cho基因敲除細(xì)胞系

1、北京維尚立德生物HO-GS-/-1isderivedfromCHO-K1cell(ATCC),andKnock-outglutamate-ammonialigasegenebyTALEN,thenadapttosuspensionculturewithserumfreeculturemedium.Cho 細(xì)胞來(lái)源：ATCCCHOK1Genotypesequence:CHOGSWT:TITrATTTATUJCTTTCirGATCCrXTATACATATCTTCrTATrTTAAAfClGCnTKTTJlAAJOGnCTrTUAAJUCACACTAArTjCGOTGAG必AATAAT區(qū) 菜T T郵

2、 感 學(xué)ACAC并3TG3TG品KCaCTOAKTOCTGCBCmCTTBBTBTICTBKCaCTOAKTOCTGCBCmCTTBBTBTICTB愉 口NTGGCCCTGKCAXCKTNTGGCCCTGKCAXCKT ：匚AICATOCCCCCAGCCiCCKTQMC向XTTCQCCAD/HAOCtMGTTOCC氏TIC啦AU3cMe啦CAAATG及CMCICOCTGCCCCAGGGTG網(wǎng)她的TCCAWCATGT且TATCXGT&GTGGTAaCGGAGMGKIGCGCMAAAATBC以I：HSCIG%AGCCCAA&K；T&TAGAAGJGGTKCIGAGIGGAA

3、TTTMETGGCTCT版TAOCTTICTCrGWGGCTOCA史制TGJCRTGTAICTC的COCTGTMCCATGTI期GG山二匚CCTTCCGC山跖AiRZCAALZMGCRKTGTTTITGATCTTilWTJlSJgk*JCCTGJZASAjKAATTTAMEASCGrGTWGATAATGJCATGGTG舫CAACCAGCAOCCCTUGGirGGAAIUG皿蜥的GATgCTCTCTTGCGAjOGATCGGOCOCTmG&TTGGOCTTCgTSGCTTCOCTGGGCCCCA風(fēng)GTCTGm肥TGTGGTGTGG口工域AAAjXjCTTTnjZAGCCRTKTCATCG

4、iGGCTCCTAXTrGCCPGCriGTATGCTGGGGTC屈MT也癡叱&打。工TkAGGTCMG二ATGCCC陰TGAAirO二的TMGGOCCT&TGAAGGAATCOGCATGffi版ATCATCTGGGGIGGCCCGTTTCATCTTGCATU；必TATGTAATTTGGGGTAATAJ；CAACCTTTGMCCCAJGCQCjniaCTGGG皿TGGAAIUTGCCTGCCATKKGCCATKKTTTTTT舫TKCAAGCCATGOTKCAAGCCATGO；的G G福嗚AATGGTAATGGTC C跖山蛻KAKAK K跳前圜的CATTGMAMCTCATTGMA

5、MCTM M成4%4%俳熱88能贄勵(lì)TIB&COCTKCjLTCCaAGCCGGCCCTCCMCAATCCOCCTCCTC賞KTVCGTTOCjCAWO；肛皿皿皿比TmCACTUOGTaZSATCGCATCGC戰(zhàn)TGCCTGCC祐CATCAT儂CATKCCCGGCATKCCCGG詼BABA貨品岫*MGTTMGTT技T?T?鳴曲 Q： 說(shuō)枚CCCTCTCCCTCT的矍咐爾XTTXTT惟法TGACMMGOSMHTgCMGOCTTCTCMTC以蛆CTCGXW：畋CCCTCCAAT品MWCTAACIMKTITTJCTGAICTTCJGCOSTICUAGTiarXCACOUAGTiarXCACO

6、：須值批售KTTgTTHKTTgTTH皿式血的乩偵的ATCGKTTTTTAnCCTCJAAAAAAAAiAMAKWmATCGKTTTTTAnCCTCJAAAAAAAAiAMAKWmTGTTACMATAMTTAGSKnock-outgenotype:5bpMutant:ATTTTGATGGCTCTAGTACCTTTCAGTCTGAGGGCTCCAACAGTG.TATCTCAGCCCTGTTGCCATGTWT:ATTTTGATGGCTCTAGTACCTTTCAGTCTGAGGGCTCCAACAGTGACATGTATCTCAGCCCTGTTGCCATGTmycoplasmadetectionresu

7、lt:-12345NCP1-5:differentcellwellssample;NC:negativecontrol;北京安必奇生物Knockout基因敲除細(xì)胞或動(dòng)物模型一直以來(lái)是開(kāi)展基因功能研究、尋找合適藥物作用靶點(diǎn)的重要工具。CRISPR/Cas系統(tǒng)是細(xì)菌的一種適應(yīng)性免疫機(jī)制， 用來(lái)抵抗各種外來(lái)核酸的入侵。CRISPR/Cas9技術(shù)與ZFN、TALEN相比，更為高效、便捷，成為基因編輯的一個(gè)重要工具，在基因工程領(lǐng)域開(kāi)創(chuàng)了新紀(jì)元。改造優(yōu)化后的CRISPR/Cas9系統(tǒng)由兩部分組成：sgRNA和Cas9蛋白。sgRNA特異性識(shí)別靶位點(diǎn)后，Cas9蛋白在靶位點(diǎn)附近進(jìn)行切割，從而形成DSB。安必

8、奇憑借先進(jìn)的技術(shù)平臺(tái)、專業(yè)的科研團(tuán)隊(duì)，將為您提供各種Knockout基因敲除細(xì)胞系服務(wù)，甚至是難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞等。我們的一站式服務(wù)包括：sgRNA設(shè)計(jì)、篩選高效的sgRNA、敲除載體構(gòu)建、敲除效率驗(yàn)證等。我們將會(huì)在最短的時(shí)間內(nèi)提供給您高質(zhì)量的單克隆基因敲除細(xì)胞系，以及全面的檢測(cè)報(bào)告，包括靶點(diǎn)設(shè)計(jì)，靶點(diǎn)基因敲除效率檢測(cè)，克隆篩選及靶基因檢測(cè)全部過(guò)程。crRNAtracrRNA技術(shù)20ntHr細(xì)胞轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆篩選CruiserrMEnzyme 酶切、 TA 克隆測(cè)序、qRT-PCRW-5tenblot 檢測(cè)靶點(diǎn)敲除效率檢測(cè)。TargetDNA設(shè)計(jì)和篩選高效的 sgRNA

9、Pool 細(xì)胞敲除效率檢測(cè)服務(wù)內(nèi)容靶點(diǎn)設(shè)計(jì)-根據(jù)目的基因設(shè)計(jì)相應(yīng)的靶位點(diǎn)，并構(gòu)建sgRNA表達(dá)質(zhì)粒Cas95gRNA 表達(dá)載體構(gòu)建效率檢測(cè)-通過(guò)Cruiser?Enzyme酶切及pool細(xì)胞測(cè)序?qū)υO(shè)計(jì)的sgRNA進(jìn)行NGG月魄檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染-將cas9和sgRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞?？寺『Y選-挑選單克隆細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞基因型。敲除檢測(cè)-Cruiser?Enzyme酶切、TA克隆測(cè)序、qRT-PCR、Westernblot等。我們的優(yōu)勢(shì)多樣細(xì)胞種類-在H1299、2F-2B、4T1、786-O、9607、THP-1、MCF7/ADR、A549、V79、CHO、HepG2等多個(gè)種屬細(xì)胞中成功構(gòu)建Knoc

10、kout基因敲除細(xì)胞系。一站式服務(wù)-我們提供從sgRNA設(shè)計(jì)至敲除結(jié)果檢測(cè)（DNA、mRNA、蛋白水平）的一站式服務(wù)，滿足客戶不同的需求。各種基因位點(diǎn)-敲除效率不受靶位點(diǎn)限制。敲除效率高-敲除效率達(dá)到高，且脫靶效率低，達(dá)到100%的準(zhǔn)確率。應(yīng)用前景研究基因的功能及表達(dá)調(diào)控機(jī)制。構(gòu)建各種基因突變導(dǎo)致的疾病模型如白化病、阿爾茲海默癥、鐮刀型細(xì)胞貧血癥等，從而研究疾病的治療及診斷方法。染色體敲除或大片段敲除1。通過(guò)設(shè)計(jì)模版鏈和同源臂，插入外源基因或修復(fù)突變基因，從而進(jìn)行轉(zhuǎn)基因或突變基因修復(fù)實(shí)驗(yàn)2。利用Cas9的突變體（dCas9）只能特異性識(shí)別結(jié)合靶位點(diǎn)，而不能產(chǎn)生DSB的特點(diǎn)，可以進(jìn)行基因表達(dá)調(diào)控

11、的研究3-4以及甲基化等表觀遺傳學(xué)研究5參考文獻(xiàn)1HeZ,ProudfootC,MilehamAJ,etal.HighlyefficienttargetedchromosomedeletionsusingCRISPR/Cas9J.Biotechnologyandbioengineering,2015,112(5):1060-1064.2SchwankG,KooBK,SasselliV,etal.FunctionalrepairofCFTRbyCRISPR/Cas9inintestinalstemcellorganoidsofcysticfibrosispatientsJ.Cellstemcell,2013,13(6):653-658.3Perez-PineraP,KocakDD,VockleyCM,etal.RNA-guidedgeneactivationbyCRISPR-Cas9-basedtranscriptionfactorsJ.Naturemethods,2013,10(10):973-976.4GilbertLA,LarsonMH,MorsutL,etal.CRISPR-mediatedmodularRNA-guidedregulatio