總黃酮、多酚含量的測定

1、。總黃酮含量的測定一、儀器紫外 - 可見分光光度計、分析天平、低速離心機、超聲波提取器、恒溫水浴鍋、粉碎機、 pH計、 10mL容量瓶 15 個、 10mL具塞試管、 100mL燒瓶、 10mL離心管10 個、試管架 2 個二、藥品蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 40mg、無水乙醇 1000mL、亞硝酸鈉 500g、硝酸鋁 500g、 NaOH 500g三、實驗步驟（一）、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制1. 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 40mg置于稱量瓶中 80烘干至恒重， 取烘干后的 20mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品用水定容至 100mL,得 200g/mL 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)貯備液， 精確量取上述濃度蘆丁標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液 0、 0.2 、 0.4 、0.8 、1.2 、

2、 1.6 、2.0 mL 分別置于 10 mL 具塞試管中。2. 向具塞試管中分別加 60乙醇 5、4.8 、4.6 、 4.2 、 3.8 、3.4 、3.0 mL 。3. 然后加 5亞硝酸鈉 0.3 mL ，搖勻，靜置 6 min 。4. 再加 10硝酸鋁 0.3 mL ，搖勻，靜置 6 min 。5.加 4氫氧化鈉 4.0 mL ，用 60%的乙醇定容至刻度，搖勻，靜置12 min 。6. 于 510 nm波長下測定吸光度，并以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)濃度值為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。研究表明蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品含量在 00.5mg 范圍內(nèi)與吸光度具有良好的線性關(guān)系。（二）、樣品處理及總黃酮的提取

3、（以 60%乙醇提取為例）1. 將樣品在 80烘干 24 h ，粉碎后過 80 目篩置于干燥器中備用。2. 稱取 500± 2 mg 樣品于 25 mL 具塞三角瓶中，使樣品位于三角瓶底部（重復(fù)3 次）。3.每瓶加 4 mL 60乙醇，放超聲波提取器提取2 h 。提取液轉(zhuǎn)至 10 mL具塞離心管中。4. 再向具塞三角瓶中加 4 mL的 60乙醇，放超聲波提取器提取 1 h，提取液轉(zhuǎn)至相應(yīng) 10 mL 具塞離心管中， 6000 r/min離心 10 min ，離心后取上清液于相-可編輯修改 -。應(yīng)的 10 mL 具塞試管中。 60乙醇定容至 10 mL，待測。（三）、樣品提取液總黃酮含

4、量的測定準(zhǔn)確吸取總黃酮提取液（稀釋適當(dāng)倍數(shù)）2.0 mL 于 10 mL 具塞試管中，加入 60乙醇 3.0 mL, 然后按步驟一中（ 3,4,5,6 ）的方法測定吸光度，試劑空白為參比（提取溶劑代替提取液） ，將吸光度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣液的總黃酮含量。-可編輯修改 -?？偡雍康臏y定一、儀器紫外 - 可見分光光度計、分析天平、低速離心機、恒溫水浴鍋、粉碎機、 pH計、超聲波提取器、回流裝置、 10 mL 具塞試管、 25 mL 具塞三角瓶、 250 mL 容量瓶二、藥品沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品100mg、無水碳酸鈉 500g、福林酚試劑 100 mL三、實驗步驟（一）、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精確稱量沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)

5、品 25 mg，用水溶解后定容于 250 mL容量瓶中，得到 0.1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液。分別移取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液 0.00 、0.25 、0.50 、0.75 、1.00 、1.25 、1.50 mL置于 10 mL具塞試管中，分別加入福林 - 酚試劑 1 mL，搖勻后再分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù) 12%Na2CO3溶液 2 mL，用水定容至 10 mL，搖勻。平行三組。室溫下避光反應(yīng) 1 h 后，在 765 nm波長下測定吸光度。以沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，研究表明，沒食子酸含量在 20 120g 范圍內(nèi)與吸光度具有良好的線性關(guān)系。（二）、樣品總酚的提

6、取以及樣品總酚含量的測定（以 60%乙醇提取為例）稱取 0.5g 粉碎的樣品于 25 mL具塞三角瓶中，加入10 mL 體積分?jǐn)?shù) 60%的乙醇溶液，攪拌均勻，在超聲波提取器中75提取 50 min。提取液以 3000 r/min離心 20 min ，取上清液，量取提取液體積，采用福林- 酚比色法測定樣品提取液的總多酚濃度。吸取 1.00 mL總多酚提取液（稀釋適當(dāng)倍數(shù)）于10 mL具塞試管中，分別加入福林 - 酚試劑 1 mL及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 12%的碳酸鈉溶液 2 mL并用 60%乙醇定容至刻度，在室溫下避光反應(yīng) 1 h ，在 765 nm 波長處測定樣品的吸光度，試劑空白為參比（提取溶劑代替提