中藥黃芪對糖尿病大鼠CYP4502E1活性的影響

1、中藥黃黃對糖尿病大鼠CYP4502E1活性的影響單位：【摘要】目的用探針?biāo)幬镅芯奎S黃對大鼠CYP450活性的影響.方法采用四氧喀咤誘發(fā)糖尿病大鼠,正常大鼠為對照組,給予黃黃水提物誘導(dǎo),通過HPLC檢測探針?biāo)幬锏拇x率來評價(jià)各組CYP4502E1活性.結(jié)果給藥組動(dòng)物血液中的氯嚶沙宗的含量與模型組和空白組的含量無顯著區(qū)別P0.05o結(jié)論黃黃對大鼠CYP2E1活性無明顯影響.【關(guān)鍵詞】CYP450氯嚏沙宗探針?biāo)廃S黃Abstract:ObjectiveToevaluatetheeffectofHuangqionCYP2E1activityofdiabeticratswithprobedrug.Meth

2、odsDiabeticratmodelwasinducedbyalloxan.TheratsweregiventheaqueousextractsofHuangqiorallyforsixdays.TheactivityofCYP2E1wasevaluatedbymeasuringchlorzoxazone,adrugprobeforCYP2E1,anditsmetabolitesweredetectedbyDOC格式論文,方便您的復(fù)制修改刪減HPLC.ResultsHuangqihadnoeffectonplasmaconcentrationofcholrzoxazone,therewasn

3、osignificantdiffereneewhencomparedwithcontrolgroupanddiabetic-modelgroup(P>0.05).ConclusionHuangqihasnoeffectonCYP2E1activity.Keywords:CYP450;Chlorzoxazone;Probedrug;Huangqi黃黃作為一種常用中藥,不管是組方配伍湯劑,還是提取物的注射劑,均已經(jīng)在臨床上廣泛應(yīng)用于糖尿病(中醫(yī)“消渴)的治療1,但黃黃對CYP450酶系的影響尚屬空白,因此本實(shí)驗(yàn)研究了黃黃對細(xì)胞色素P450的影響.細(xì)胞色素P450(cytochromeP450

4、,CYP)酶系一般簡稱藥酶,在外源性物質(zhì)和內(nèi)源性物質(zhì)的代謝中起著極其重要的作用2o本實(shí)驗(yàn)用探針?biāo)幬锓?通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)來評價(jià)黃黃對CYP2E1活性的影響,CYP2E1底物為氯嚏沙宗(chlorzoxazone):3,41.1器材與方法1.1 藥物黃黃(購自河南省藥材公司,經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院中藥鑒定學(xué)科鑒定為正品),粉碎并準(zhǔn)確稱量,經(jīng)水煎濃縮,使其濃度相當(dāng)于1g/ml的原藥萃取液.冷藏備用.1.2 試劑四氧喀口定、氯嗖沙宗為Sigma公司試劑,氯仿、甲酸和2-丙醇為分析純試劑,乙睛為色譜純試劑.1.3 儀器高效液相色譜(美國Waters公司)；Millennium2021色譜工作站.1.4 動(dòng)物SD大鼠

5、,雄性230±20g,二級,購自鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中央1.5 方法1.5.1 模型制作大鼠隨機(jī)分為兩組,實(shí)驗(yàn)組在空腹12h后按200mg/kg體重腹腔注射2%四氧喀咤,正常對照組大鼠腹腔注射相同體積的生理鹽水.造模期間檢測體重、血糖強(qiáng)生血糖儀.于第7天,禁食12h,眼內(nèi)眥靜脈叢取血測血糖.空腹血糖升高,體重下降,說明已制備2型糖尿病模型.因四氧喀咤對肝臟可能有潛在損傷,故監(jiān)測谷丙轉(zhuǎn)氨酶GPT.將已制備成2型糖尿病模型的大鼠且GPT無明顯改變者隨機(jī)分為模型組、給藥組,每組5只.152給藥方法給藥組每天清晨空腹灌胃給予黃黃提取液1次,0.3ml/100g,空白對照組、模型組給予相同體

6、積的生理鹽水,誘導(dǎo)時(shí)間為6d.黃黃誘導(dǎo)后的第6天在乙醴麻醉下,于大鼠的右側(cè)頸靜脈處做插管手術(shù),次日給予探針?biāo)幬锫揉采匙?氯口坐沙宗按20mg/kg的劑量參加少量聚山梨酯-80研磨,再參加生理鹽水制成乳濁液靜脈注入,并于給藥后的0.17,0.5,0.83,1.17,1.5h由插管處取出約025ml血液,立即以4000r/min離心5min,準(zhǔn)確取出100山血清,參加內(nèi)標(biāo),混勻,再參加650山氯仿,混懸振蕩2min,離心5000r/min,5min,取有機(jī)相氯仿500山,氮?dú)庀赂稍?參加流動(dòng)相100“溶解,取80山進(jìn)樣.1.6 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析AUC0s8h用梯形法計(jì)算,Cmax和tmax可以從

7、藥-時(shí)曲線直接讀出.Ke和t1/2運(yùn)用藥代動(dòng)力學(xué)專用軟件PAS2.0計(jì)算.給藥前后藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的差異用SPSS10.0統(tǒng)計(jì),顯著性檢驗(yàn)采用配對t檢驗(yàn).2結(jié)果從表1中可以看出在造模第5天,大鼠的體重平均值下降,血糖均值上升,造模前后體重和血糖的t檢驗(yàn)說明,P0.01,均有極顯著差異,說明用四氧喀咤成功地誘導(dǎo)了大鼠糖尿病的形成.表1體重、血糖和GPT略大鼠腹腔注射四氧喀咤后2d開始出現(xiàn)多飲'多尿及體重不增等典型糖尿病病癥,于給藥后1周,糖尿病組大鼠血糖較對照組血糖明顯增加PV0.001o因四氧喀噬對肝臟可能有潛在損傷,故監(jiān)測GPTo結(jié)果說明,給藥前后GPT無顯著差異.對氯嗖沙宗的對照品進(jìn)

8、樣量和峰面積數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸,可以得到氯口坐沙宗的回歸方程為Y=285.9865+7.684e+0.05X圖1,兩者的相關(guān)系數(shù)均為1,呈線性相關(guān),說明可以從方程推算樣品氯嚶沙宗的含量.運(yùn)用藥動(dòng)學(xué)PAS1.0軟件對氯嗖沙宗藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,分別按單室、雙室、二室模型以最小二乘法擬和后,氯口坐沙宗同單室模型相吻合,權(quán)重為1/CC.01.5h的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)表2以及藥時(shí)曲線圖2可以看出：給藥組動(dòng)物血液中的氯口坐沙宗的含量與模型組和空白組的含量無顯著區(qū)別P0.05.表2各組血漿中2種探針?biāo)幬锏乃巹?dòng)學(xué)參數(shù)略3討論藥物在機(jī)體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化主要由肝細(xì)胞內(nèi)滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的肝藥酶催化,其中的細(xì)胞色素P450CYP45

9、0同工酶是催化藥物進(jìn)行氧化、復(fù)原、水解等代謝作用的重要的酶系.CYP450不僅在藥物的代謝、降解和排泄中起著重要作用,所以研究中藥與CYP450酶系的關(guān)系意義重大.不但可以推知中藥的體內(nèi)代謝過程,而且可以為臨床中西藥物的合理搭配使用提供直接依據(jù).本實(shí)驗(yàn)采用四氧喀咤誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型,應(yīng)用氯嗖沙宗作為CYP2E1的探針?biāo)幬飦碛^察比擬中藥黃黃對肝藥酶活性是否有影響.同時(shí),由于四氧喀咤對肝臟有潛在損傷,所以測定GPT可以監(jiān)測有無肝損傷.從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看,01.5h的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)表2以及藥時(shí)曲線圖2可以看出：給藥組動(dòng)物血液中的氯嗖沙宗的含量與模型組和空白組的含量無顯著區(qū)別P0.05o這說明黃黃很可能對CYP2E1沒有作用,提示當(dāng)黃黃和CYP2E1酶底物的藥物合用時(shí),很可能不會(huì)發(fā)生藥物的相互作用.綜上所述,研究中藥對CYP450酶系的影響,可以為臨床中西藥物的合理配伍應(yīng)用,中藥與中藥間的相互作用提供指導(dǎo)具體原貝人同時(shí)還可以為中藥的藥物代謝動(dòng)力學(xué)提供研究思路和科學(xué)的研究數(shù)據(jù).【參考文獻(xiàn)】：1侯士良沖藥八百種詳解M,鄭州：河南科學(xué)技術(shù)出版社,1999:830.2侯艷寧,程桂芳,朱秀媛.黃苓式對小鼠肝細(xì)胞色