高效液相色譜的維護(hù)與保養(yǎng)

1、高效液相色譜的維護(hù)與保養(yǎng)高效液相色譜的維護(hù)與保養(yǎng)液相色譜儀器的使用及保養(yǎng)色譜泵的保養(yǎng)色譜泵的保養(yǎng)流動(dòng)相要過(guò)濾常用緩沖液時(shí)，停泵前要用水沖洗，并用水沖洗柱塞桿清洗孔擰緊排液閥時(shí)，不要太用力，以不滲液為準(zhǔn)更換流動(dòng)相時(shí)，要保證兩種溶劑的互溶性,如不互溶，要用一種中間溶劑過(guò)渡. 例如:使用無(wú)機(jī)鹽緩沖液時(shí),用前和用后均須用水過(guò)渡流動(dòng)相的脫氣流動(dòng)相的脫氣流動(dòng)相脫氣的目的.使色譜泵的輸液準(zhǔn)確輸液均勻準(zhǔn)確，并且脈動(dòng)減小保留時(shí)間及色譜峰面積的重現(xiàn)性提高.提高檢測(cè)的性能防止氣泡引起的尖峰基線穩(wěn)定，信噪比增加溶劑的紫外吸收本底降低.保護(hù)色譜柱減少死體積防止填料的氧化流動(dòng)相脫氣的方法流動(dòng)相脫氣的方法加熱.簡(jiǎn)單，如同抽

2、真空一起使用，其效果很好。但容易造成流動(dòng)相組成的變化抽真空.同上，一般在溶劑抽濾的同時(shí)，也有脫氣的效果超聲波.簡(jiǎn)單，但效果不理想。通惰性氣體（一般用氦氣）.可保持連續(xù)脫氣，多用于低壓梯度在線脫氣機(jī).可保持連續(xù)脫氣，多用于低壓梯度色譜泵的排氣操作色譜泵的排氣操作使用前，應(yīng)先確認(rèn)泵頭內(nèi)沒(méi)有氣體，如有氣體要按以下步驟排氣：.將排液閥反時(shí)針轉(zhuǎn)2-3圈，用10ml注射器抽，直到出液.按以下方法之一將泵的后面放空將U6K的C閥打開(kāi)，或717設(shè)在PURGE狀態(tài)或，將參比閥打開(kāi)或，把色譜柱摘下.打開(kāi)電源開(kāi)關(guān).開(kāi)大流速到 69ml/min.同時(shí)用10ml注射器從排液閥注入流動(dòng)相.直到泵后的流速穩(wěn)定無(wú)氣泡為止色譜

3、泵的運(yùn)行色譜泵的運(yùn)行注意用外部控制器與用泵面板控制的區(qū)別.有些型號(hào)的外部控制器與面板不能同時(shí)用.如需要面板控制，需要斷開(kāi)控制線或關(guān)閉控制器排氣后的色譜泵即可運(yùn)行.注意排氣后，先設(shè)流速為 0恢復(fù)排氣時(shí)斷開(kāi)的部分，如 進(jìn)樣器、色譜柱如需要，恢復(fù)排氣時(shí)斷開(kāi)的控制線根據(jù)色譜柱的不同，逐漸提高流速到設(shè)定值液相色譜對(duì)流動(dòng)相的要求液相色譜對(duì)流動(dòng)相的要求除色譜柱對(duì)流動(dòng)相的要求外，還有.與檢測(cè)器匹配.脫氣.避免鹵素離子（不銹鋼系統(tǒng)）.溶劑的粘度.防止細(xì)菌的生長(zhǎng)流動(dòng)相的保存流動(dòng)相的保存有機(jī)溶劑流動(dòng)相:.室溫下密封,避光保存緩沖鹽流動(dòng)相:.當(dāng)日現(xiàn)配現(xiàn)用.低溫下密封保存,一般不超過(guò)3天.防止長(zhǎng)菌有機(jī)溶劑與水（緩沖鹽）

4、混配的流動(dòng)相:.低溫密封保存.防止有機(jī)相的揮發(fā)選用適宜的容器2 星期1 天1 星期1 小時(shí)新鮮配制5101520250分保存于聚乙烯瓶中的超純水保存于聚乙烯瓶中的超純水1 天1星期新鮮配制5101520250分保存于標(biāo)準(zhǔn)棕色玻璃瓶中的超純水保存于標(biāo)準(zhǔn)棕色玻璃瓶中的超純水檢測(cè)器的保養(yǎng)檢測(cè)器的保養(yǎng)如長(zhǎng)時(shí)間不用檢測(cè)器可以關(guān)掉紫外燈.在4小時(shí)以上不用時(shí)，太頻繁開(kāi)關(guān)也不好不要讓緩沖液長(zhǎng)期停滯在檢測(cè)池內(nèi).用純水沖洗示差檢測(cè)器及熒光檢測(cè)器.注意流動(dòng)池的耐壓，不要在后面加壓關(guān)于自動(dòng)進(jìn)樣器的針清洗關(guān)于自動(dòng)進(jìn)樣器的針清洗.Purge Injector 與 Needle Wash.洗針溶劑瓶(綠色塑料管)不要放在7

5、17plus的上部，應(yīng)放于717plus同一水平面.洗針溶劑根據(jù)流動(dòng)相的不同應(yīng)有不同：流動(dòng)相洗針溶劑緩沖溶液，反相50% 水 50% 甲醇純緩沖溶液100% 水非水溶液，反相100% 甲醇正相流動(dòng)相GPC流動(dòng)相離子交換對(duì)離子試劑的水溶液異丙醇異丙醇？液相色譜系統(tǒng)的清洗與鈍化液相色譜系統(tǒng)的清洗與鈍化一般采用30磷酸作為清洗劑，用6M硝酸作為鈍化劑，先清洗再鈍化清洗的目的是去除不銹鋼管路及系統(tǒng)內(nèi)的污垢鈍化的目的是使不銹鋼管路的內(nèi)表面形成光滑均勻的氧化膜高效液相色譜的維護(hù)與保養(yǎng)高效液相色譜的維護(hù)與保養(yǎng)色譜柱的使用及保養(yǎng)測(cè)柱效測(cè)柱效 良好的色譜實(shí)驗(yàn)習(xí)慣良好的色譜實(shí)驗(yàn)習(xí)慣拿到一根新色譜柱時(shí)，先測(cè)柱效保留

6、在新色譜柱上測(cè)得的色譜圖，并記錄色譜測(cè)試條件定期檢測(cè)柱效定期檢測(cè)儀器的譜帶展寬測(cè)柱效的方法測(cè)柱效的方法色譜柱種類繁多,性能各異,測(cè)定方法亦各不相同Waters的色譜柱均附有Use and Care說(shuō)明書(shū),可按說(shuō)明書(shū)所述方法測(cè)定以下是Waters反相C18柱的測(cè)定方法:.流動(dòng)相:乙腈/水=60:40;流速:1ml/min.樣品:50mg Acenaphthene(二氫苊)溶于100ml乙腈,加入600l丙酮.進(jìn)樣量5l.檢測(cè)波長(zhǎng):254nm計(jì)算色譜柱的柱效計(jì)算色譜柱的柱效 N N理論塔板數(shù)計(jì)算公式：Ws 方法Wtan16切線法Wh5.54半峰高半峰高W3s9 3sW4s16 4sW5s25 5s

7、21WVNs色譜柱的正確使用及操作色譜柱的正確使用及操作流動(dòng)相的轉(zhuǎn)換.特別是GPC柱流速(壓力)的變化幅度：0.1ml/min.凝膠柱（GPC及糖柱）溫度的變化幅度專用色譜柱 樣品及溶劑的要求記記住住拿拿到到一一根根從從未未用用過(guò)過(guò)的的色色譜譜柱柱時(shí)時(shí) 一一定定要要先先看看其其使使用用說(shuō)說(shuō)明明！色譜柱與儀器的聯(lián)接色譜柱與儀器的聯(lián)接不同公司的色譜柱接頭不同。處理不當(dāng)時(shí)會(huì)造成嚴(yán)重后果：.色譜峰展寬（死體積）致使柱效下降或滲漏解決辦法：.自制相應(yīng)的轉(zhuǎn)換接頭.使用“通用”型接頭（錐箍及螺母）這種錐箍在不銹鋼管上是活動(dòng)的，即stop-depth長(zhǎng)度可調(diào)。因此可以換接不同的色譜系統(tǒng)及色譜柱。從Waters

8、 Phase Separations公司能得到一些PEEK工程塑料的接頭,可用在各種類型的色譜柱上。色譜柱的聯(lián)接色譜柱的聯(lián)接各種錐箍和管路接頭長(zhǎng)度示意圖:譜帶展寬譜帶展寬連接適當(dāng)連接不妥由于色譜柱連接不當(dāng)引起的譜帶展寬，機(jī)械問(wèn)題色譜柱安裝及連接的機(jī)械因素色譜柱安裝及連接的機(jī)械因素連接不妥，造成漏液色譜柱的在線保護(hù)裝置色譜柱的在線保護(hù)裝置給色譜柱提供物理的保護(hù).除去樣品及流動(dòng)相中的顆粒給色譜柱提供化學(xué)的保護(hù).防止分析柱被化學(xué)污染裝置.在線過(guò)濾器.自裝填料保護(hù)柱.預(yù)裝保護(hù)柱在線過(guò)濾器在線過(guò)濾器In-Line Filter，部件號(hào) WAT084560.防止顆粒在色譜柱頭累積.優(yōu)點(diǎn)：基本不影響柱效.在

9、需要高柱效的分析時(shí)中常用（如：氨基酸分析）可更換的消耗品.更換濾芯，部件號(hào) WAT005139 (5/pkgs).更換墊圈，部件號(hào) WAT084567 (10/pkgs)保護(hù)柱保護(hù)柱可避免化學(xué)污染新型保護(hù)柱可提高整個(gè)色譜柱的柱效，甚至可作為色譜柱使用保護(hù)柱選擇：選用與色譜柱相同的填料.真正起到保護(hù)作用.保證色譜分離結(jié)果 使用保護(hù)柱延長(zhǎng)色譜壽命實(shí)例：磺胺藥物分析相同保護(hù)柱與色譜柱：第950次進(jìn)樣更換新Sentry Guard保護(hù)柱：第951次進(jìn)樣使用配Symmetry C8保護(hù)柱的色譜柱：首次進(jìn)樣色譜柱的保護(hù)色譜柱的保護(hù)色譜柱的清洗色譜柱的清洗對(duì)所做的樣品要有充分的了解用對(duì)該樣品洗脫能力最強(qiáng)的流動(dòng)相清洗硅膠柱的一般方法先用甲醇洗去極性雜質(zhì)用干燥的二氯甲烷、正庚烷100200ml依次活化鍵合相柱(烷基)的一般方法20倍柱體積的：甲醇-氯仿-甲醇-水依次沖洗若使用緩沖液，需先用不含鹽的水溶液清洗記記住住每每種種色色譜譜柱柱可可能能有有特特定定的的方方法法 一一定定要要先先看看其其使使用用說(shuō)說(shuō)明明！色譜柱的存放色譜柱的存放存放前的處理.除去雜質(zhì)、緩沖鹽合適的存放溶劑避免色譜柱床的干涸避免機(jī)械震動(dòng)防止細(xì)菌生長(zhǎng)注意存放的溫度正確使用色譜柱（一）正確使用色譜柱（一）流動(dòng)相方面.除去微粒.純度的要求超純水，梯度實(shí)驗(yàn)時(shí)水中有機(jī)雜質(zhì)含量要低緩沖液的pH值，在填料的允許范圍內(nèi)緩沖液（鹽）的