可根據(jù)該品種項(xiàng)下的殘留溶劑組成調(diào)整升溫程序。5.2.3 測(cè)定法 取對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣不少于2次，測(cè)定待測(cè)峰的峰面積。5.3 第三法 溶液直接進(jìn)樣法5.3.1 主要適用于企業(yè)對(duì)生產(chǎn)工藝中特定的殘留溶劑的控制，可采用填充柱，亦可采用適宜極性的毛細(xì)管柱。5.3.2 不應(yīng)采用酸或堿作為溶劑。5.3.3 測(cè)定法 取對(duì)照

8、品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣23次，每次12µl，測(cè)定待測(cè)峰的峰面積。6 計(jì)算法6.1 限度檢查 除另有規(guī)定外，按各品種項(xiàng)下規(guī)定的供試溶液濃度測(cè)定。以?xún)?nèi)標(biāo)法測(cè)定時(shí)，供試品溶液所得被測(cè)溶劑峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比不得大于對(duì)照品溶液的相應(yīng)比值。以外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，供試品溶液所得被測(cè)溶劑峰面積不得大于對(duì)照品溶液的相應(yīng)峰面積。6.2 定量測(cè)定 按內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法計(jì)算各殘留溶劑的量。7 注意事項(xiàng)7.1 頂空條件的選擇7.1.1 應(yīng)根據(jù)供試品中殘留溶劑的沸點(diǎn)選擇頂空溫度。對(duì)沸點(diǎn)較高的殘留溶劑，通常選擇較高的頂空平衡溫度；但此時(shí)應(yīng)兼顧供試品的熱分解特性，盡量避免供試品產(chǎn)生的揮發(fā)性熱分解產(chǎn)物對(duì)測(cè)定的干擾

9、。7.1.2 頂空平衡時(shí)間一般為3045分鐘，以保證供試品溶液的氣-液兩相有足夠的時(shí)間達(dá)到平衡。頂空平衡時(shí)間通常不宜過(guò)長(zhǎng)，如超過(guò)60分鐘，可能引起頂空瓶的氣密性變差，導(dǎo)致定量準(zhǔn)確性的降低。7.1.3 對(duì)于有傳輸管的頂空進(jìn)樣器，傳輸管溫度應(yīng)適當(dāng)，通常設(shè)定在110120。7.1.4 對(duì)照品溶液與供試品溶液必須使用相同的頂空條件。7.2 定量方法的驗(yàn)證 當(dāng)采用頂空色譜系統(tǒng)測(cè)定時(shí)，供試品與對(duì)照品處于不完全相同的基質(zhì)中，故應(yīng)考慮氣液平衡過(guò)程中的基質(zhì)效應(yīng)。由于標(biāo)準(zhǔn)加入法可以消除供試品溶液基質(zhì)與對(duì)照品溶液基質(zhì)不同所致的基質(zhì)效應(yīng)的影響，故通常采用標(biāo)準(zhǔn)加入法驗(yàn)證定量方法的準(zhǔn)確性。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)加入法與其他定量方法的結(jié)果

10、不一致時(shí)，應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)加入法的結(jié)果為準(zhǔn)。7.3 干擾峰的排除 供試品中的未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解物易對(duì)殘留溶劑的測(cè)定產(chǎn)生干擾。干擾作用包括在測(cè)定的色譜系統(tǒng)中未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解物與待測(cè)物的保留值相同(共出峰)；或熱降解產(chǎn)物與待測(cè)物的結(jié)構(gòu)相同(如甲氧基熱裂解產(chǎn)生甲醇)。當(dāng)測(cè)定的有機(jī)溶劑殘留量超出限度，但未能確定供試品中是否有未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解物對(duì)測(cè)定有干擾作用時(shí)，應(yīng)通過(guò)試驗(yàn)排除干擾作用的存在。對(duì)第一類(lèi)干擾作用，通常采用在另一種極性相反的色譜柱系統(tǒng)中對(duì)相同樣品再進(jìn)行測(cè)定，比較不同色譜系統(tǒng)中測(cè)定的結(jié)果。如二者結(jié)果一致，則可以排除測(cè)定中有共出峰的干擾；如二者結(jié)果不一致，則表明測(cè)定中有共出峰的干擾

11、。對(duì)第二類(lèi)干擾作用，通常要通過(guò)測(cè)定已知不含該溶劑的對(duì)照樣品來(lái)加以判斷。7.4 含氮堿性化合物的測(cè)定 普通氣相色譜的不銹鋼管路、進(jìn)樣器的襯管等對(duì)有機(jī)胺等含氮堿性化合物具有較強(qiáng)的吸附作用，致使其檢出靈敏度降低。當(dāng)采用頂空進(jìn)行系統(tǒng)測(cè)定此類(lèi)化合物時(shí)，應(yīng)采用惰性的硅鋼材料或鎳鋼材料管路；或采用溶液直接進(jìn)樣法測(cè)定。供試品溶液應(yīng)不呈酸性，以免待測(cè)物與酸反應(yīng)后不易氣化。通常采用弱極性的色譜柱或填料經(jīng)堿處理過(guò)的色譜柱分析含氮堿性化合物，如果采用胺分析專(zhuān)用柱進(jìn)行分析，效果更好。對(duì)不宜采用氣相色譜法測(cè)定的含氮堿性化合物，可采用其他方法如離子色譜法等測(cè)定。7.5 檢測(cè)器的選擇對(duì)含鹵素元素的殘留溶劑如氯仿等，采用ECD

12、檢測(cè)器，易得到高的靈敏度。7.6 由于不同的實(shí)驗(yàn)室在測(cè)定同一藥品時(shí)可能采用了不同的實(shí)驗(yàn)方法，當(dāng)測(cè)定結(jié)果處于合格不合格邊緣時(shí)，以采用內(nèi)標(biāo)及標(biāo)準(zhǔn)加入法為準(zhǔn)。8 應(yīng)用8.1 已知樣品中殘留溶劑的種類(lèi)8.1.1 測(cè)定方法的初步選擇 根據(jù)待測(cè)藥品的結(jié)構(gòu)和溶解性，選擇合適的頂空條件和溶劑；根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)或工藝流程確定待檢測(cè)樣品中的殘留溶劑種類(lèi)，在表2、表3中選定適合的色譜柱系統(tǒng)以達(dá)到最好的分離，并選擇一種與待測(cè)殘留溶劑無(wú)干擾的內(nèi)標(biāo)。8.1.2 測(cè)定方法的考察與優(yōu)化8.1.2.1 用所選溶劑配制對(duì)照品溶液并加入內(nèi)標(biāo)，并在所選色譜柱系統(tǒng)考察是否能夠達(dá)到分離要求，內(nèi)標(biāo)是否合適。如果不能達(dá)到要求，根據(jù)情況進(jìn)行適當(dāng)?shù)?/p>

13、調(diào)整，如調(diào)整柱溫、流速等或選用其他色譜柱系統(tǒng)。8.1.2.2 精密稱(chēng)取樣品0.2g置20m1頂空瓶中，加溶劑2.0m1溶解，加蓋密封作為供試品溶液。在所確定的色譜條件下測(cè)定，考察供試品中待測(cè)殘留溶劑是否達(dá)到分離要求，內(nèi)標(biāo)出峰處是否有干擾。如果不能達(dá)到要求，根據(jù)情況進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，如調(diào)整柱溫、流速等或選用其他色譜柱系統(tǒng)。8.1.2.3 最終確定色譜條件和內(nèi)標(biāo)。8.1.3 定量測(cè)定8.1.3.1 配制足夠量的一定濃度的內(nèi)標(biāo)溶液備用。精密稱(chēng)取供試品約0.2g置頂空瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液2.0ml溶解，加蓋密封作為供試品溶液。根據(jù)供試品溶液的濃度計(jì)算出按照中國(guó)藥典的限度應(yīng)配制的對(duì)照品濃度，并用內(nèi)標(biāo)溶液配制。

14、8.1.3.2 在相同的頂空條件和色譜條件下測(cè)定對(duì)照品和供試品并按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算結(jié)果。8.1.4 結(jié)果判定 8.1.4.1 測(cè)定結(jié)果小于中國(guó)藥典規(guī)定限度的組分，為殘留溶劑項(xiàng)符合規(guī)定的組分。8.1.4.2 當(dāng)存在有干擾組分、限度邊緣組分、不符合規(guī)定的組分時(shí)，要改變測(cè)定條件做進(jìn)一步的考察，以排除干擾因素，得到正確結(jié)論。8.2 未知樣品中殘留溶劑的種類(lèi)8.2.1 初步判斷8.2.1.1 精密稱(chēng)取藥品約0.2g置20mI頂空瓶中，加溶劑2.0ml溶解，加蓋密封作為供試品溶液；8.2.1.2 分別采用程序升溫法，在非極性和極性?xún)煞N色譜柱系統(tǒng)條件下，按推薦的程序升溫條件用頂空氣相色譜法測(cè)定藥品中所有揮發(fā)性組分的保留時(shí)間；在相同色譜條件下測(cè)定丁酮的保留時(shí)間；8.2.1.3 計(jì)算藥品中所有揮發(fā)性組分相對(duì)于丁酮的相對(duì)保留時(shí)間。8.2.1.4 將兩個(gè)柱系統(tǒng)中的揮發(fā)性組分相對(duì)于丁酮的保留時(shí)間分別與表3中的相對(duì)保留時(shí)間比較，找出相對(duì)保留時(shí)間相差小于3%的有機(jī)溶劑，作為可能存在的殘留溶劑；8.2.1.5 找出在兩個(gè)柱系統(tǒng)中共同的可能存在的殘留溶劑，即為藥品中可能存在的殘留溶劑。8.2.2 確定 根據(jù)初步判斷結(jié)果，使用有機(jī)溶劑標(biāo)樣配制對(duì)照品溶液，選擇適當(dāng)?shù)牡葴厣V系統(tǒng)測(cè)定對(duì)照品溶液和供試品溶液，供試品溶液中殘留溶劑的保