燈盞花素片的制備及質(zhì)量檢驗

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上燈盞花素片的制備及質(zhì)量檢驗1、 實驗?zāi)康?、 掌握燈盞花素的提取、分離及純化。2、 掌握燈盞花素片的制備。3、掌握片劑質(zhì)量的檢查方法。4、了解按藥物的性質(zhì)選用合適的處方工藝。二、實驗原理（一）燈盞花素的提取及含量測定眾所周知，常用的經(jīng)典提取方法有溶劑提取法、水蒸氣蒸餾法、升華法等。本實驗采用的是溶劑提取法，根據(jù)“相似相溶”這一原理，從中提取有效部位的方法。通過中草藥中各種成分在溶劑中的，選用對活性成分溶解度大、對不需要溶出成分溶解度小的溶劑，而將有效成分從藥材組織內(nèi)溶解出來。常見的溶劑可以分為三大類:水是強。親水性有機(jī)溶劑。親脂性有機(jī)溶劑。常見溶劑的親脂性的強弱順序為

2、(親水性則相反):>苯>氯仿>>>>乙醇>。選擇提取溶劑的原則：1、 溶劑不能與待提取成分發(fā)生不可逆的反應(yīng)；2、 溶劑對待提取成分的溶解度要大，而對雜質(zhì)溶解度要盡量小，或反之；3、 溶劑要經(jīng)濟(jì)易得，并具有一定的安全性，此外也要便于回收及重復(fù)利用。燈盞花素為黃酮類化合物（如圖1），黃酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、等溶劑，難溶于乙醚、等有機(jī)溶劑。根據(jù)查閱文獻(xiàn)資料及實際工藝考查，最終確定以75%乙醇為溶劑提取最佳。采用超聲波提取法獲得燈盞花素的粗提物，即超聲波輔助溶劑進(jìn)行提取，聲波產(chǎn)生高速、強烈的空化效應(yīng)和攪拌作用，破壞植物藥材的細(xì)胞，使溶劑滲透到

3、藥材細(xì)胞中，有如下優(yōu)點：縮短提取時間，提高提取率、溫度低、適應(yīng)性廣、提取藥液雜質(zhì)少，有效成分易于分離、純化；提取工藝運行成本低，綜合經(jīng)濟(jì)效益顯著，操作簡單易行，設(shè)備維護(hù)、保養(yǎng)方便等。 圖1 燈盞花乙素有些黃酮類化合物在（254nm或365nm）下呈不同顏色的，氨蒸汽或碳酸鈉溶液處理后熒光更為明顯。多數(shù)黃酮類化合物可與鋁鹽、鎂鹽、鉛鹽或鋯鹽生成有色的絡(luò)合物。本實驗采用鋁鹽顯色法，用紫外分光光度法進(jìn)行燈盞花素的含量測定。大孔吸附樹脂它是一種具有大孔結(jié)構(gòu)的有機(jī)高分子共聚體，是一類人工合成的有機(jī)高聚物吸附劑。因其具多孔性結(jié)構(gòu)而具篩選性，又通過表面吸附、表面電性或形成氫鍵而具吸附性。一般為球形顆粒狀，粒

4、度多為20-60目。大孔樹脂有非極性（D101,LX-60,LX-20）、弱極性（AB-8，LX-21,XDA-6）、極性（LX-38,LX-17）之分。大孔吸附樹脂理化性質(zhì)穩(wěn)定，一般不溶于酸堿及有機(jī)溶媒，在水和有機(jī)溶劑中可以吸收溶劑而膨脹。粗提物過大孔樹脂得到不同的提取部位，之后利用黃酮類化合物因分子中多有酚羥基而呈酸性，故可溶于堿性水溶液、吡啶、及中用堿溶酸沉法，得到純燈盞花素。燈盞花素中兩個酚羥基處于鄰位，較燈盞花甲素而言,更易于形成分子內(nèi)氫鍵,這將大大削弱其形成分子間氫鍵的能力。因此,利用二者形成分子間氫鍵能力的不同,協(xié)同調(diào)控樹脂的疏水作用和氫鍵作用,提高樹脂對燈盞花乙素和燈盞花甲素的

5、吸附選擇性，僅通過：“吸附-解吸”一步的簡單生產(chǎn)操作,達(dá)到燈盞花乙素與燈盞花甲素的完全分離。該工藝操作簡單、成本低、環(huán)境友好、適于工業(yè)化生產(chǎn)。（二） 片劑的定義及原料片劑是藥物與輔料均勻混合后壓制而成的片狀制劑。從總體上看，片劑是由兩大類物質(zhì)構(gòu)成的，一類是發(fā)揮的藥物(即主藥)，另一類是沒有生理活性的一些物質(zhì)（即輔料），它們所起的作用主要包括：填充作用、粘合作用、崩解作用和潤滑作用，有時，還起到著色作用、矯味作用以及美觀作用等。片劑是應(yīng)用最為廣泛的藥物劑型之一。片劑的制備方法有制粒壓片法（分為濕法制粒和干法制粒），直接粉末壓片法和半干式顆粒壓片法，其中濕法制粒壓片法最為常見。現(xiàn)將本實驗中濕法制粒

6、壓片法的生產(chǎn)工藝流程介紹如下：混合合壓片片片劑劑混合主藥藥粉碎碎過篩輔料料制軟材材潤濕劑或粘合劑、內(nèi)加崩解劑制粒干燥整粒稱重潤滑劑、外加崩解劑圖1 濕法制粒壓片法的生產(chǎn)工藝流程整個流程中各工序都直接影響片劑的質(zhì)量。（1）物料的前處理：制備片劑的藥物和輔料在使用前必須經(jīng)過干燥，粉碎和過篩等處理，一般要求粉末細(xì)度在80100目以上方可投料生產(chǎn)。（2）制軟材：濕法制粒壓片法中，向已混合均勻的粉料中加入適量的粘合劑或潤濕劑，用手工或混合機(jī)混合均勻制軟材，軟材的干濕程度應(yīng)適宜，除用微機(jī)自動控制外，也可憑經(jīng)驗掌握，即以“握之成團(tuán)，輕壓即散”為度。（3）制粒：軟材可通過適宜的篩網(wǎng)制成完整、均勻的顆粒。過篩制

7、得的顆粒一般要求較完整，避免顆粒中含細(xì)粉過多或呈線條狀，否則制成的顆粒烘干后，會出現(xiàn)太松或太硬的現(xiàn)象，都不符合壓片對顆粒的要求。（4）干燥：制好的濕顆粒應(yīng)盡快干燥，干燥的溫度由物料的性質(zhì)而定，一般為5060，對濕熱穩(wěn)定者，干燥溫度可適當(dāng)提高。（5）整粒：濕顆粒干燥后，需過篩整粒以便將粘結(jié)成塊的顆粒散開，同時加入潤滑劑和需外加法加入的崩解劑并與顆?；靹?。整粒用篩的孔徑與制粒時所用篩孔相同或略小。無論選擇哪種壓片方法，壓片前必須對干顆粒及粉末的混合物進(jìn)行主藥含量測定，然后根據(jù)顆粒所含主藥的量計算片重。 根據(jù)片重選擇制粒篩目與沖膜直徑，在適宜壓片下進(jìn)行壓片，由于藥物密度不同，可進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。（三）單

8、沖壓片機(jī) 單沖壓片機(jī)的結(jié)構(gòu)如下圖所示，其主要組成為（1）加料器：加料斗、飼粉器；（2）壓縮部件：上、下沖和模圈；（3）壓力調(diào)節(jié)器：壓力調(diào)節(jié)器、推片調(diào)節(jié)器、片重調(diào)節(jié)器。壓力調(diào)節(jié)器連在上沖桿上，用以調(diào)節(jié)上沖下降的深度，下降深度越大，上、下沖間的距離越近，壓力越大，反之則??；片重調(diào)節(jié)器連在下沖桿上，用以調(diào)節(jié)下沖下降的深度，從而調(diào)節(jié)?？椎娜莘e而控制片重；推片調(diào)節(jié)器連在下沖，用以調(diào)節(jié)下沖推片時抬起的高度，使之恰與模圈的上緣相平，片劑由飼粉器推出。一般單沖壓片機(jī)的產(chǎn)量（電動狀態(tài)）大約80100片/分，最大壓片直徑為12mm，最大壓力15kN。多用于新產(chǎn)品的試制和實驗室小量制備。（四）片劑的質(zhì)量檢查4.1

9、外觀形狀：片劑的外觀應(yīng)完整、光潔、色澤均勻、無異物。4.2 片重差異：取藥片20片，精密稱定總重量，求得平均片重后，再分別精密稱定各片的重量。每片重量與平均片重相比較（凡無含量測定的片劑，每片重量應(yīng)與標(biāo)示片重比較）超出重量差異限度（見表5-1）的藥片不得多于2片,并不得有1片超出限度1倍。表1 中國藥典2010年版規(guī)定的重量差異限度平均片重重量差異限度0.30g以下±7.5%0.30g或0.30g以上±5%4.3 硬度和脆碎度：普通片劑一般能承受4060N的壓力即認(rèn)為合格。脆碎度減失重量不得超過1%，且不得檢出斷裂、龜裂及粉碎的片。本試驗一般僅做1次，如減失重量超過1%，可

10、復(fù)檢2次，3次的平均減失重量不得過1%，并不得檢出斷裂、龜裂及粉碎的片。4.4 崩解時限檢查法表2 中國藥典規(guī)定的片劑的崩解時限片 劑普通片浸膏片糖衣片薄膜衣片腸溶包衣片崩解時限（min）15606030人工胃液中2小時不得有裂縫、崩解或軟化等4.5 溶出度或釋放度 溶出度：是指從片劑等制劑在規(guī)定溶劑中溶出的速度和程度。溶出度是片劑控制的一個重要指標(biāo)，對難溶性的藥物一般都應(yīng)作溶出度的檢查。它是一種模擬口服固體制劑在胃腸道中的崩解和溶出的體外試驗方法。藥物溶出度檢查是評價制劑品質(zhì)和工藝水平的一種有效手段，可以在一定程度上反映主藥的晶型、粒度、處方組成、輔料品種和性質(zhì)、生產(chǎn)工藝等的差異，也是評價制

11、劑活性成分生物利用度和制劑均勻度的一種有效標(biāo)準(zhǔn)，能有效區(qū)分同一種藥物生物利用度的差異，因此是藥品質(zhì)量控制必檢項目之一。 凡檢查溶出度的制劑，不再進(jìn)行崩解時限的檢查。4.5.1 溶出介質(zhì)的選擇：通常情況下，溶出介質(zhì)首選水 ，其次是0.1mol/L、緩沖液（pH值38）、人工胃液或人工腸液；若介質(zhì)中加適量如、或加分散助溶劑如十二烷基（0.5%以下）等，應(yīng)有文獻(xiàn)依據(jù)，并盡量選用低濃度，必要時應(yīng)做生物利用度考察。本實驗通過測定藥物在不同介質(zhì)中的溶出曲線（通常應(yīng)測定至藥物全部溶出）來選擇磷酸鹽緩沖液(pH6.8)作為溶出介質(zhì)。4.5.2 溶出介質(zhì)的體積選擇：溶出介質(zhì)的體積需使藥物符合漏槽條件，

12、一般一個劑量單位以900ml或1000ml為最普遍，規(guī)格較小時也可使用常用體積的1/23/4。4.5.3 轉(zhuǎn)籃法與槳法的選擇：一般情況下，多選擇槳法，轉(zhuǎn)籃法多用于劑或漂浮的制劑，研究資料應(yīng)進(jìn)行兩種方法的對比試驗，以確定最佳方法。4.5.4 轉(zhuǎn)速的選擇：目前，各國藥典中收載的溶出度測定方法中的轉(zhuǎn)速，大部分在50100轉(zhuǎn)/分。轉(zhuǎn)籃法以100轉(zhuǎn)/分為主；槳法以50轉(zhuǎn)/分為主。4.5.5 溶出度測定方法的驗證：方法學(xué)驗證內(nèi)容與含量測定基本相同，應(yīng)進(jìn)行專屬性試驗（輔料、殼的干擾試驗）、線性試驗、回收率試驗、溶液穩(wěn)定性試驗等。應(yīng)該注意的是，在方法學(xué)驗證中，試驗所用的溶媒應(yīng)為溶出介質(zhì)，即應(yīng)考查輔料、膠囊殼在

13、溶出介質(zhì)中的干擾，藥物在溶出介質(zhì)中的線性、回收率及穩(wěn)定性等。4.5.6 取樣點和限度的確定：通過溶出度均一性試驗（ 考察同一批樣品的溶出曲線）和重現(xiàn)性試驗（ 考察至少3批樣品的溶出曲線），確定合理的溶出度測定取樣點和限度。為避免多次取樣造成的誤差，測定溶出曲線時取樣點不宜過多，通常為56個點，小規(guī)格的因采用100250 ml溶出介質(zhì)，所以溶出曲線一般可選34個時間點。限度應(yīng)綜合考慮溶出曲線拐點和一般性要求。4.6 含量均勻度 ：系指小劑量制劑符合標(biāo)示量的程度。每片標(biāo)示量不大于25mg或每片主藥含量不大于25%時，均應(yīng)檢查含量均勻度。（五）實驗流程圖 燈盞花藥材粉碎、過篩、稱量 用75%乙醇超聲

14、提取三次，1h/次,過濾，合并 藥渣 濾液 濃縮干燥 粗提物 用HP20大孔樹脂柱過濾 水洗，蒸干 20%乙醇洗，蒸干 50%乙醇洗，蒸干 80%乙醇洗，蒸干 糖分 燈盞乙素 燈盞甲素 芩菜素、黃芩素 堿溶酸沉法，純化 燈盞乙素純品（含量90%以上） 處方工藝考查，壓片 片劑 質(zhì)量檢查 合格品三、 實驗材料與設(shè)備1 實驗材料1.1 原料藥：燈盞乙素 1.2 輔料：蔗糖、MCC 、PPVP、硬脂酸鎂、乳糖 2 儀器與設(shè)備乳缽、編織篩（16目、100目）、單沖壓片機(jī)、片劑四用測定儀、分光光度計4、 實驗內(nèi)容1 原料藥燈盞花素的提取、分離及純化取燈盞細(xì)辛藥材粉碎成粗粉，加75%乙醇10倍量，靜置24

15、h。設(shè)置超聲波清洗機(jī)溫度為25，轉(zhuǎn)速為3000r/min , 將泡好的粗粉放入提取60min，減壓濾過，保存濾液，將濾渣中再次用75%乙醇進(jìn)行超聲波提取，共提取三次。合并提取液，置于旋蒸儀上，設(shè)置溫度為50-55，旋蒸至快干狀。干法上樣：提取物用甲醇溶解，再加入適量HP20大孔樹脂，一起旋蒸干燥完全，然后裝柱。分別加水、20%乙醇、50%乙醇、80%乙醇洗脫，收集洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（T=55）濃縮至無液體滴下。后向濃縮物中加水適量，攪拌，加熱至80，用5%NaOH溶液調(diào)pH至8，攪拌使溶解，靜置24h，濾過，濾液用10%硫酸溶液調(diào)pH值為1-3，攪拌，靜置48h。高速離心，沉淀用水洗至中性。

16、放置烘箱（T=50）中干燥成固體，即得。若干燥品中野黃芩苷的含量未達(dá)到制片要求，將干燥品用乙醇精制，重結(jié)晶，結(jié)晶用乙醇、丙酮洗滌，干燥、粉碎、混合，即得。2 燈盞花素的含量測定2.1 對照品溶液的制備 精密稱取干燥的野黃芩苷對照品約5mg,置50mL容量瓶中,加甲醇溶解,并稀釋至刻度,搖勻,即得0.1mg.mL-1的野黃芩苷對照品溶液。2.2 測定波長的選擇 取對照品溶液2mL,置25mL容量瓶中,加10%三氯化鋁溶液3mL,加醋酸-醋酸鉀緩沖溶液(ph5.5)3mL,搖勻,加水稀釋至刻度,放置30min即得溶液1。另取10%三氯化鋁溶液3mL,置25mL容量瓶中,加醋酸-醋酸鉀緩沖液(pH

17、5.5)3mL,搖勻,加水稀釋至刻度即得溶液2。上述兩種溶液以純化水為空白,照紫外-可見分光光度法在190-800nm波長范圍內(nèi)掃描(見圖1) 從掃描圖譜中可以看出,三氯化鋁基本沒有吸收,而野黃芩苷與三氯化鋁的絡(luò)合產(chǎn)物在297、352.5nm處有兩個相對較強的吸收,由于352.5nm波長處的峰相對另一個吸收峰強度大,因此我們選擇353±1nm作為測定波長。2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL,分別置于25mL量瓶中,各加入10%三氯化鋁溶液3.0mL,醋酸-醋酸鉀緩沖溶液3.0mL,加水稀釋至刻度,搖勻,放置30min,以相應(yīng)的試劑溶液

18、為空白,在353±1nm波長處測定吸收度,以吸收度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,Y=0.05631X-0.00349,相關(guān)系數(shù)r=0.9999,線性范圍4.1620.80g.mL-1,線性曲線如下 2.4 制劑含量測定 取燈盞花素粉末5mg，置50mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度,精密量取上述溶液2.0mL，置25mL容量瓶中，加入10%三氯化鋁溶液3mL，加入醋酸-醋酸鉀緩沖液3mL，加甲醇稀釋至刻度，測定吸收度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線算出溶液的濃度。3 片的制備3.1 燈盞花素片處方 燈盞花素 1.87g （12%）蔗糖 2.02g （13%）MCC 6.22g （40%）PPVP 4.67g （30%）硬脂酸鎂 0.078g （0.5%）乳糖 0.78g （5%）50%乙醇 適量制成100片，每片總重0.155g 3.2 制備方法 3.2.1 顆粒的制備 取適量蔗糖、MCC 、PPVP、硬脂酸鎂、乳糖研磨粉碎并過篩100目備用（粉碎、過篩操作，乳缽），稱取處方量燈盞花素、蔗糖、MCC 、PPVP、硬脂酸鎂、乳糖混合均勻（攪拌、研磨、過篩混合操作，玻棒、乳缽、藥篩），加入適宜量的50乙醇液，混合均勻，制軟材，過16目尼龍篩擠壓制粒（