唾液淀粉酶最適pH值的測定小論文

1、唾液淀粉酶最適pH的測定作者 地址摘要：目的：本實驗的目的是掌握測量pH對酶活力影響的基本原理和方法，了解pH對酶活力的影響。方法：將唾液淀粉酶置于不同pH環(huán)境中可改變其活性，利用唾液淀粉酶能夠催化淀粉的水解，剩余淀粉與碘絡合變成藍色。單位時間內(nèi)，被水解的淀粉量可以反映淀粉酶的活性，通過測定吸光度判斷淀粉分解程度，而判斷酶的活性，吸光度低的對應pH即為酶的最適pH；結(jié)果：唾液淀粉酶的最適pH的參考值為6.8。關(guān)鍵詞：唾液淀粉酶、吸光度、緩沖液、前言：新陳代謝是生命活動的基礎，生物體內(nèi)一切化學反應，幾乎都是在酶的催化作用下進行的，只要有生命的地方，就有酶在起作用，生命不能離開酶而存在。酶的獨特的

2、催化功能，使它在工、農(nóng)業(yè)和醫(yī)療衛(wèi)生等領(lǐng)域具有重大實用意義。酶的高效性和專一性，及其不需要在高溫、強酸、強堿條件下作用的特點是普遍化學催化反應所無法比擬的。酶的研究成果給催化理論、催化劑的設計、藥物的設計和作用原理的了解、疾病的診斷和治療以及遺傳和變異等方面提供了理論的依據(jù)和新的概念。酶量與酶活性的改變都會引起代謝的異常乃至生命活動的停止。而酶的活性往往取決于溫度、pH等，對于人體而言，一方面，人體內(nèi)環(huán)境的變化會導致體內(nèi)酶活性的改變，影響新陳代謝；另一方面，體內(nèi)酶活性的改變恰恰可能表明人體內(nèi)環(huán)境出現(xiàn)紊亂。臨床上可用酶活性的檢測來輔助診斷疾病。正文：一、 實驗材料: 儀器：試管、燒杯、吸量管、移液

3、槍、洗耳球、恒溫水浴箱、分光光度計、坐標紙等。試劑：0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液、0.2mol/L磷酸二氫溶液、蒸餾水、唾液淀粉酶液、碘液、0.5g/L淀粉溶液等。二、實驗原理：本實驗在其他條件相同，而pH不同的條件下，利用淀粉酶能夠催化淀粉的水解，剩余淀粉與碘絡合變?yōu)樗{色，而酶活性越高，剩余淀粉量越少，呈色越淺。此為定性觀察。然后進一步利用Lambert-Beer定律判定溶液的吸光度與溶液的濃度符合一定的比例關(guān)系。不同PH環(huán)境中唾液淀粉酶與淀粉的反應程度不同，溶液濃度不同，吸光度值也不同。因此，通過測量剩余淀粉量與碘反應產(chǎn)生的藍色溶液在660nm處的吸光度值，可以了解pH對酶促反應的影響，

4、所測得吸光度最小的溶液其pH值即為唾液淀粉酶的最適pH。三、實驗步驟1. 緩沖溶液的配制以磷酸氫二鈉磷酸二氫鈉作為緩沖液（pH6.07.6），用0.2mol/L Na2HPO3溶液和0.2mol/L NaH2PO3溶液混合，再加蒸餾水稀釋到10ml。如下圖：取9支大試管進行編號1-9，分別按下表加入試劑。編號pH0.2mol/L磷酸氫二鈉(ml)0.2mol/L磷酸二氫鈉(ml)16.00.6154.38526.20.9254.07536.41.3253.67546.61.8753.12556.82.4502.55067.03.0501.95077.23.6001.40087.44.0500.

5、95097.64.3500.6502.唾液淀粉酶液制取漱口12次，然后含一大口水，期間做咀嚼運動， 1min后收集于燒杯中。3.淀粉用量的確定表2 實驗組和空白對照組設置表 用量（ml）實驗組 1 2 3 空白組pH=7的緩沖液 0.9 0.9 0.9 0.92.5g/L淀粉 0.1 0.2 0.3 唾液（稀釋10倍） 0.1 0.1 0.1 0.1H2O 5.9 5.8 5.7 6.0混勻，37水浴5 min，然后向每管加2滴碘液。 混勻，觀察現(xiàn)象,哪組淀粉溶液顏色反應最淺，則選擇該管做下一步實驗。結(jié)果：經(jīng)觀察，確定實驗組1（淀粉用量為0.1）時顏色最淺，即選擇用量為0.1ml的0.5g/L

6、淀粉溶液4. 唾液稀釋倍數(shù)的選取 表3 不同稀釋倍數(shù)的酶液 用量（ml）稀釋倍數(shù)51015202530酶液1.00.50.40.250.20.2蒸餾水4.04.55.64.754.85.8 表4 最適稀釋倍數(shù)的確定 用量(ml)2.5g/L淀粉溶液0.1稀釋酶液0.1蒸餾水6.0混勻，37攝氏度水浴7.5分鐘，加兩滴碘液經(jīng)實驗觀察，稀釋5倍的試管所對應的顏色最淺，最適宜，故選擇5倍的唾液淀粉酶液5.最適PH的測定。取10支小試管,進行編號,按下表加入試劑。進行測定。 用量（ml）試劑1（6.0）2（6.2）3（6.4）4（6.6）5（6.8）6（7.0）7（7.2）8（7.4）9（7.6）緩沖

7、溶液0.80.80.80.80.80.80.80.80.8稀釋酶液0.10.10.10.10.10.10.10.10.1淀粉溶液0.10.10.10.10.10.10.10.10.1混勻，置于37攝氏度水浴保溫7.5分鐘碘液兩滴兩滴兩滴兩滴兩滴兩滴兩滴兩滴兩滴蒸餾水6.06.06.06.06.06.06.06.06.0吸光度值測定試劑123456789A6600.0870.1170.2010.0620.0570.0700.0680.1330.1436.實驗數(shù)據(jù)處理以A660為縱坐標，pH值為橫坐標，作最適pH曲線。結(jié)果：討論：參考文獻1、 吳耀生.醫(yī)學生物化學與分子生物學實驗指南.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007.22、 北京大學化學與分子工程學院分析化學教學組.基礎分析化學實驗.北京：北京大學出版社，20103、 覃甲仁、賴友華.生物化學實驗.南寧：廣西民族出版社，19944、 黃如彬.生物化學實驗教程（高等醫(yī)學院校教材）.第2版.北京：世界圖書出版公司，19995、 馮仁豐.實用醫(yī)學檢驗學.上海：上海科學技術(shù)出版社，19966、 徐秀蘭.生物化學實驗與指導.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，19947、 姜泊、張亞歷、周殿元.分子生物