試驗三發(fā)芽測定

1、實驗三發(fā)芽測定一、目的在室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)條件下測定種批的最大發(fā)芽潛力，使測定結(jié)果能在最接近于隨機(jī)樣本變異的范圍內(nèi)重現(xiàn)，據(jù)此比較不同種批的品質(zhì)并估計田間播種價值。二、定義1 .發(fā)芽室內(nèi)測定一粒種子發(fā)芽，是指幼苗出現(xiàn)并生長到某個階段，其基本結(jié)構(gòu)的狀況表明它是否能在正常的田間條件下進(jìn)一步長成一株合格苗木。2 .發(fā)芽率質(zhì)量檢驗證書上填報的發(fā)芽率，是在附錄B表B1規(guī)定的條件下及其規(guī)定的期限內(nèi)生成正常幼苗的種子粒數(shù)占供檢種子總數(shù)的百分比。3 .幼苗基本結(jié)構(gòu)對于幼苗繼續(xù)生長成合格苗木必不可少的結(jié)構(gòu)。隨所檢樹種而不同，組成幼苗的是以下某些基本結(jié)構(gòu)的特定組合：根系、胚軸、子葉、初生葉、頂芽以及禾本科、棕楣科的芽鞘。4

2、.正常幼苗表現(xiàn)出具有潛力，能在土質(zhì)良好，水分、溫度、光照適宜的條件下繼續(xù)生長成為合格苗木的幼苗。符合下列類型之一的可以劃為正常幼苗：a）完整幼苗：該樹種應(yīng)有的基本結(jié)構(gòu)全都完整、勻稱、健康、生長良好；b）帶輕微缺陷的幼苗：該樹種應(yīng)有的基本結(jié)構(gòu)出現(xiàn)某些輕微缺陷的幼苗，但其他方面正常，生長均衡，與同次測定中完整幼苗的其他方面不相上下；c）受到次生性感染的幼苗：顯然本該屬于上述a）類或b）類但受真菌或細(xì)菌感染的幼苗，條件是該粒種子不是感染源。5 .不正常幼苗表現(xiàn)出沒有潛力，在土質(zhì)良好，水分、溫度、光照適宜的條件下不能長成合格苗木的幼苗。不正常幼苗有三種類型：a）損傷苗：任何基本結(jié)構(gòu)缺失，或損傷嚴(yán)重?zé)o法

3、恢復(fù)正常，不能指望均衡生長的幼苗；b）畸形苗或不勻稱苗：生長孱弱或生理紊亂，或基本結(jié)構(gòu)畸形或失衡的幼苗;c）腐壞苗：由于原發(fā)性感染（即該粒種子就是感染源），該樹種的任何基本結(jié)構(gòu)染病或腐壞，停止正常生長的幼苗。6 .多苗種子單位能夠產(chǎn)生多株幼苗的種子單位。有以下幾種類型：a）種子單位內(nèi)含的真種子多于一粒，例如柚木（Tectonagrandis）的堅果和楝樹（Meliaazedarach）的核果；b）真種子內(nèi)含的胚多于一枚。有些種這是正?，F(xiàn)象（多胚現(xiàn)象），有些種則是偶爾出現(xiàn)（孚生現(xiàn)象）。如果是李生胚，通常是其中一株幼苗弱小纖細(xì)，但偶爾也會是兩株幼苗都接近正常大??；c）融合胚：偶爾會從一粒種子中生出

4、兩株融合在一起的幼苗。7 .未萌發(fā)粒在附錄B表B1給定的測定條件下測定期結(jié)束時仍未發(fā)芽的種子。可以區(qū)分成幾個類型：a）硬粒：在測定條件下未能吸水而在測定期未仍然堅硬的種子。一種休眠形態(tài)，常見于豆科，也能出現(xiàn)于其他某些科；b）新鮮粒，在測定條件下能夠吸水但發(fā)芽進(jìn)程受阻，外形依舊良好，堅實硬朗,仍然具有生出正常幼苗潛力的種子；c）死亡粒：測定期未既非硬粒，又非新鮮粒，又未萌出幼苗任何結(jié)構(gòu)的種子，通常包被物極軟、變色、發(fā)霉且毫無生出幼苗的征兆；d）其他類型根據(jù)送檢單位的要求，未萌發(fā)粒還可以細(xì)分為以下幾類，它們在測定樣品中所占的百分?jǐn)?shù)填入質(zhì)量檢驗證書的備注欄：空粒一一完全空癟或僅含某種殘遺組織的種子；

5、澀粒一一杉木、柳杉胚珠受精后敗育，內(nèi)含物為紫黑色單寧類物質(zhì)的種子；無胚粒一一種子內(nèi)有新鮮胚乳或配子體組織，但其中既無胚腔，也沒有胚；蟲害粒一一內(nèi)有昆蟲的幼蟲或蟲糞或有其他跡象表明受到過昆蟲浸害，影響發(fā)芽能力的種子。三、發(fā)芽床用作發(fā)芽床的紙應(yīng)是疏松、通氣、無毒、容易向種子不斷提供水分的濾紙或其他類型的紙，或者是潔凈無毒的紗布、脫脂棉。種子排放在床面。為了向種子提供足夠的水分，可以用多層的紙，也可以在紙下加墊紗布或脫脂棉。作床材料的pH值應(yīng)在6.07.5范圍內(nèi)。發(fā)芽測定用紙應(yīng)在干燥涼爽的室內(nèi)存放并適當(dāng)包裝，避免污損破傷，必要時使用前應(yīng)當(dāng)滅菌，消除存放期中可能感染的霉菌。2 .沙床作床的沙應(yīng)當(dāng)顆粒均

6、勻一致，能通過直徑為0.8mm的篩孔，而截留在孔眼直徑為0.05mm的篩子上，沙必須無菌無毒，不含任何種子。沙的pH值應(yīng)在6.07.5范圍內(nèi)。沙不能重復(fù)使用。3 .土床只有在紙床、沙床上發(fā)芽的幼苗出現(xiàn)植物毒性癥狀，或者對紙床上的幼苗的鑒定發(fā)生懷疑時，才可以使用質(zhì)地疏松、結(jié)構(gòu)良好、不會板結(jié)的壤土作床，使用時不能擠壓。質(zhì)地緊密的土壤應(yīng)適當(dāng)混加蛭石或沙。土中不能混有任何種子。土的pH值應(yīng)在6.07.5之間。土不能重復(fù)使用。四、發(fā)芽設(shè)備1 .發(fā)芽盒用于紙床的帶蓋的、內(nèi)具有孔隔板的透明發(fā)芽容器。盒的長度和寬度應(yīng)能容納四次或至少兩次重復(fù)的種粒。盒高應(yīng)略大于受檢樹種正常幼苗的高度。發(fā)芽床鋪放在具有孔眼的隔板

7、上。隔板同盒底之間的空間用于存水，使盒內(nèi)的相對濕度盡可能接近100%。2 .直立板發(fā)芽盒有機(jī)玻璃制成的長方形盒，盒高約20cm。盒內(nèi)可以垂直嵌入若干塊中心距約2cm的有機(jī)玻璃板。在玻板頂邊之下適當(dāng)距離處播放一排種子并覆以同玻板等大的濕濾紙。濾紙下端浸入盒底的水中向種子供水。改變?yōu)V紙下端入水的深度可以控制供水量。蓋上盒蓋可以保持盒內(nèi)空氣濕度。從玻板的反面可以清晰地觀察種子的發(fā)芽狀況。3 .帶有水箱的發(fā)芽裝置主體是鍍鋅鋼板或不銹鋼板制作的水箱，水箱頂板上排放鐘形發(fā)芽皿。鐘形發(fā)芽皿的芯帶穿過頂板上的孔眼或窄縫伸入水箱吸水。水溫由控溫器控制，為發(fā)芽環(huán)境提供所需的溫度。水箱上方懸放冷白熒光燈管。4 .發(fā)

8、芽箱能調(diào)控溫度、濕度和光照的密閉箱體。好的發(fā)芽箱應(yīng)具有加熱和降溫兩個系統(tǒng)，隔熱性能良好，能提供發(fā)芽所需的光照條件，且能控制濕度，能使箱內(nèi)的相對濕度接近100%0箱內(nèi)的隔板承放紙床，直接排放供檢樣品。隔板的間距應(yīng)使同一時間里能夠測定盡可能多的樣品。五、測定程序1 .提取測定樣品測定樣品從凈度分析所得的、經(jīng)過充分混拌的純凈種子中按照隨機(jī)原則提取?？梢杂盟姆址▽⒓儍舴N子區(qū)分成4份，從每份中隨機(jī)數(shù)取25粒組成100粒，共取4個100粒，即為4次重復(fù)。種粒大的，可以將100粒的每個重復(fù)以50?；?5粒為組，以組為單位在發(fā)芽床上排放，由這樣的2個組或4個組組成1次重復(fù)，使種粒之間有足夠的距離。附錄B表B1

9、規(guī)定采用稱量發(fā)芽測定法的樹種，或因種粒特小決定采用稱量發(fā)芽測定法的其他樹種，用符合第3章規(guī)定的程序從送檢樣品中提取測定樣品，共取4個重復(fù)。每個重復(fù)的重量見附錄B表B1。2 .測定樣品的預(yù)處理對測定樣品作預(yù)處理的目的是解除休眠。預(yù)處理的方法已分樹種列在附錄B表B1的備注欄。也可以采用其他有效的預(yù)處理方法，但必須在質(zhì)量檢驗證書中注明。附錄B表B1所列的測定時間不包括預(yù)處理時間。帶翅的種子可以去翅，但不能傷及種子。3 .置床和管理(1)種粒在發(fā)芽床上應(yīng)保持一定距離，避免病菌蔓延、根系纏繞，也便于點數(shù)。(2)采用沙床(土床)時，需光種子壓入沙(土)的表層，忌光種子播在疏松而平整的沙(土)之上，再均勻疏

10、松地加蓋厚度為1020mm的沙(土)。(3)發(fā)芽容器和直立板發(fā)芽盒中的直立板應(yīng)當(dāng)編號。(4)經(jīng)常檢查測定樣品及其水分、通氣、溫度、光照條件。檢查的間隔時間由檢驗機(jī)構(gòu)根據(jù)樹種特性和樣品狀況等自行確定。輕微發(fā)霉的種?？梢話鲎髑逅疀_洗后放回原發(fā)芽床。發(fā)霉種粒較多的要及時更換發(fā)芽床或發(fā)芽容器。4 .測定條件(1)水發(fā)芽床的用水不應(yīng)含有雜質(zhì)。水PH值應(yīng)在6.07.5之間。如果當(dāng)?shù)氐乃|(zhì)不符合要求，可以使用蒸儲水或去離子水。發(fā)芽床應(yīng)始終保持濕潤，不斷地向種子提供所需的水分。但供水過量也會影響種子的通氣。對種子的供水量取決于受檢樹種的特性、發(fā)芽床的性質(zhì)及發(fā)芽盒的種類。各重復(fù)間的供水量應(yīng)當(dāng)一致。(2)通氣置

11、床的種子要保持通氣良好，但不能使發(fā)芽床過度失水而影響萌發(fā)。(3)溫度附錄B表B1所列的溫度是指發(fā)芽床上種子所處水平層次的溫度，因設(shè)備性能而產(chǎn)生的溫度變化不能超過±1C。為發(fā)芽種子提供光照時不能使溫度發(fā)生波動。附錄B表B1列出帶有幅度的溫度指的是變溫，每24h內(nèi)應(yīng)有16h保持較低的那個溫度，其余8h保持較高的那個溫度。溫度的轉(zhuǎn)換最好在3h內(nèi)逐漸完成，休眠性種子可以在1h內(nèi)完成。周末或節(jié)假日不能按要求轉(zhuǎn)換溫度時，應(yīng)使發(fā)芽環(huán)境保持在較低的那個溫度水平上。(4)光除非確已證實某個樹種的發(fā)芽會受到光抑制，否則發(fā)芽測定中的每個24h都應(yīng)當(dāng)給予8h的光照，使幼苗長勢良好，不容易遭受微生物侵害，也便

12、于評定。施加的光指的是不含或極少含遠(yuǎn)紅光的冷白色熒光。提供的光應(yīng)均勻一致地使種子表面接受75012501X的照度。對于變溫發(fā)芽的樹種，是在給予高溫的那個8h內(nèi)提供光照。5 .測定的持續(xù)時間(1)各樹種發(fā)芽測定的持續(xù)時間在附錄B表B1中以末次記數(shù)的天數(shù)表示，自置床之日起算，不包括預(yù)處理的時間。(2)如果測定樣品在規(guī)定時間里發(fā)芽的種粒不多、可以適當(dāng)延長測定時間。延長的時間最多不應(yīng)超過規(guī)定時間的二分之一。如果在規(guī)定的結(jié)束時間之前樣品已經(jīng)充分發(fā)芽，且后期連續(xù)三天每天的發(fā)芽粒數(shù)不超過各重復(fù)供試種子粒數(shù)的1%,則該次測定可以提前結(jié)束。無論是延長還是提前結(jié)束，測定的實際天數(shù)應(yīng)在質(zhì)量檢驗證書中注明。(3)中期

13、計數(shù)的次數(shù)由檢驗機(jī)構(gòu)自行確定，除有特殊要求外，通常不宜過多，盡量減少對尚未充分生長的幼苗造成傷害。6 .觀察、評定和記載(1)發(fā)芽測定的情況要定期觀察記載。觀察記載的間隔時間由檢驗機(jī)構(gòu)根據(jù)樹種和樣品情況自行確定，但初次計數(shù)和末次計數(shù)必須有記載。(2)生長到一定階段，必要的基本結(jié)構(gòu)都已展現(xiàn)的每株幼苗都必須進(jìn)行評定，并在記數(shù)后從發(fā)芽床上揀出。嚴(yán)重腐壞的幼苗也應(yīng)揀出，以免造成次生性感染。呈現(xiàn)其他缺陷的不正常幼苗則應(yīng)保留在發(fā)芽床上直至末次計數(shù)。揀出的幼苗數(shù)同發(fā)芽床上剩余的種粒數(shù)應(yīng)當(dāng)?shù)扔谇耙淮斡涊d時的剩余種粒數(shù)。揀出幼苗時要防止影響正在發(fā)芽生長的幼苗。(3)一個多苗種子單位常能生出兩株或幾株幼苗，都記為

14、一株正常幼苗。(4)測定結(jié)束根據(jù)定義7給出的條件區(qū)分未發(fā)芽粒。六、測定結(jié)果的計算1 .發(fā)芽測定結(jié)束時按定義2計算發(fā)芽率。2 .按表3檢查重復(fù)間發(fā)芽百分?jǐn)?shù)的差異是否為隨機(jī)誤差。如果各重復(fù)發(fā)芽百分?jǐn)?shù)的最大值同最小值的差距沒有超過表3的容許范圍，就用各重復(fù)發(fā)芽百分率的平均數(shù)作為該次測定的發(fā)芽率。表3發(fā)芽測定容許差距平均發(fā)芽百分率最大容許差距1r239925983697479658956993-947-81091-929-101189-9011-121287-8813-141384-8615-171481-8318-201578-8021-231673-7724-281767-7229-3418566

15、635-451951-5546-50203.稱量發(fā)芽測定法的測定結(jié)果用單位重量樣品中的正常幼苗數(shù)表示，單位為株/克。計算時，利用表6檢查重復(fù)間的差異是否為隨機(jī)誤差。先計算4個重復(fù)正常幼苗的總數(shù)，在表4第1欄找出該總數(shù)所在范圍，并在第2欄中查到最大容許差距。如果4個重復(fù)中正常幼苗數(shù)的最大值和最小值之間等于或小于最大容許差距，該次測定可靠，以4個重復(fù)單位重量的正常幼苗數(shù)的平均數(shù)作為測定結(jié)果填報。表4稱量發(fā)芽測定容許差距供檢樣品總重量中的正常發(fā)芽粒數(shù)最大容許差距供檢樣品總重量中的正常發(fā)芽粒數(shù)最大容許差距12H12064161174277-1061751882811-1481892022915-189

16、2032163019-22112172303123-26122312443227-30132452563331-38142572703439-50152712883551-56162893023657-62173033213763-70183223383871-82193393583983-90203593784091102213794024110311222403420421131222342143843123134244394604413514625>46045147160264.重新測定有下列情況之一時應(yīng)重新布置測定。重新測定仍按規(guī)定計算結(jié)果并檢查誤差。a）懷疑是休眠干擾測定結(jié)果時

17、，可以仍按附錄B表B1的發(fā)芽條件，但選用一種或幾種解除休眠的方法重新布置一次或同時布置幾次測定，將其中最好的結(jié)果作為測定結(jié)果填報，并注明所用方法。b）由于病毒或真菌、細(xì)菌蔓延干擾測定結(jié)果時，可以使用沙床或土床重新布置一次或同時布置幾次測定。必要時還可以加大種粒間的距離。將所得的最好結(jié)果作為測定結(jié)果填報，并注明所用方法。c）難于評定的幼苗數(shù)量較多而干擾測定結(jié)果時，可以仍按附錄B表B1的發(fā)芽條件，用沙床或土床重新布置一次或同時布置幾次測定。將所得的最好結(jié)果作為測定結(jié)果填報，并注明所用方法。d）由于測定條件、幼苗評定或計數(shù)顯然有誤時，應(yīng)當(dāng)按原用方法重新測定，并填報重新測定的結(jié)果。e）由于其他不明因素使得各重復(fù)問的最大差距超過表3規(guī)定的容許誤差時，應(yīng)當(dāng)提取測定樣