制作石蠟切片的常見(jiàn)問(wèn)題及處理1(精)

1、制作石蠟切片的常見(jiàn)問(wèn)題及處理石蠟切片是組織學(xué)和病理學(xué)的主要實(shí)驗(yàn)方法,也是臨床中觀察病理變化的重要手段,為教學(xué)、科研和臨床診斷做出了卓越貢獻(xiàn)。實(shí)踐發(fā)現(xiàn),切片制作過(guò)程中常常由于多方面的原因遇到困難,甚至導(dǎo)致制片失敗。本文將對(duì)制作石蠟切片過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題和處理方法作重點(diǎn)介紹。1 切片不成帶1常見(jiàn)原因 :切片刀不夠鋒利。切片刀與蠟塊的角度不當(dāng)。蠟塊四周留蠟邊太少。石蠟硬度過(guò)大 ,黏度不夠。解決方法 :重新磨刀。調(diào)整切片刀的角度?？芍匦掳窕?qū)⑾瀴K四周熔化,再放入包埋框中補(bǔ)蠟,修理蠟塊時(shí)組織塊周圍保留的石蠟以2mm左右為宜。蠟塊過(guò)硬可適當(dāng)加些蜂蠟,或更換熔點(diǎn)較低的石蠟重新包埋。將蠟塊放入冰箱內(nèi)延長(zhǎng)冰凍時(shí)

2、間,然后迅速切片。2 切片彎曲常見(jiàn)原因:組織成分及形狀不規(guī)則。蠟塊上下或左右兩邊不平行。蠟塊與切片刀刀口不平行。切片刀各處的鋒利程度不一致。解決方法:修整組織塊時(shí),注意修切整齊,切成方形或矩形,盡量不要切成三角形2將蠟塊四邊反復(fù)修平對(duì)稱。調(diào)節(jié)蠟塊夾持器,使其與切片刀平行。移動(dòng)切片刀,更換刀口位置。使用負(fù)離子發(fā)生器直吹切片處可防切片卷曲3。3 切片上出現(xiàn)裂紋常見(jiàn)原因:切片刀上有小缺口,或刀口不平整。刀口上粘附有細(xì)微纖維（如毛發(fā)、紙或布絲等物。組織過(guò)硬變脆（如凝血塊、膠凍樣物質(zhì)、囊腺瘤、甲狀腺、腺瘤等4 。組織中可能含有較硬之物質(zhì),如固定液之結(jié)晶石灰質(zhì)。裱片的水溫太高。包埋時(shí)石蠟凍結(jié)太慢。解決方法

3、:切片刀某處有缺口,可調(diào)換刀口部位或重新磨刀。刀口上缺口過(guò)多且不平整,可先將刀鋒垂直在磨刀石上輕輕磨數(shù)次,然后按常規(guī)磨刀。擦凈刀口。適當(dāng)減少脫水、透明、浸蠟時(shí)間。組織中硬性物質(zhì)太多,則不宜用。裱片的水溫以45左右為宜。包埋時(shí)待蠟塊周圍凝結(jié)一層,即放入冷水中。4 切片厚薄不均常見(jiàn)原因:脫水、透明、浸蠟過(guò)度、時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、溫度過(guò)高4。蠟塊太大,過(guò)硬,轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)刀刃受震動(dòng)。切片微動(dòng)部分失靈,齒輪跳格。解決方法:調(diào)整脫水、透明、浸蠟時(shí)間和溫度。如蠟塊過(guò)大,以后取材時(shí)注意取材的大小。蠟塊組織過(guò)硬,可返回水中浸泡,再重新脫水和包埋。修理切片機(jī)失靈的部分,調(diào)整螺旋,加機(jī)油潤(rùn)滑零件 ,必要時(shí)需請(qǐng)專業(yè)技術(shù)人員調(diào)整切片機(jī)

4、。5 切片皺褶常見(jiàn)原因:石蠟太軟或室溫過(guò)高。切片刀上粘有殘余的石蠟,刀口不干凈。組織浸蠟時(shí)間不夠,或脫水、透明不夠。切片刀不鋒利。裱片的水溫過(guò)高或過(guò)低。解決方法:可將蠟塊放入冰箱中冰凍后切片,并在切片時(shí)一邊切片一邊用冰塊冰凍或換蠟。如室溫過(guò)高,可開(kāi)空調(diào)降低室溫。切片刀不干凈,可用棉花沾少許二甲苯將刀口拭干凈。重復(fù)浸蠟過(guò)程或延長(zhǎng)脫水、透明時(shí)間。將切片刀磨銳利再行切片。裱片的水溫以45為宜。組織蠟帶先放入 35%的漂片酒精中,再撈出放入溫水中可預(yù)防皺褶 6 。6 切片粘刀常見(jiàn)原因:切片時(shí)有靜電作用,產(chǎn)生靜電吸引,在冬季或氣候干燥時(shí)常出現(xiàn)這種情況。解決方法:可用加濕器,以增加空氣中的水分 ,而減少靜

5、電作用。把衛(wèi)生紙用涼水浸濕后圍在切片機(jī)操作臺(tái),可以在切片機(jī)臺(tái)周圍形成靜電屏蔽 7 。把展片時(shí)所用毛筆在濕紙上進(jìn)行蠟屑清理。7 切片脫落常見(jiàn)原因 :取材太厚或組織含血成分多、脂肪多 8 。組織固定不佳,脫水、透明不徹底,致使石蠟無(wú)法浸入組織內(nèi)。組織脫水透明過(guò)度,浸蠟時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或溫度過(guò)高,引起組織收縮硬脆。載玻片清洗得不潔凈。用急水沖洗或震蕩過(guò)于劇烈。染液或試劑的酸堿度不適宜或停留時(shí)間較久9?？酒瑫r(shí)間過(guò)短、溫度過(guò)低或時(shí)間長(zhǎng)、溫度過(guò)高10 。石蠟、二甲苯使用時(shí)間過(guò)久11。解決方法 :取材不能太厚,載玻片下2/3處用右手的大魚(yú)際肌均勻涂擦蛋白甘油,厚薄適中。按組織大小厚薄選擇固定、脫水、透明時(shí)間。或者在

6、不影響診斷的原則下將組織重新脫水,透明浸蠟,包埋蠟熔度要比浸蠟熔點(diǎn)高35。先用溫水潤(rùn)澤 ,再用冰硬化,然后再切片。徹底清潔載玻片,使之成中性。切片不能直接放于水流下沖洗或者改為浸泡 12。同時(shí)經(jīng)過(guò)煮沸,再次凈化和蒸餾處理后的水可增加了蠟片與載玻片之間的吸引力,冷開(kāi)水作為漂片用水既方便又經(jīng)濟(jì)應(yīng)首選13。染液或試劑的酸堿度適宜、停留時(shí)間合理。一般在60 ,2小時(shí)為宜。二次浸蠟、更換二甲苯。8 切片灰染常見(jiàn)原因:固定液濃度太低14或者組織固定不及時(shí)、不徹底15。取材太厚。水洗不夠。脫蠟不充分16。解決方法:固定及時(shí)徹底。脫盡原染色,復(fù)染時(shí)延長(zhǎng)蘇木精的染色時(shí)間來(lái)補(bǔ)救。取材不宜太厚。水洗充分。脫蠟徹底。

7、石蠟切片是組織學(xué)和病理學(xué)的主要實(shí)驗(yàn)方法,也是臨床中觀察病理變化的重要手段,為教學(xué)、科研和臨床診斷做出了卓越貢獻(xiàn)。實(shí)踐發(fā)現(xiàn),切片制作過(guò)程中常常由于多方面的原因遇到困難,甚至導(dǎo)致制片失敗。本文將對(duì)制作石蠟切片過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題和處理方法作重點(diǎn)介紹。1 切片不成帶1常見(jiàn)原因:切片刀不夠鋒利。切片刀與蠟塊的角度不當(dāng)。蠟塊四周留蠟邊太少。石蠟硬度過(guò)大,黏度不夠。解決方法:重新磨刀。調(diào)整切片刀的角度?？芍匦掳窕?qū)⑾瀴K四周熔化,再放入包埋框中補(bǔ)蠟,修理蠟塊時(shí)組織塊周圍保留的石蠟以2mm左右為宜。蠟塊過(guò)硬可適當(dāng)加些蜂蠟,或更換熔點(diǎn)較低的石蠟重新包埋。將蠟塊放入冰箱內(nèi)延長(zhǎng)冰凍時(shí)間,然后迅速切片。2 切片彎曲常見(jiàn)

8、原因:組織成分及形狀不規(guī)則。蠟塊9 染色淺、深、不均、色素沉著常見(jiàn)原因:固定液久存或者脫蠟不干凈。蘇木精過(guò)染或伊紅過(guò)染。切片不均勻。封固時(shí)二甲苯已揮發(fā)完畢3。福爾馬林色素17。解決方法:在備用的甲醛中放入適量大理石或白色粉筆作為中和劑,或經(jīng)常更換脫蠟劑18。蘇木精過(guò)染使組織呈深紫色可延長(zhǎng)分化和返藍(lán)時(shí)間;伊紅過(guò)染可通過(guò)水洗減輕伊紅顏色19。切片均勻。封固前當(dāng)二甲苯揮發(fā)后應(yīng)重新放入到二甲苯中透明。在脫蠟水洗后可用10%飽和苦味酸無(wú)水乙醇溶液處理30min20。10 切片褪色21-22常見(jiàn)原因:染色前脫蠟不徹底。染色過(guò)程中脫水不干凈。蘇木精染液PH 值過(guò)小,或者伊紅染液加促染劑冰醋酸過(guò)多。載玻片和蓋

9、玻片不呈中性。在潮濕多雨時(shí)封閉切片,導(dǎo)致濕氣進(jìn)入。二甲苯被氧化,生成苯甲酸和鄰苯二甲酸而成酸性,可使堿性燃料褪色。切片在陽(yáng)光下爆曬。解決方法:染色前徹底脫蠟。染色過(guò)程中脫水時(shí)間要充足。徹底清洗載玻片和蓋玻片,使之呈中性。最好在干燥季節(jié)制作切片。切片復(fù)染。封固劑和切片避免陽(yáng)光直射,以免氧化變酸。避光保存。11 切片封固不良23-24常見(jiàn)原因:封固時(shí)二甲苯已揮發(fā)完畢。封固劑過(guò)稀或太稠。切片厚薄不勻。切片未展開(kāi)。封固方法不當(dāng)。組織脫水不徹底。解決方法:封固前當(dāng)二甲苯揮發(fā)后應(yīng)重新放入到二甲苯中透明。封固劑濃度要適當(dāng)。切片完全展開(kāi),無(wú)皺褶、無(wú)氣泡。封固時(shí)先將蓋玻片一側(cè)放置于滴有樹(shù)膠的組織切片上,然后緩慢放下將空氣完全排除避免產(chǎn)生