檢驗(yàn)方法驗(yàn)證管理規(guī)程

1、檢驗(yàn)方法驗(yàn)證管理規(guī)程一、 目的通過(guò)驗(yàn)證考察所采用的檢驗(yàn)方法是否準(zhǔn)確、可靠，能始終如一地獲得客觀實(shí)際的數(shù)據(jù)或結(jié)果。二、范圍本規(guī)程適用于本公司檢驗(yàn)儀器的確認(rèn)、檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證。三、職責(zé)工程技術(shù)部、供貨方：負(fù)責(zé)檢驗(yàn)用精密儀器的安裝確認(rèn)。質(zhì)量控制部 ： 負(fù)責(zé)檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證方案、報(bào)告起草與實(shí)施，對(duì)所測(cè)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性負(fù)責(zé)。生產(chǎn)制造部 ： 協(xié)助檢驗(yàn)方法的確定。 質(zhì)量管理部： 負(fù)責(zé)驗(yàn)證工作的管理，協(xié)助檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案的起草，組織協(xié)調(diào)驗(yàn)證工作，并總結(jié)驗(yàn)證結(jié)果，起草驗(yàn)證報(bào)告。質(zhì)量管理部經(jīng)理：負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案及報(bào)告的審核。質(zhì)量授權(quán)人：負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案及報(bào)告的批準(zhǔn)。四、規(guī)程1.1 檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的前提1.1.1 檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的前提是

2、在檢驗(yàn)方法開(kāi)發(fā)階段已完成方法的測(cè)試條件的優(yōu)選工作，排除了干擾因素。對(duì)定量測(cè)定而言，方法的準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)應(yīng)在這一階段完成。1.1.2 儀器：已經(jīng)過(guò)校正且在有效期內(nèi)。1.1.3 人員：人員應(yīng)經(jīng)過(guò)充分的培訓(xùn)，熟悉方法及所使用的儀器。1.1.4 參照品或參考品：購(gòu)自法定機(jī)構(gòu)（中國(guó)藥品生物制品檢定所）的法定參照品；購(gòu)自可靠的供應(yīng)商（有法定的資質(zhì)證明）；自制參照品，其純度和性能符合中國(guó)藥品生物制品檢定所藥品/生物制品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)原料申報(bào)、受理辦法 要求。1.1.5 材料：所用材料，包括試劑、實(shí)驗(yàn)用容器等，均應(yīng)符合試驗(yàn)要求。1.1.6 穩(wěn)定性：在開(kāi)始進(jìn)行方法驗(yàn)證之前，考察試驗(yàn)溶液和試劑的穩(wěn)定性，確保在檢驗(yàn)周

3、期內(nèi)試驗(yàn)溶液和溶劑是穩(wěn)定的。1.2 檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的方式：前驗(yàn)證、回顧性驗(yàn)證。1.2.1 前驗(yàn)證：系指在正式投入使用前按照設(shè)定的方案進(jìn)行試驗(yàn)，獲得證據(jù)以證實(shí)檢驗(yàn)方法達(dá)到預(yù)期要求的行為。包括研究開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)室和質(zhì)量管理部對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行的前驗(yàn)證。1.2.1.1 研究開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)室的前驗(yàn)證是從方法的開(kāi)發(fā)為起點(diǎn)，以方法的驗(yàn)證告終。通常需三個(gè)步驟：l 通過(guò)文獻(xiàn)設(shè)計(jì)方法通常在產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的同時(shí)提出檢驗(yàn)方案；l 通過(guò)條件試驗(yàn)初定方法進(jìn)行檢驗(yàn)方法的篩選和條件優(yōu)化試驗(yàn)；l 通過(guò)驗(yàn)證確定方法進(jìn)行適用性試驗(yàn)，其基本內(nèi)容包括檢測(cè)儀器、準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍、選擇性等。l 通過(guò)其他分析人員（最好是沒(méi)有參加該方法開(kāi)發(fā)試驗(yàn)的人員）進(jìn)行

4、重復(fù)性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)方法的薄弱環(huán)節(jié)，使方法的文稿更具體、操作更完善。.2 質(zhì)量管理部QC進(jìn)行的前驗(yàn)證l 經(jīng)過(guò)上述前驗(yàn)證的方法移交給QC投入使用前，QC還應(yīng)進(jìn)行檢驗(yàn)方法的前驗(yàn)證，證明檢驗(yàn)方法的可靠性和重現(xiàn)性，獲得對(duì)檢驗(yàn)方法適用性信念的證據(jù)。l 研究開(kāi)發(fā)人員除了提供檢驗(yàn)方法的操作規(guī)程外，還應(yīng)提供盡可能詳細(xì)的有關(guān)檢測(cè)儀器要求、準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍、選擇性等方面的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和資料，包括成功的經(jīng)驗(yàn)及失敗的教訓(xùn)，對(duì)一些特別復(fù)雜的檢驗(yàn)方法，必要請(qǐng)專業(yè)技術(shù)人員實(shí)地指導(dǎo)驗(yàn)證，使QC的驗(yàn)證工作少走彎路。l 由另一位檢驗(yàn)人員進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，對(duì)兩者結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，準(zhǔn)確度和精密度應(yīng)符合規(guī)定。1.2.2 回顧性驗(yàn)證1.2.

5、2.1 系指利用對(duì)現(xiàn)有的歷史數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，收集證據(jù)，以證明檢驗(yàn)方法達(dá)到預(yù)期要求的行為。1.2.2.2 回顧性驗(yàn)證適用于原來(lái)一直使用，但未經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的與法定檢驗(yàn)方法不一致的檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證。1.2.2.3 回顧性驗(yàn)證的適用條件l 檢驗(yàn)方法已長(zhǎng)期使用，結(jié)果穩(wěn)定，由于方法投入使用時(shí)，法規(guī)尚無(wú)方法驗(yàn)證方面的要求，因而缺乏必要的原始驗(yàn)證資料。l 對(duì)某一方法的驗(yàn)證數(shù)據(jù)表示懷疑時(shí)。1.2.2.4 回顧性驗(yàn)證的先決條件是生產(chǎn)的工藝條件沒(méi)有變更，有完整的批生產(chǎn)記錄和批檢驗(yàn)記錄。每批的投料量和檢驗(yàn)的結(jié)果，生產(chǎn)作業(yè)中出現(xiàn)的偏差和糾正措施以及檢驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的異常情況等均有據(jù)可查。如果一個(gè)檢驗(yàn)方法在使用過(guò)程中曾做過(guò)若干

6、次修改，相應(yīng)的數(shù)據(jù)應(yīng)分段進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。1.3 檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的基本內(nèi)容：檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的基本內(nèi)容包括方案的起草及審批、檢驗(yàn)用儀器的確認(rèn)、檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證和驗(yàn)證報(bào)告四個(gè)大的方面。1.3.1 建立驗(yàn)證方案：依據(jù)批準(zhǔn)的驗(yàn)證計(jì)劃，按驗(yàn)證管理規(guī)程起草、審批驗(yàn)證方案。1.3.2檢驗(yàn)儀器的確認(rèn) 檢驗(yàn)儀器分為兩類：一類是測(cè)量?jī)x器，只涉及測(cè)量，不涉及分析；一類不僅進(jìn)行測(cè)量，還有分析過(guò)程。檢驗(yàn)儀器的確認(rèn)重點(diǎn)在對(duì)檢驗(yàn)儀器的確認(rèn)。通常包括：預(yù)確認(rèn)、安裝確認(rèn)、運(yùn)行確認(rèn)、性能確認(rèn)和再確認(rèn)。1.3.2.1 預(yù)確認(rèn)、安裝確認(rèn)，按設(shè)備及公用工程系統(tǒng)驗(yàn)證規(guī)程執(zhí)行。1.3.2.2 運(yùn)行確認(rèn)：儀器安裝確認(rèn)完成以后，空載試驗(yàn)來(lái)確保儀器能在要

7、求范圍內(nèi)達(dá)到規(guī)定的技術(shù)指標(biāo)。1.3.2.3 性能確認(rèn)：儀器的安裝確認(rèn)完成以后，在其功能試驗(yàn)符合要求的情況下，應(yīng)用實(shí)際待測(cè)品或模擬品對(duì)其進(jìn)行適用性檢查，以確認(rèn)儀器是否符合使用要求。一般應(yīng)至少連續(xù)測(cè)試3次。1.3.2.4 儀器的再確認(rèn)l 為確保儀器處于良好的使用狀態(tài)，對(duì)于一臺(tái)新購(gòu)買的儀器在確認(rèn)工作結(jié)束以后，應(yīng)根據(jù)儀器的類別、確認(rèn)的經(jīng)驗(yàn)制定再確認(rèn)的計(jì)劃。l 再確認(rèn)的時(shí)間間隔和內(nèi)容要根據(jù)儀器類別和使用情況決定，一般是3個(gè)月、6個(gè)月 或1年。l 再確認(rèn)的內(nèi)容通常包括線路連接、附件備品消耗品檢查、清潔工作、功能試驗(yàn)（重點(diǎn)）、工作日記等。1.3.3 檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的范圍：可分為3種情況1.3.3.1 對(duì)于直接

8、引用有法定依據(jù)的方法，如藥典標(biāo)準(zhǔn)和部頒標(biāo)準(zhǔn)，僅做系統(tǒng)適用性試驗(yàn)即可。若將法定方法用于測(cè)定新藥，或?qū)⒛骋黄贩N的法定測(cè)定方法用于另一品種，就需進(jìn)行系統(tǒng)的方法驗(yàn)證。1.3.3.2 對(duì)于已在一實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證過(guò)但需在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室使用的分析方法，可采用對(duì)照試驗(yàn)方法。即取同一批樣品，按此方法在兩實(shí)驗(yàn)室分別進(jìn)行檢驗(yàn)，將結(jié)果進(jìn)行比較（如用t試驗(yàn)計(jì)算），判斷是否有顯著差異。1.3.3.3分析方法可分為四種類型，驗(yàn)證要求可參見(jiàn)下表。不同分析方法的驗(yàn)證要求驗(yàn)證項(xiàng)目類型類型類型類型類型定量測(cè)定限度試驗(yàn)準(zhǔn)確度要求要求*精密度要求要求要求專屬性要求要求要求*要求檢測(cè)限要求*定量限要求*線性要求要求*范圍要求要求*注：“”表示不

9、作要求；“*”表示根據(jù)實(shí)驗(yàn)特性決定是否作要求。類型指用于測(cè)定原料藥中主要成分或制劑中活性組分（包括防腐劑）的定量分析方法。類型指用于測(cè)定原料藥中雜質(zhì)或制劑中降解產(chǎn)物的分析方法，包括定量分析和限度試驗(yàn)。類型指用于測(cè)定性能特性（如溶解度、溶出度）的分析方法。類型指鑒別試驗(yàn)。1.4 檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的內(nèi)容及基本要求1.4.1 準(zhǔn)確度試驗(yàn)：是指測(cè)量值與真值接近的程度。常用回收率表示。準(zhǔn)確度的測(cè)定至少要取方法范圍內(nèi)的3個(gè)濃度級(jí)別，每個(gè)濃度級(jí)別至少要測(cè)定3次，計(jì)算9個(gè)測(cè)定結(jié)果的回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，回收率及相對(duì)偏差均應(yīng)在規(guī)定限度內(nèi)。l 原料藥含量分析 可通過(guò)分析已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定；或用本法所得結(jié)果

10、與另一已驗(yàn)證的方法所得結(jié)果進(jìn)行比較。l 制劑中各組分的含量分析 按制劑處方取適量各組分進(jìn)行有機(jī)混合得一混合物，進(jìn)行測(cè)定，從而確定方法的準(zhǔn)確度。l 雜質(zhì)的定量分析 往樣品中加入已知量的雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定；若不可能得到某種雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可把此方法的分析結(jié)果與另一已驗(yàn)證的方法結(jié)果進(jìn)行比較來(lái)確定。雜質(zhì)的量可用雜質(zhì)與主藥響應(yīng)值的比值來(lái)表示。1.4.2 精密度測(cè)定：精密度系指在同一試驗(yàn)條件下，用同一方法對(duì)某一成分進(jìn)行多次測(cè)定，所測(cè)得的值彼此符合的程度。常用相對(duì)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）來(lái)表示。精密度又分為重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性3類。l 重復(fù)性：在相同條件下，由同一分析人員測(cè)得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性。方法

11、重復(fù)性的確定至少要取方法范圍內(nèi)的三個(gè)濃度級(jí)別，每個(gè)濃度級(jí)別至少要測(cè)定3次；或取100的樣品濃度至少測(cè)定6次。應(yīng)自樣品制備開(kāi)始制備6份樣品溶液，所得結(jié)果的相對(duì)偏差為方法重復(fù)性。自動(dòng)進(jìn)樣器重復(fù)性試驗(yàn)，一般取同一樣品溶液至少重復(fù)進(jìn)樣10次，其相對(duì)偏差不應(yīng)大于1。l 中間精密度：在同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度稱為中間精密度。一般考察中間精密度，至少應(yīng)在兩種不同條件下（不同時(shí)間、不同人員等）進(jìn)行考察，但不必對(duì)每個(gè)可能影響的因素進(jìn)行單個(gè)的考察，可設(shè)計(jì)方案對(duì)其統(tǒng)一考察。l 重現(xiàn)性：在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度，稱為重現(xiàn)性。一般實(shí)驗(yàn)室不進(jìn)行此項(xiàng)考察，只有當(dāng)分析方法

12、將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，才進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。 專屬性：專屬性系指在其它成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。l 對(duì)于鑒別試驗(yàn)，應(yīng)證明當(dāng)樣品中含有被分析物時(shí)呈正反應(yīng)，當(dāng)不含有被分析物時(shí)呈（陰性）負(fù)反應(yīng)。必要時(shí)，需證明與被分析物結(jié)構(gòu)相似或相近的物質(zhì)均不呈正反應(yīng)。l 對(duì)于雜質(zhì)的測(cè)定，一般取含一定雜質(zhì)量的樣品進(jìn)行分析，證明此雜質(zhì)測(cè)定其具有適宜的準(zhǔn)確度和精密度即可。l 對(duì)于含量分析，可通過(guò)加入一定量的雜質(zhì)或賦形劑至樣品中，通過(guò)分析證明結(jié)果不受影響。若雜質(zhì)或降解產(chǎn)物為未知物，可將樣品用強(qiáng)光照射、高溫、高濕、酸堿水解或氧化的方法進(jìn)行加速破壞，而后將此樣品進(jìn)行分析，將分析結(jié)

13、果與另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證的方法或法定方法所得結(jié)果進(jìn)行比較。含量測(cè)定應(yīng)比較兩方法的分析結(jié)果，雜質(zhì)測(cè)定若有色譜圖，則應(yīng)對(duì)比雜質(zhì)峰的形狀。1.4.4 檢測(cè)限：指樣品中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。l 非儀器分析目視法：通過(guò)用已知濃度的樣品分析來(lái)確定可檢出的最低水平作為檢測(cè)限。l 儀器分析法：可以非儀器分析所用的目視法來(lái)確定檢測(cè)限，也可用已知濃度的樣品與空白實(shí)驗(yàn)對(duì)照，以信噪比為2：1或3：1來(lái)確定檢測(cè)限的最低水平。1.4.5 定量限：系指樣品中被測(cè)物能被定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量測(cè)定方法研究時(shí)，應(yīng)確定定量限。l 非儀器分析目視法：通過(guò)用已知濃度的樣品分析來(lái)確定可檢出的最低

14、水平作為檢測(cè)限。所得結(jié)果符合準(zhǔn)確度和精密度的要求。l 儀器分析法：以信噪比為10：1時(shí)相應(yīng)的濃度作為定量估計(jì)值然后配制相應(yīng)定量限濃度的樣品，反復(fù)測(cè)試來(lái)進(jìn)行測(cè)定。1.4.6 線性:取樣量或樣品濃度在一定范圍內(nèi)變化時(shí)測(cè)定結(jié)果也成正比的變化，這樣的范圍稱之為線性范圍。可用一貯備液精密稀釋或分別精密稱樣，制備一系列的供試品（至少5份不同濃度的供試品）進(jìn)行測(cè)定。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)，進(jìn)行線性回歸，求出回歸方程及相關(guān)系數(shù)。濃度與其對(duì)應(yīng)的測(cè)定值經(jīng)二次回歸得到的相關(guān)系數(shù)r應(yīng)0.99。1.4.7 范圍：指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。無(wú)特殊要求，通常采用以下

15、標(biāo)準(zhǔn)：l 對(duì)于原料藥和制劑的含量測(cè)定，范圍應(yīng)在測(cè)試濃度的80%-120%。l 雜質(zhì)測(cè)定，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的50%-120%l 含量均勻度的測(cè)試濃度的70%-130%，根據(jù)某些劑型的特點(diǎn)此范圍可放寬。l 溶出度范圍應(yīng)為標(biāo)準(zhǔn)的±20%。l 若含量測(cè)定與雜質(zhì)同時(shí)檢測(cè)，用百分歸一法，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的 -20%至含量限度的20%。1.4.8 粗放性：是指再不同實(shí)驗(yàn)條件（如不同時(shí)間、不同實(shí)驗(yàn)室、不同人員等）下對(duì)同一樣品進(jìn)行分析所得結(jié)果的重現(xiàn)性。將在不同實(shí)驗(yàn)條件下所得結(jié)果的重現(xiàn)性與方法的重復(fù)性進(jìn)行比較，來(lái)衡量分析方法的粗放性。1.4.9 耐用性：是指測(cè)定條件有小變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響

16、的承受程度。1.5 無(wú)菌檢查法的方法驗(yàn)證1.5.1驗(yàn)證時(shí)按“供試品的無(wú)菌檢查”的規(guī)定及下列要求進(jìn)行操作。對(duì)每一試驗(yàn)菌慶逐一進(jìn)行驗(yàn)證。1.5.2菌種及菌液制備：同培養(yǎng)基靈敏度檢查。1.5.3薄膜過(guò)濾法：將規(guī)定量的供試品按薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入小于100cfu的試驗(yàn)菌，過(guò)濾取出濾膜接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基中，或?qū)⑴囵B(yǎng)基加至濾筒內(nèi)。另取一裝有同體積培養(yǎng)基的容器，加入等量的試驗(yàn)菌，作為對(duì)照。按夫定溫度35天。各試驗(yàn)菌同法操作。1.5.4直接妝種法：取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的硫乙醇鹽流體培養(yǎng)基8管，分別接入小于100cfu的乙型溶血性鏈球菌、白色念珠菌、短

17、芽孢桿菌、生孢梭菌各2管；營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基6管，分別接入小于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌個(gè)2管；改良馬丁培養(yǎng)基4管，分別接入小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入規(guī)定量的供試品，另1管作為對(duì)照，按規(guī)定的溫度培養(yǎng)35天 1.5.5結(jié)果判定：與對(duì)照管比較，如含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長(zhǎng)良好，則供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無(wú)抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì)，照此檢查法和檢查條件進(jìn)行供試品的無(wú)世界舞臺(tái)檢查。如供試品的該檢驗(yàn)量地該檢驗(yàn)條件下，有抑菌作用，可采用增加沖洗量，或增加培養(yǎng)基的用，或使用中和劑或滅活劑如-內(nèi)酰胺酶、對(duì)氨基苯甲酸，或更換濾膜品種等方法，消除供試品的抑菌用用，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。方法驗(yàn)證試驗(yàn)刀可與供試品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)行。1.6 驗(yàn)證報(bào)告1.6.1 對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行匯總分析，并給出明確的結(jié)論。1.6.2 附上經(jīng)驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法的文字材料。內(nèi)容包括試驗(yàn)?zāi)康摹Ⅱ?yàn)證要求、所用儀器名稱、品牌及設(shè)定條件、所用試劑、具體操作方法、結(jié)果及結(jié)論；試驗(yàn)中的主要偏差應(yīng)有適當(dāng)?shù)慕忉?；記錄及圖譜應(yīng)附在報(bào)告后。1.7